C12N 15/00 — Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев

Номер патента: 1454853

Опубликовано: 30.01.1989

Авторы: Прасолов, Рубцов, Серов, Скрябин, Чумаков

МПК: C12N 15/00, C12N 5/00

Метки: гормона, используемый, клеток, крысы, культивируемых, роста, человека, штамм

...клеток с 42 хромосомами (347) (2 п=42 для крысы) и 40 хромосомами ,32%). Дифференциальной окраски хромосом не проводят, маркерных хромосом не выявлено.Контроль штамма Ка-ЫН 14 на контаминацию. При обследовании клеток штамма на стерильность (наличие бактерий, грибов, микоплазм) были получены отрицательные результаты на уровнях 11, 20 и 3 пассажей.Устойчивость к антибиотикам, В результате генетической трансформации штамм приобрел устойчивость к антибиотику неомицинового ряда С 418 (до 500 мкг/мл ростовой среды).Продукция гормона роста человека штаммом ВСКК(П) 136 Д, Продукцию гормона роста человека клетками ВСКК(П) 136 Д тестируют методом радиоиммунопреципитации и .КТА с использованием кроличьей поликлональной сыворотки к 1 ъ".Н. Для...

Номер патента: 1456468

Опубликовано: 07.02.1989

Авторы: Вертиев, Гинцбург, Ильина, Ливанова, Смирнова, Янишевский

МПК: A61K 35/74, C12N 1/20, C12N 15/00 ...

Метки: viвriо, бактерий, огава, продуцент, серовара, сноlеrае, токсина, холерного, штамм

...штамма Ч.сЬо 1 егае сйо 1 егаеК 068 засевают на агар Хоттингера 15рН 7,6, содержащий 5 мкг/мл тетрациклина или 50 мкг/мп канамицина иинкубируют 18 ч при 37 С.Для количественного определенияхолерного экзотоксина используют 20иммуноферментный метод СшЕЫБА. Вкачестве контроля и для определениячувствительности метода используюточищенный. препарат холерного токсина.Клетки штамма КМ 68 и исходного штамма Дакка 35 в объеме 10 мл выращивают 18 ч при 30 С в 0,.1 л колбах всреде, содержащей Зказаминовых кислот и 0,5 Х .дрожжевого экстракта прирН 7,6. Клетки осаждают центрифугированием, в супернатанте определяютэкзотоксин. Пробы инкубирут в течениечаса в сенсибилизированной ганглиозидами поверхности. лунок микроплат.Инкубацию с...

Номер патента: 1458825

Опубликовано: 15.02.1989

Авторы: Клепиков, Павлова, Хрусталев, Шевякова

МПК: C12N 15/00, G01N 33/50

Метки: генетической, инбредных, линий, мышей, однородности

...сывороткой анти-Н".Таким образом, полученные полиспецифические аллоантисыворотки можно использовать как с применением макро- метода гемагглютинации в пробирках, так и с применением микрометода гемагглютинации в микрокамере для иммунологических реакций.П р и м е р 3. Использование предлагаемого способа для контроля генетической однородности мышей инбредных линий. Способ осуществляют аналогично примеру 2, но в микрокамеры раскапывают по 10 мкл буфера, содержащего 0,9% нормальной мышиной сыворотки, Полученная аллоиммунная сыворотка хорошо выявляет гаплотип, против антигенов которого она получена,П р и м е р 4. Способ осуществляют аналогично примеру 2, но в микрокамеры раскапывают по 10 мкл буфера, содержащего 1,1% нормальной сыворотки....

Номер патента: 1460076

Опубликовано: 23.02.1989

Авторы: Федосцева, Шакарова

МПК: C12G 1/06, C12N 15/00

Метки: sасснаrомyсеs, vini, дрожжей, используемый, производства, советского, шампанского, штамм

...производственный штамм дрожжей вида ЯассЬаговусез ч 1 пх Штейнберг 1892, В процессе вторичного брожения вина следят за изменением содержания сахара.По окончании брожения вина до марки "брют" обнаружено, что штамм дрож жей оказывает существенное влияниена окислительно-восстановительныефбиохимические, физико-химические показатели шампанского, а также ароматообразующие вещества, определяемые 20общепринятыми в энохимии методиками.Установлено, что по.органолептическим качествам и химическому составу образцы шампанского, сброженного на штаммах ВКПМ Уи Штайнберг 251892, существенно различаются (табл, 1).Так, дрожжи Басспаговусез вопд ВКПМУснижают ОВ-потенциал и усиливают восстановительную способностьвина в большей степени, чем Штейнберг 1892....

