Патенты с меткой «плазмидной»

Номер патента: 852939

Опубликовано: 07.08.1981

Авторы: Баев, Бурьянов, Косых

МПК: C12N 15/00

Метки: гены, метилазы, плазмидной, рекомбинантнойднк, рестриктазыи, содержащей

...устойчивость к антибиотику сульФаниламиду, это дало возможность клонировать этот фрагмент в векторер 1 Ь 203, который не имеет селекциипри встройке чужеродных Е В 1 фрагментов, если эти Фрагментй не несутселектируемых маркеров. Вектор р 3 Ь203 получен на основе плазмиды РВВи ВавН 1-Е В 1 Фрагмента Фага лямбда,в котором находятся левый и правыйпромоторы, кроме того, в этом Фрагменте содержится температуроччвствиЭффективность рестрикции и модификации фага % клетками Б,со) ффективность размноения фага на клетках Специфичность фага Ф1 1 9.80рЯК 32 Выделения плазмида ДНК из этого ф клона после рестрикции эндонуклеаэой Е В 1 образуют два фрагмента при электрофорезе, соответствующие по молекулярному весу вектору р 1 Ь 203 и фрагменту плаэмиды...

Номер патента: 1124033

Опубликовано: 15.11.1984

Авторы: Ансберга, Зилбере, Камрадзе, Муйжниекс, Хартмане, Шафранский

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, плазмидной

...следующим 55 образом.Повышение выхода обеспечивается эа счет сохранения суперспиральной структуры ДНК в процессе лиэиса.Понижение количества додецилсульфатанатрия и натра едкого, которые всреду вводятся в определенных соотно"шениях, т.е. в количествах, определяющих возможность регулирования лизисас целью сохранения ковалентно связанной кольцевой плазмидной ДНК, а условия инкубации обеспечивают разделение ковалентно-замкнутой кольцевой,плаэмидной ДНК от балластных веществ.Условия лизиса и инкубации предотвращают релаксацию ковалентно-замкнутойкольцевой плазмидной ДНК в линейнуюи открытую кольцевую ДНК.Предлагаемый способ обеспечиваетнакопление ковалентно-замкнутой кольцевой плазмидной ДНК 95-96 . Процессочистки от РНК проводят...

Номер патента: 1130602

Опубликовано: 23.12.1984

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидная, плазмидной, рекомбинантная, рестрикции, штамм-продуцент, эндонуклеазы

...цитритов. Желатцну не разжижают.Уреаэцая активность не обнаруживается. Ицдол не образуют.Устойчивость к антибиотикам. Проявляет устойчивость к ампициллину.Генетические признаки штамма:1 фЕсо НФ спи Есо цугес ВСэЪсВ,Г , гпу 1, 1 еп 6, рго А 2, Ьз 4,ГМ 1, агд Е, 1 ас 41, да 1 К 2, ага 14ху 1 5, шег, еэх.П р и м е р 1. Конструированиерекомбцнантной плаэмидцой ДНК р 1 ЬНЧ 86.Плазмцдную ДНК рЬКч 8 вьсцеляютиз штамма ВКИ ВД по методу(С 1 еюе 11, Не 1 пе 1 су, 1969, РНАЯ, 62,1159-1163) .2 мкг выделенной ДНК гидролиэуютрестриктазой Нжд 111 в 100 мкл раствора, содержащего 50 мИ трис-НС 1,рН 7,8, 10 мМ МИКСТ , 2 мМ 2-меркаптоэтанола, 20 мИ ИаС 1 при 37 ОС 1 ч.После прогревания реакционной смесипри 65 ОС в течение 10 мин проводятчкольцевание"...