Номер патента: 1463760

Опубликовано: 07.03.1989

Авторы: Рогаев, Шапиро

МПК: C12N 15/00

Метки: ptur1-6, днк, идентификации, межиндивидуального, плазмидная, полиморфизма, рекомбинантная, человека

...ДНК-дезокситрифосфатов и рольной чашке и на идентичные места 5 е.а. ДНК-полимеразы 1. Реакционную на круглый нитроцеллюлозный фильтр смесь, имеющую конечный объем 100 мкг, диаметром 8,5 см, лежащий на поверх инкубируют 20 мин при комнатной темности агара с тетрациклином (Тс) во пературе и 2 ч при 1 О С. Удельная второй чашке. После подращивания ко- активность меченых препаратов составлоний при 37 ОС 15 ч контрольную чашку ляет 6,8 10имп/мин/мкг. На каждый хранят при 4 С в перевернутом поло- фильтр суммарно наносится 4:10имп/ жении, а бактерии на нитроцеллюлозиом 45 /мин меченого препарата ДНК, фильтре лиэируют. Для этого каждый Гибридизацию проводят при 42 С фильтр помещают на поверхность бума ч, Затем фильтры отмывают в двух ги 3 мм,...

Номер патента: 1471949

Опубликовано: 07.04.1989

Авторы: Джозеф, Джон, Уолтер

МПК: C12N 15/00

Метки: бычий, гормон, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, роста

...Осуществляют процедуру такимже образом, как описано в примерах5(А) - (С), в которых использовалисьЕ, со 1 х КРЛ, Е. со 11 НВ 101, Е. со 11РР 50 или Е. со 1 ПРЯ иф Р, вместоЕ. со 1, Х 1776, Все условия идентичны и получают идентичные результаты.П р и м е р б. Для осуществления данного примера получают сДНК,кодирующую предшественник.гармонароста, как описано в примере 1. Вводят линкеры Нпй 111 и кДНК обрабатывают посредством Нпи 1 111 илиНзц 1, как описано в примере 4(А).Плазмиду рС 194, изолированнуюиз Б. ацгеце, используют в качествевектора, рС 194 расщепляют в зонеНпс 1 1 .1 посредством Нпй 111 илиНяц 1 и затем подвергают обработкещелочной фосфатазой,Полученную кДНК соединяют с расщепленной рС 194. Осуществляют трансформацив В. зцЬг 11...

Номер патента: 1479004

Опубликовано: 07.05.1989

Авторы: Есихиро, Кензо, Масаери

МПК: C12N 15/00

Метки: pvm061, вектора, конструирования

...полученныерЧ М 058, затем смеп 1 ивяют с 0,3 мкгФрагментов рКЕИ 045 длиной 5,0 тыс,оснований и обрабят 1,1 вают 400 ел.Т 4 ДНК-лигязы в э мкл лигазнаго буфера, содержащего 0,8 ммоль/л АТФ,при 2,5 С в течение б ч. Десятьмикролитров легированной смеси используют для трансформации Е, со 1штамма И 620 гесА, КККТ, Виотбирают резистентные к ямпипиллинутрансформанты, используя Х-гал, Появление белых колоний подтвердиловставление гена 1 асв сайт Нкпс 11,расположенный ниже от гена Ап 1 р 1, 25Эта трансформация дает плазмиды,несущие ген Тасв двух рязличнь 1 хориентациях. Плаэмиды с этой структурой обозначены рЧ М 06 (рТИ-ТТТ,А-). 30Есть несколько методов конструирования плазмид рТМ-ТТТ, соответствующих рамкам считывания Аи А Если имеются в наличии...

Номер патента: 1479005

Опубликовано: 07.05.1989

Авторы: Гадатсугу, Дзундзи, Масами, Нобуказу, Харуо, Хироси

МПК: C12N 15/00, C12P 21/00

Метки: интерлейкина-2, человека

...единственныйсайт РяС 1 в направлении вниз сразупосле полученного ранее промотораЯЧ 40.Вставку кДНК-плазмиды р 1 Ы 2-50 Аотсекают путем рассечения ферментомРя 1 1 и подвергают лигации с рСЕ,рассеченным РяС 1, с целью построениярСЕ 1 о, в котором экспрессия структурного гена ИЛдолжна осуществляться под контролем ранее вставленного промотора ЯЧ 40, Плазмида рСЕ ранее строилась для клонированиякДНК методом Г-С-концов в бактериии прямой экспрессии в клетках млекопитающего, 35 40 45 50 дые 24 ч 500 мл среды заменяют свежей средой, Каждую порцию среды, собранную в определенный момент времеони, хранят при 4 С до использования. Спустя 2-3 дня после трансфекции культуральную среду анализируют на активность ИЛчеловека,Как показано в табл. 1,...

Номер патента: 1479516

Опубликовано: 15.05.1989

Авторы: Коротяев, Шишкина

МПК: C12N 15/00

Метки: coli, r-плазмид, бактерий, еsснеriснiа, идентификации, предназначенный, штамм

...прямых палочек.величиной 1,5-3,0 х 0,3-0,5 мкм,слабо подвижны перитрихи, спор икапсул не образуют, грамотрицательны,Культуральные признаки. На мясопептонном агаре колонии слегка выпуклые, полупрозрачные, с ровными краями, диаметр колоний 1-3 мм, на кровяном МПА круглые колонии без зоны гемолиза, полупрозрачные, на среде 15Энда круглые колонии, окрашенные втемно-красный цвет с металлическимблеском, на голодной среде с метионином и пролином плоские, полупрозрачные колонии размером 1-3 мм (ауксотроф по метионину и пролину),на мясопептонном бульоне образует равномерное помутнение и осадок.Физиологические признаки. Е,со 1Вне образует оксидаэу, расщепляет глюкозу с образованием кислотыи газа, ферментирует арабинозу, лактозу, мальтозу, манноэу,...

Номер патента: 1491345

Опубликовано: 30.06.1989

Авторы: Вильям, Говард, Грем, Рэймонд

МПК: C12N 15/00

Метки: кислоты, кодирующего, нуклеиновой, проинсулин, фрагмента, человека

...концы, которые не являются комплементарными концами 375 Ьр кДНК-фрагментаОбъединенный фрагмент, содержащий синтетическую последователъность для метионина (1-13 аминокислот), и встречающаяся в природе последовательность кодирования для аминокислот 14-86 проинсулина составляет последовательность кодирования для проинсулина.Проинсулин-кодирующую последовательность конструируют избирательным разрывом у внутреннего положения в проинсулин-кодирующей области с последующим пришиванием химически синтезированной последовательности, кодирующей ту часть проинсулин-кодирующего участка, который удален предшествующим расщеплением, Плазмиду рсН 1-1 используют в качестве источника проинсулин-кодирующего участка, который избирательно исключают...

Номер патента: 1491346

Опубликовано: 30.06.1989

Авторы: Бригитте, Рональд

МПК: C12N 15/00

Метки: бычьего, гормона, днк, кодирующей, плазмидной, рекомбинантной, роста, синтез, человеческого

...Абс ТТС ТСС ВСС СТС ТТТ ЮСС ААС ССТ СТССТ Ю ААС А 66 ССС САС ААА СБС ГТС ССА С 5 Конструируют указанную линкерную последовательность в соответствии с обычной методикой.Целевые трансформанты, обозначенные Е.со 1 д К 12 КЧ 309/рСЕ 112,2, помещают на ТЧ агар, содержащий соответствующие антибтотики, а затем обычным способом культивируют до получения и выделения плазмиды рСЕ 112,2. Эти трансформанты как показано по дан ным гель-электрофореза, К 1 А и других тестов, экспрессируют шей-ЬСН с вы 6 АС, ОЛТ ТДД АТС ттт сст ССТ в 1 111 111 11 Т 11 . 111, 11 СТС СТА АТТ ТАС ддд ОСА ССЯ ДАС ССТ СТ 6 СТ 311 111 1ТГО ССА С У 5 СТДОД 666 ТАТТЛЛТА, 1.1 11 1111 3 ТСССЯТЯАТТДТ АТВ ТСС ТТС ТСС СРС 111 11 11111 11 тдс АСС ДЯС АСС СССАТС фАТ 1 САС111 1 1....