Номер патента: 1074139

Опубликовано: 30.12.1984

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рекомбинатной, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...1159-1166).Рестрикционный анализ выделеннойплазмиды р 1 ЬКЧ 7 проводят. с помощьюэндонуклеаз Р 11,ВфИ,Есор .На втором этапе в полученную плазмиду Р 1 йЧ 74 вводят область иммуни-,тета фагас промотором ранних генов Рг и термочувствительным репрессором. Для этого выделяют ДНК фагас 1857 по методу (А,Р. Ка 1 яег,Нояпея 0.8. 1960, /, Мо 1 В 1 о 1392-415),мкг ДНК плазмиды р 1 ЬКЧ 7 и4 мкг ДНК фага 3 с 1 857 инкубируют вбуфере А (2 О мМ Трис-НС 0 рН 7,6,10 мМ МС 12,10 мМ дитиотреитола) сэндонуклеазной рестрикции Вд 1 11Гидролиз проводят в течение часапри 37 С, после чего гидролизат проверяют электрофорезом в О,97 агарозе в ацетатном буфере. ФрагментыДНК фага Л с 1857 (2 мкг) смешивают с линейной ДНК плазмидыр 1 РЧ 7 й (О, 2 мкг), добавляют...

Номер патента: 1040791

Опубликовано: 07.02.1985

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Физической структурыплазмидную ДНК выделяют ускореннымметодом (К 1 е 1 п Р,1 ейа 1, 1980,Р 1 азтпЫ, 8, 88-93) .Рестрикционный анализ проводят спомощью эндонуклеаз Р-1, Вя 1 11,11, Отобранные. клоны проверяютна присутствие системы рестрикциимодификации Есо 87. Для этого сравнивают эффективность посева (э.п.)фага; 0 на клетках, содержащихрекомбинантные плазмиды, а такжештаммах С 5183 (гь. -где ) и ) С 5183( г т+ ) с плазмидой рЬ 13. Наличие в клетках модификации устанавливают при снижении э.п. методом(Т. Ага, А.Ао 1 с 1, 3.Васй. 5, 18,1962) . Полученные данные представлены в табл. 2,Как видно из табл. 2, штамм3 С 5183/С 113 на четыре порядка ограничивает размножение фага Ъ0по сравнению со штаммом 1 С 5183( ГО ), не несущем плазмидуу...

Номер патента: 1417800

Опубликовано: 15.08.1988

Авторы: Гюнтер, Марк-Брус, Норберт, Петер, Рудольф, Эва

МПК: A61K 38/21

Метки: per-33, днк, зрелый, интерферон, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, человека

...тупой конец фрагмента размером 90 Ьр легируют с тупым концом КВБ и получают молекулы, в которых содержат КВБ в направлении ориентации вниз от промотора. После реакции лигазу инактивируют в течение 10 мин при 70 фС, устанавливают концентрацию ТА-буфера и дополнительно переваривают с помощью 200 единиц Ндпй 111 и 10 единиц Есо К 1. 50В образующихся в реакции мульти- мерах наряду с желательной реакцией могут.лигироваться друг с другом как Есо К 1-концы, так и также Нпй 111- концы и снова превращаться в мономеры. Затем пробу разделяют на 6 Е-ном полиакриламидном геле и вырезают из геля промотор-операторный КВБ-фраг мент. размером 100 Ьр, который имеет 0 8Есо К 1- и Нпй 111-концы электрофоретически элюируют, чтобы отделить от избытка...

Номер патента: 1436887

Опубликовано: 07.11.1988

Авторы: Аксель, Вильям, Говард, Джон, Питер, Рэймонд

МПК: C12N 15/00

Метки: гормон, днк, кодирующей, крысы, плазмидной, рекомбинантной, роста, человека

...0,1 ммоль ЭДТКдо 25 смоль и тДНК,После экстрагирования этанолом реакционной смеси и хроматографического анализа на БерЬайех С, 32 ркДНК, элюированную в пустой объем,осаждают при помощи этанола. В результате такой обработки обеспечивается высокий выход молекул кДНК, концы которой связаны основанием, Линкер Ыпй 111 лигируют с кДНК осущестовляют при помощи инкубации при 14 Св смеси бб ммоль трис-НС 1, рН 7,6,6,6 ммоль хлорида магния, 1 ммольАТФ, 10 ммоль дитиотрейтола, 3 ммольдекамера Нпй ТТТ с показателем 105отсчетов в 1 мин/мол и лигазы ДНК Т 4,приблизительно 500 ед./мл, в течение1 ч. Чтобы дезактивировать лигазу,ореакционную смесь нагревают до 65 С;которуи поддерживают в течение 5 мин,Предварительно к ферментам, содержащим...