Номер патента: 1495379

Опубликовано: 23.07.1989

Авторы: Грошев, Шахнабатян, Шестаков

МПК: C12N 15/00

Метки: бактерий, мутантов, неспособных, нуклеаз, отбора, синтезу

...И-метил-И-нитро-М-нитроз огуанидином клетки Е. со 11. высевают на индикаторнув среду, содержащую, г/л: толуидиновый синий 0,16; МаС 1 5,0; ДНК 0,3; трис,05; бактотриптон 5,0; дрожжевой экстракт 3,0; МЯЯ 04 х НО 2, 46", глюкоз а 4, 0; агар 20 "Дифко" (Боо 1 е) 15,0, рН 7,6-7,8, и инкубируют 18 ч при 37 С, Поверхность твердой среды заливают хлороформом и инкубируют 3 мин, Хлороформы сливают, чашки подсушивают до полного удаления 25 хлороформа в приоткрытом виде 5 мин и и затем инкубирувт дополнительно 18 ч при 37 С. Регистрируют вокруг колоний клеток, синтезирующих дезоксирибонуклеазы, розовые зоны на темно синем фоне индикаторной среды, Вокруг колоний клеток мутантов, дефектных по синтезу этих ферментов, розовые зоны не...

Номер патента: 1521767

Опубликовано: 15.11.1989

Авторы: Беневоленский, Губакина, Куренная, Машко, Мелешина, Нейстат, Рогожкина

МПК: C12N 1/18, C12N 15/00

Метки: cerevisiae, sасенаgомyсеs, гибридных, дрожжей, крахмала, сбраживания, штаммов

...и имеющей рН 5,4.Этап 2. Отобранные ауксотрофныесегреганты имеют генотип БТА 2 яСа10 айе 5. Далее с ними проводят последовательные бэккроссы на штамм Б.сегечхя 1 ае Р 134, который несет ауксотрофную мутацию в гене Сеп 2. Приэтом среди потомков каждый раз отбирают синтезирующие глюкоамилазу культуры генотипа БТА 2 яа 10. В третьемпоколении были получены культуры, содержащие структурный ген глюкоамилазы и секретирующие глюкоамилазу всреде. Такие культуры хорошо скрещиваются как между собой, так и с типовыми линиями Ы. сегечхвхае, давая гибриды с эффективностью спорообразования 93% и частотой выживаемости спор84%, В результате подтверждается, чтосозданы генетические линии дрожжейБ. сегечхвае указанного генотипа,способные секретировать...

Номер патента: 1521776

Опубликовано: 15.11.1989

Авторы: Войтенок, Добрынин, Коробко, Недоспасов, Панютич, Турецкая, Чувпило, Шахов, Шингарова

МПК: A61K 39/395, C12N 15/00

Метки: активность, антитела, биологическую, гибридных, животных, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклонального, нейтрализующего, некроза, опухолей-альфа, продуцент, фактора, человеческого, штамм

...кроличьими антимьшгиными антителами. Все отмывкипроводят бидистиллированной водой.Контролем служит бычий сывороточныйальбумкц в качестве антигена.Стабильность продукции. ПродукцияьанАТ сохраняется как минимум до 15пассажей 1 п ч 7.сто, Б асцитной формештамм не пассировался более одногораза,Криоконсервирование. Для длительного хранения клетки штамма замораживают в эмбриональной телячьей сыворотке с добавлением 10% диметилсульфоксида. Режим замораживания: 1 С/миндо минус -70 С. После замораживанияклетки переносят в жидкий азот, Разморая(иванне на водяной бане при 37 С,Жизнеспособность клеток после размораживания 60-70% по Окрашиванию три"пановым синим,П р и м е р 1, Гибридамцые клеткипомеШаот в стеклянный Флакон объемомГ50 мл по...

Номер патента: 1523053

Опубликовано: 15.11.1989

Авторы: Аири, Туула, Ханс

МПК: C12N 15/00, C12Q 1/02

Метки: бактерий, вирусов, идентификации, кислот, нуклеиновых, основанный, сэндвич-гибридизации

...бПоследующие клонирования осуществляют уже известными способами с использованием в качестве векторов плазмиды рВ 322 и фагов М 13 тпр 7 и М 13 тпр 8, Ряд фрагментов нуклеиновых кислот приготавливают с использованием ограничительных фрагментов Е соКХ, Ватп НЕ, С 1 а Е и Рзг Е. В табл. 4 приведены размеры данных Фрагментов и векторы, используемые для дальнейшего клонирования, и даны названия образуемых таким путем рекомбинантных плазмид и их использование либо в качестве фильтр-реагентов, либо в качестве меченых пробИсследуют чувствительность ряда нуклеиновых кислот как реагентов в сравнении с непрерывной парой реагентов с использованием способа сэндвич- гибридизации, Образец для испытания в данном случае представляет собой ДНК СМ 7 (ДНК...

Номер патента: 1523055

Опубликовано: 15.11.1989

Авторы: Гюнтер, Клаус, Петер

МПК: C12N 15/00, C12N 9/78

Метки: бактерий, еsснеriснiа, креатинамидиногидролазы, рsеudомоnаs, рuтidа-продуцентов, штаммов

...ЕЭ и клоны ис- дазы представляет степень синтезиро-. пытывают на высокую экспрессивность ванной в колониях креатинамидиногидрогена. лазы. Тест-принцип: креатинамидиноКреатии + Н О гидролаза саркозии е моиезииа Яагс - СЭ Саркозин + ОО + Н О глицин + Формальдегид + Н О РОЭ НсОе + 4 ААР + ЕБР краситель + 2 НеОСостав системы Фильтрующей активности креатинамидиногидролазы показан в табл.1, ЗО П р и м е р 4. Определение актив-. ности креатинамидиногидролазы производят обнаружением образованных в результате реакций с уреазой ионов аммония с тест-комбинацией "мочевина".Дикий тип Рзецйошопав рцэр.Ыа 2440 для определения активности креатинамидиногидролазы инкубируют при 30 С в течение ночи в В-среде (5 мл)) которая содержит 1 Е креатина....

Номер патента: 1530638

Опубликовано: 23.12.1989

Авторы: Войтенок, Панютич, Турецкая

МПК: A61K 39/395, C12N 15/00

Метки: альфа, антитела, гибридных, животных, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклонального, некроза, опухолей, продуцент, фактору, человека, штамм

...н жидкий азот, Размораживание на водяой бане при 37 С, Жизнео,способность клеток после размораживания 65-707. по окрашиванию трипаноным синим.П р и м е р 1. Гибридомные клеткипомещают н стеклянньп Флакон объемом50 мл по 1 х 10 клеток в 5 мл средыбс 107. ЭТС, 2 мМ со -глютамина,100 мкг/мл пенициллина и стрептомицина. 0,05 и меркаптоэтанола, Клетоки культивруют 2-3 дня при 37 С ватмосфере 5",. СО, Полученньй супернатант используют н качеств реагентан иммунохмических реякцях (как препарат монАТ). Тест н определение специфичностинзгимодействия монАТ с ацтигенами,иммобилизонанными на пласгик,Используемый метод: гм;уноферментный анализ.Р ФНО- К, Р ФНГ)-1." и бычий сывороточный альбумин (БСА) в количестве0,5 мкг н 50 мкл 0,1 М...

Номер патента: 1531178

Опубликовано: 23.12.1989

Авторы: Багиян, Ерзинкян, Саруханян, Хачикян, Шахбазян

МПК: C12N 1/18, C12N 15/00

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, дрожжей, используемый, производстве, хлебобулочном, штамм

...р и м е р 1. Жидкие дрожжи наштамме Б.сегечт.э 1 ае ВКПМ Чи расе Ф 14 готовят по следующей схеме,Дрожжи чистой культуры, хранящиесяв пробирке на сусло-агаре, пересеваютв колбочку емкостью 200 мл, наполненную наполовину стерильным солодовымсуслом с концентрацией 8 . С.В, Разомножение 1 сут при 34 С,Содержимое колбочки переливают вдвухлитровую колбу с 900 мл стерильного солодового сусла. Размножение1 с при 32 С.Полученную чистую культуру дрожжейвносят в охлажденную до 30 С сладкуюзаварку в количестве 10 от ее объема и оставляют для брожения. Сладкаязаварка готовится из пшеничной муки11 сорта влажностью 78% с соот ношением муки и воды (М:В) 1:3. Температура заварки при заваривании должнабыть 67 С. Время брожения сладкойзаварки при...

Номер патента: 1532585

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Грубер, Дебов, Карягина, Лопатина, Лунин, Никольская-Санович, Поляченко

МПК: C12N 15/00

Метки: бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, метилазу, метилазы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, штамм

...Бяо 11 в клетках, несущих плазмиду с 1 33, не происходит.Плазмидную ДНК о 33 подвергают рестрикционному анализу.Характеристика штамма.2585 6Е. со 1, трансФормированных плазми"дой й 33.ШтаммТ 15 чения характера метилирования Яяо 11 20 25 30 40 45 50 55 5 153Клетки прямые, палочковидные, неподвижные, грамотрицательные, лактозопозитивные. При рассеве на чашкис 1,3%-ным МПА рост в виде отдельных,колонии, иногда в К-форме с неровными5краями. Хорошо растет на плотных ижидких питательных средах (МПА, МЛБ,1.В-бульон и ЬВ-агар).Физиолого-биохимические признаки,сКлетки растут в пределах 4-45 Спри оптимуме рН 6,8-7,5. Штамм разлагает глюкозу, лактозу, маннит с образованием кислоты, не .разлагаетсахарозу, сбраживает мальтозу, ксилозу,...