Номер патента: 1471949

Опубликовано: 07.04.1989

Авторы: Джозеф, Джон, Уолтер

МПК: C12N 15/00

Метки: бычий, гормон, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, роста

...Осуществляют процедуру такимже образом, как описано в примерах5(А) - (С), в которых использовалисьЕ, со 1 х КРЛ, Е. со 11 НВ 101, Е. со 11РР 50 или Е. со 1 ПРЯ иф Р, вместоЕ. со 1, Х 1776, Все условия идентичны и получают идентичные результаты.П р и м е р б. Для осуществления данного примера получают сДНК,кодирующую предшественник.гармонароста, как описано в примере 1. Вводят линкеры Нпй 111 и кДНК обрабатывают посредством Нпи 1 111 илиНзц 1, как описано в примере 4(А).Плазмиду рС 194, изолированнуюиз Б. ацгеце, используют в качествевектора, рС 194 расщепляют в зонеНпс 1 1 .1 посредством Нпй 111 илиНяц 1 и затем подвергают обработкещелочной фосфатазой,Полученную кДНК соединяют с расщепленной рС 194. Осуществляют трансформацив В. зцЬг 11...

Номер патента: 1491346

Опубликовано: 30.06.1989

Авторы: Бригитте, Рональд

МПК: C12N 15/00

Метки: бычьего, гормона, днк, кодирующей, плазмидной, рекомбинантной, роста, синтез, человеческого

...Абс ТТС ТСС ВСС СТС ТТТ ЮСС ААС ССТ СТССТ Ю ААС А 66 ССС САС ААА СБС ГТС ССА С 5 Конструируют указанную линкерную последовательность в соответствии с обычной методикой.Целевые трансформанты, обозначенные Е.со 1 д К 12 КЧ 309/рСЕ 112,2, помещают на ТЧ агар, содержащий соответствующие антибтотики, а затем обычным способом культивируют до получения и выделения плазмиды рСЕ 112,2. Эти трансформанты как показано по дан ным гель-электрофореза, К 1 А и других тестов, экспрессируют шей-ЬСН с вы 6 АС, ОЛТ ТДД АТС ттт сст ССТ в 1 111 111 11 Т 11 . 111, 11 СТС СТА АТТ ТАС ддд ОСА ССЯ ДАС ССТ СТ 6 СТ 311 111 1ТГО ССА С У 5 СТДОД 666 ТАТТЛЛТА, 1.1 11 1111 3 ТСССЯТЯАТТДТ АТВ ТСС ТТС ТСС СРС 111 11 11111 11 тдс АСС ДЯС АСС СССАТС фАТ 1 САС111 1 1....

Номер патента: 1572419

Опубликовано: 15.06.1990

Авторы: Гюнтер, Кристиан, Норберт, Петер, Рудольф, Эва

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, кодирующей, омега-интерферон, плазмидной, рекомбинантной

...этих фрагментов. Сделан вывод, что в случае вставки клонов, Е 76 Е 9 и Р 9 А 2 речь идет о до сих пор неизвестных интерфероногенах, а именно о омега-интерферонах.Информацию об омега-интерферонах используют для того, чтобы переварить кДНК-ставку с рестрикционными эндонуклеазами. Образовавшиеся фрагменты лигируют в с 1 з ДНК-форму (репликативная форма) М 13 тпр 9 и секвенсируют с помощью дидеокси-метода Бащег. Однонитевую ДНК рекомбинантных фагов изолируют. Послесвязывания синтетического олигомера в четырех отдельных приготовлениях осуществляют двухнитевые синтезы при применении большого фрагмента ДНК-полимеразы 1 из Е.со 1 (фрагмент Кленова). В каждой из четырех частичных реакций добавляют один из четырех дидезоксинуклеозидтрифосфатов...