Номер патента: 1535893

Опубликовано: 15.01.1990

Авторы: Максимова, Олехнович, Фомичев

МПК: C12N 1/20, C12N 15/00, C12Q 1/00 ...

Метки: бактерий, используемый, качестве, кислоты, никотиновой, рsеudомоnаs, тест-культуры, штамм

...размеров зоны роста идикгторной тест-культуры от количества никотиновой кислоты.Однако даже в этом дсасве размеры зоны роста индикатвой тт-куль 153589 1тури цд дгдрц пдццой с 1 е 2 е мо Утварьцровдт двцс 2 цмастц От ц.отцос - тц ц марки д дрд ц других факторов.Поэтому 12 я 112 учсц 15 Г иЗадукцц ци(сти5 новой кислоты цд плотных средах рекалеСд(вдцо цспа;ьзовдть шгдмм толькодля качественного анализа, причем 11 зоцчкгГ 2 ГГГ а ГГГцгс с ."1 а.га гг 1,;гГО регис Г 21 с пп , 1 дч д а О,.кгл Г. 0Прц .к"цс рцмецтд" .Ом д ,2.цэе здвисигсс Гц размеров в ны роста Г 5 дикдторг го ГТкма ОГ КЗЗИЧ:стад 1 цкатцн воц кс,ты прц исОльзовдцц агаврц за. дцзых сред, с г;гг;21 х в кдчес.тве(5.:ОЧ ГИ г , 12 О.ГД " РГП 3 ТсЦОЛ ИЛИ ГС Г;2 НС,д.1 ГГс Н,с ЛГс...

Номер патента: 1537689

Опубликовано: 23.01.1990

Авторы: Бондаренко, Петровская, Яблочков

МПК: C12N 15/00, C12Q 1/00

Метки: активности, антилизоцимной, бактерий, используемый, кlевsiеllа, качестве, определении, рnеuмоniае, референс-штамма, штамм

...отделяют культуральную жилкость от клеток центрифугированнем. Надосадочную жидкость смешивают с суспензией клеток микрококка и раствором лизоцима. Выдерживают при комнатной температуре в течение 25-30 мин и измеряют оптическую плотность при длине волны 400+20 нм,Активность антилизоцимного фактора прямо пропорциональна оптической плотности. В качестве контролей используют смеси: беэ лизоцима (К )1 ее оптическую плотность принимают за плотность образца с полным подавлением действия лизоцима; без культуральной жидкости (замененной стерильной минимальной средой) - после 30 мин инкубации при комнатной температуре (К ) этот контроль соответствует пол 2ному отсутствию антилизоцнмной активности (полное просветление).Антилизоцимную...

Номер патента: 1539205

Опубликовано: 30.01.1990

Авторы: Грубер, Дебов, Карягина, Лопатина, Лунин, Никольская-Санович, Поляченко

МПК: C12N 15/00

Метки: бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, метилазы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рестриктазы, синтез, штамм

...при 10000 я 15 мин, затем 1 О мкл супернатанта добавляют впробу, содержащую 1 мкг бактериофага 3 в 10 мкл буфера А. Пробу инкубируют 1 ч при 37 С, после чегоанализируют электрофорезом в 1,2 Еном агарозном геле. Картина рестрикции в случае штамма Е, со 1 Р 8200,несущего плазмиду с 1 24, характерназля рестриктазы Бзо 11.1 мкг плазмидной ДНК й 24, выделенной из штамма Е.со 1 Р 8200, обрабатывают 1 О ед. рестриктирующей эндонуклеазы Бво 11 в буфере А в течение 2 ч при 37 С. Электрофорез показывает, что ДНК плазмиды й 24 при такой обработке не фрагментируется, вто время как плаэмида р 11 С 19 даеткартину гидролиза, типичную для плазмиды рЦС 19, обработанной рестриктаэой Бво 11. Эти данные свидетельствуют о защите мест узнавания...