Номер патента: 1469856

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Ажикина, Анджапаридзе, Антонова, Арсенян, Балаян, Блинов, Вальяно, Василенко, Дроздов, Коврига, Кравченко, Кусов, Маркова, Насташенко, Овчинников, Петров, Приходько, Ростапшов, Рохлина, Свердлов, Серпинский, Снешков, Урманов, Фролов, Царев, Чернос, Чижиков

МПК: A61K 39/29, C12N 15/00

Метки: гепатита, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, полипептидных, против, рекомбинантной, синтез, субстанций

...эндонуклеазой рестрикции Вя 11 и затем Рз 1, как описанов примере 1, Полученный больший фрагмент лигируют с Вя 11 - (ЛРцц 11)Рзг.фрагментом длиной 1243 п.о., вьделенным из плазмиды рНА 123. Лигазной смесью трансформируют компетентные клетки штамма Е,.со 1 НВ 101 и в клонах, содержащих плазмиду со встроенным фрагментом, определяют ориентацию последнего с помощью эндонуклеаз рестрикции ЕсоВ. и Ваш 1,Клоны, содержащие плазмиды с нужной ориентацией фрагмента, наращиваютв среде Мс, тетрациклином и р -индЬ- дилакриловой кислотой, синтезируемый гибридный белок, содержащий полный 7 ф-интерферон человека и фрагменты белков ОРЗ (со 11 О по 23,а.к.) и УР5 (спо 271 а.к.) ВГА, выделяют из бактериальных клеток и используют дпя иммунизации морских...

Номер патента: 1614765

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Масааки, Мицие, Юнити, Ясуджи

МПК: C12N 15/28

Метки: днк, кодирующей, некроза, опухоли, плазмидной, рекомбинантной, фактор, человека

...со скоростью потока, равной133 мп/ч. Элюат фракционируют по ф 1 акциям 10 мп. Фракции, обладающие цито"токсической активностью, :.бирают иобъединяют,Выделение цитотоксической активности на этой стадии составляет 533, удельная активность повышается приблизительно в 9 раэСоединенные активные фракции обессоливают и концентрируют до 1/10 объеУ ма ультрафильтрацией с помощью Оай 1 о .с использованием мембраны УМ 10,Концентрат подвергают препаративному изоэлектрофокусирующему гель-электрофорезу, Аликвоту концентрата наносят на пластинку из полиакриламидного геля (0,2 х 10 х 10 см) с градиентомрН от 5,6 до 6,1, созданном с помощью1 ишоЪ 1 чпе. Электрофореэ проводят принапряжении 2400 В в течение 16 ч при15 С, "ель нарезают на куски...

Номер патента: 1623567

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52

Метки: pit337, днк, изопенициллин-n-синтетазу, плазмидной, рекомбинантной, экспрессирующей

...с 5 мкл1,5 МЬ Л 3 сог-ВагпН 1 рестрикционного фрагмента ппазмиды р 11335 до получения плазмиды 1. 7337, Реакционный объем составляет О мкл и включает указанные фрагментыДНК, 1,1 мкл ( 100 ед,) Т 4 ДНК лигазы, 3мкл 10-кратного лигирующего буфера (0,5 Мтрис-НС 1, рН 7,8; 100 мМ М 9 С 1 г; 200 мМ дитиотреитола ЭДТТ); 100 мМ АТР; и 1 мг/млВЯА/ и 13,4 мкл НгО. Реакционную смесьинкубируют при 15 С в течение 2 ч, послечего реакция практически завершается. Лигированная ДНК составляет целевую плаэмидную ДНК рТ 337.С, Конструирование Е,со 1 К 12ЯЧ 308/рТ 337.А, Конструирование Е.со К 12ЯЧ 308/ р 1 Т 337,50 мл культуры Е,со 1 К 12 ЯЧ 308 (ИЯЯВ - 15624) в-бульоне выращивают доО.Д 59 о 0,5 единиц поглощения, Культуруохлаждают на льду в...