Номер патента: 1541256

Опубликовано: 07.02.1990

Авторы: Баронайте, Вайткявичене, Марцишаускас, Пасечник, Песлякас, Суджювене, Федорова

МПК: C12N 15/00, C12N 9/00

Метки: большого, днк-полимеразы, еsснеriснiа, кленова, фрагмента

...ферментного экстракта полимином Р и сульфатом аммония. К центрифугату (215 мл), полу5 15412 ченному на предыдущей стадии, при постоянном перемешивании в течение 30 мин добавляют 107.-ный (13,7 мл) раствор полимина Р до конечной концентрации 0,67, После добавления 5 всего объема полимина перемешивание продолжают еще 30 мин. Экстракт центрифугируют в течение 15 минпри 4000 Полученный осадок используют для получения фрагмента Кленова. Фермент экстрагируют из осадка 100 мл 0,1 М калий-фосфатным буфером рН 7,0, содержащим 0,001 М /ь-меркаптоэтанол, 0,002 М ЭДТА, 0,1 М ЯаС 1. Процедуру повторяют еще раз. Супернатанты объединяют, Экстракт центрифугируют в течение 15 мин при 4000 я. К супернатанту (230 мп), медленно перемеши вая,...

Номер патента: 1544803

Опубликовано: 23.02.1990

Авторы: Алиева, Курмангалиева, Мукашев, Новожилова, Сарсембаев

МПК: C12N 15/00

Метки: gluтinis, rноdотоrilа, гидробионтов, дрожжей, используемый, кормления, штамм

...составляет 56 ,. При этом аминокислотный состав протеина следующий: аспарагин 4,059; треонин 2,074; серии 2,064; глутамин 7,295; пролин 2,158; глицин 2,369; алании 3,623; валин 2,619; метионин 0,973; изолейцин 1,956; лейцин 3,562; тирозин 3,751; фениллаланин 2,410; гистидин 1,173; лизин 3,737; аргинин 5,298; цистин 1,400. После ферментации полученную биомассу лиофильно .высушивают, Количество живых клеток в препарате составляет 60-70П р и м е р 2. Штамм КЬойоСогц 1 а 811 гдпя чаг. 81 цг.п 1 я ВКПМ Увью ращивают в ферментере при 28 С и рН 5,0-6,0 в условиях периодического культивирования с этанолом в качестве источника углерода на среде 8-Е.Выход абсолютно сухих веществ от заданного этанола составляет 70%, содержание сырого протеина...

Номер патента: 1546486

Опубликовано: 28.02.1990

Авторы: Голубев, Золотарев, Мамаев, Петров

МПК: C12N 15/00

Метки: вируса, генотипирования, гриппа, реассортантов

...мклФормамида и по 20 мкл водного раствора Р-ДНК плаэмиды рВР 1-ГР/2. Прозгбирки прогревают на кипящей водянойбане в течение 1,5 мин, добавляютпо 2 мл гибридизационного буфера,полученный раствор вливают в полиэтиленовые мешочки с фильтрами в гибридизационном буфере и помещают в термастат на 42 С, Через 16-20 ч мембраны дважды отмывают раствором 2 х ЯБСпри комнатной температуре и дваждыпромывочным раствором (01 В ЯРЯ;01 х ЯБС) при 55-60 С. После высушивания проводят авторадиографию срентгеновской пленкой. Каждую проявленную пленку дважды сканируют при450 нм на денситометре, представляющем значения оптической плотностидля каждой точки,Для обсчета полученных данных проводят усреднения и вычитают фон радиоавтографа, Тогда средняя оптическая...

Номер патента: 1304406

Опубликовано: 15.03.1990

Авторы: Гуревич, Заренков, Лебедева

МПК: C12N 15/00

Метки: yersinia, маркеров, плазмид, реsтis, трансдукции, хромосомных

...10 -10 /БОЕ. Наодной пластинке агара вырастает от 10до 100 трансдуктантов,П р и м е р 2. Трансдукция плазмиды КР 4.Трансдуцирующий лиэат готовяткак описано в предыдущем примере,используя в качестве донора культуруштамма У,резехз Е 776 (КР 4/ТсКшАрд)на которой размножают трансдуцирующий Фаг. Смешивают по 0,2 мл этоголизата (10 БОЕ/мл) и реципиентной18-часовой бульонной культуры штамма У,резйхз Оййеп вЕг, выращенной при28 С. После инкубации смеси при 37 Св течение 30 мин по 0,2 мл ее высевают на 1,5 Ж-ный агар 1.В с тетрациклином (12,5 мкг/мл). Контролем служат посевы фаголизата на стерильностьи бактерий реципиента на агаровуюсреду с тетрациклином, Выросшие колонии отсевают и после дополнительногорассева: на изолированные колонии...

Номер патента: 1551251

Опубликовано: 15.03.1990

Авторы: Гюнтер, Кристиан, Норберт, Петер, Рудольф, Эва

МПК: C12N 15/00, C12P 21/00

Метки: w-интерферона, человека

...1 ед,Т 4-ДНК-лигазы,10 мкл компенентных клеток штаммаЕ,со 1 х НВ 101 трансформируют путемдобавления 5 мкл раствора продукталигирования и культивируют на ЬВ-агаровых пластинках, содержащих100 мкг/мл ампициллина,Произвольно выбирают 12 из полученных клонов и,выделяют содержащиеся в них плазмиды в малом масштабе(объем культуры 1,5 мл), После обработки этих плазмид с помощью различных рестрикционных энзимов и электрофореэа на агаровом геле выбирают плазмиду, имеющую желаемую конструкцию,и обозначают ее как рУ-ЛПВ-Нц-.1 ГНИ 1.П р и м е р 2. Получение И-интерферона,А.Трансформация дрожжей25 мл УРД + минус Ьец-раствораинокулируют дрожжевой колониейГштамм СМЗ-С 2), Культуре дают растив течение ночи при 30 С. 100 мл УРД++минус Ьец-раствора...

Номер патента: 1555652

Опубликовано: 07.04.1990

Авторы: Гарабаджиу, Гинзбург, Иванов, Комар, Кузнецов, Фомина

МПК: C09K 11/06, C12N 15/00, G01N 21/64 ...

Метки: днк, микроколичеств

...итенсивность Флуоресценциипробы, окрашенной (Т);ИФ - интенсивность флуоресцен 2ции пробы после добавкираствора стандартной ДНК.Предлагаемый метод позволяет определять содержание ДНК в растворахс концентрацией до 3 10 ф мкг/мл(нижняя граница чувствительности),что примерно в 1,5-2 раза ниже предела чувствительности для известныхФлуоресцентных красителей ДАФИ иХехст. В силу достаточно высокой специфичности красителя (Ъ) метод определения микроколичеств ДНКможет бытЬ использован при анализе .содержания ДНК в биологических материалах, в частности в плазме крови.П р и м е р 1, Синтез Флуоресцентного красителя (1) осуществляют посхеме в системах: А - хлороформ - метанол1 555652 Таблица 1 Проба Состав пробы ДИФ ИФ-Иф+ ст, ДНК (6,7 мкг/мл)...

Номер патента: 1567627

Опубликовано: 30.05.1990

Авторы: Загребельный, Легостаева, Сизов, Хомов

МПК: C07H 21/04, C12N 15/00

Метки: двуспиральных, комплексов, полидезоксирибонуклеотидных

...смеси, содержащей ионь, магния и калийфосфатный буфер (рН 7,4). Изобретение позволяет увеличить выход целевого продукта до 95, в 3-6 раз сократить длительность и трудоемкость, расширить ассортимент полимеризующих ферментов при синтезе голидезоксирибонуклеотирных компонентов в безматричных системах,дезоксириботимидин- 6 мкм/ил хлористого макалийфосфатногс буфераионизсванную воду до одобавляют 100 ед,акт. Фр нова и выдерживают реакционную смесь 2 ч при комнатной температуре, Выход полидезоксиаденозинтимидинояого комплекса 95, Очигтку целевого продукта осуществляют преимущественно гель- фильтрацией,П р и м е р 2. Готовят реакционную смесь, содержащую дезоксирибогуанозин-трифосфат, дезоксирибоцитидин -трифосфат, хлористый магний и...

Номер патента: 1571061

Опубликовано: 15.06.1990

Авторы: Батурина, Важинская, Олешко, Стахеев

МПК: C12N 1/16, C12N 15/00

Метки: candida, sсоттii, высококонцентрированных, дрожжей, жидкого, используемый, кормового, продукта, средах, штамм

...вещества среды определяют по методу Самнера в модификации Миллера, активную кислотностьсреды (рН) - пстенциометрически, Ото деление биомассы ст культуральнойжидкости проводят цечтрифугированиемпри 3500 об/мин в течение 20 мин споследующей двухкратной промывкойводой, Биомассу высушивают в термоостате при 60 С, Выход биомассы вграммах на литр среды по сухому весуопределяют взвешиванием высушенногодо постоянного веса при 105 ОС осадка сырой биомассы, отцентрифугированного из определенного объема культуральной среды, и пересчитывают налитр, Общий азот определяют колориметрически с реактивом Несслера, дляопределения сырого протеина используется коэффициент 6,25. Сухие вещества определяют весовым методом, аминокислотный состав белка - на...