Номер патента: 1739854

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Брайан, Нилс, Сау-Чи, Хармут

МПК: C12N 15/12

Метки: днк, зимоген, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, человека

...хранятся под Р АТСС. СКЬ 9595. Клетки 293 выращивают в минимальной среде Игла с 103-.ной термоинактивированной лощадиной сывороткой прио37 С Гсреду меняют дважды в неделю).Среда состоит из Э МЕМ с 107 теля-.чьей сыворотки, 50 мкг/мл ентамицина 10 и 10 мкг/мл Агнца МЕРНУТОИ фитандиона витамина К 1, Клетки субкультивируют удалением среды, промывают раствором Хенка, прибавляют 0,257.-ныйтрипсин Гсодержащий 0,2 г/л ЭДТА) 15 на 1-2 мин, промывают свежей средой,отсасывают и распределяют в новыесосуды с отношением субкультивирования 1:5 или 1:10.За 1 день перед трансформированиемклетки высевают в количестве 0,х 10 бклеток на 100 мм чашку Петри, Стерильную, осажденную этанолом плазмиду ,ДНК растворяют в ТЕ-буфере и используютдля получения...

Номер патента: 1739856

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52

Метки: деацетоксицефалоспорин, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, синтетазу, синтетазудеацетилцефалоспорин, фермент

...связуйщей 5 молекулы обрабатывают Т 4 ДНК"кинаэойи затем аннелируют с.образованиемнеповрежденной связуюцей молекулы.1 мкл гидролизованной Ваш Н 1 ДНКплазмиды рМЬС 12 лигируют с 4 мкл 1 О Бсо 1 - Нсо 1 фрагмента плазмидырЬС 1 и 10 мкл аннелированной связующей молекулы.Лигазной смесью трансформируютЕ.со 1 Аликвоты трансформированной 15 клеточной смеси вжевают на чашкахс Ь-агаром, содержащим 25 мкг/млхлорамфеникола, 40 мкг/мл Х-да 1.и40 хмкг/мл 1 РТС. Чашки инкубируютнри 37 С в течение ночи. Колонии,окоторые содержат плазмиду беэ вставки, такие как Е.со 1 К 12 М 109//рМЬС 12, проявляют синий цвет наэтих чашках. Колонии, которые содержат плазмиду с вставкой, такие какЕ.со 11 К 12 1 М 109/рРБ 53, проявляютбелый цвет на этих чашках,...

Номер патента: 1780542

Опубликовано: 07.12.1992

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52, C12N 15/80

Метки: активностью, асrемоniuм, днк, изопенициллин-n-синтетазу, изопенициллин-n-синтетазы, кодирующей, конструирования, обладающего, плазмидной, рекомбинантной, сернаlоsроriuм, штамма

...3,7 ХааРестрикцибуфера и 85 мкл Н 20. Около 5 мкл (50 еди онного фрагмента получают и суспендир ютниц) рестрикционного фермента Н 1 пб - И 1 в 10 мкл Н 20.добавляют к раствору ДНК и полученный В, Окончательное конструированиераствор инкубируют при 37 С в течение 2 ч. плэзмид РРЯ 30 и РРЯ 30,1.Н 1 пб- расщепленную плазмиднуюРРЯ 21 А ДНК помещают на 1 агарозный 40 . Около 1 мкг плэз ДНКг плэзмиднои Д растворягель и проводят электрофорез до тех пор, ют в 2 мкл 10 Х Хмкл аа рестрикционного буфеН 1 пб - И 1пока. 3,45 кв, 3,16 кв, 1,2 кви 69 кв ра и 6 мкл Н О. 0 2и - рестрикционные фрагменты не ста- рестрикционного фермента Хаа 1 добавляновятся четко выделенными на геле. Выде- ют к раствор " ДЙКляют Н 1 пб - И 1ляют и - рестрикционный...

Номер патента: 1807081

Опубликовано: 07.04.1993

Авторы: Власов, Вуцан, Монахова, Седых

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: pes78vcs, pes78vcs-источник, бактерий, вибрионов, днк, еsснеriснiа, зонда, идентификации, плазмидная, плазмидной, продуцент, рекомбинантная, рекомбинантной, холерных, штамм

...отбирали по признакуАр Тес,Из 12 различных по размерам встроенных фрагментов ДНК вибриона рекомби 40 нантных плазмид (случайная выборка) спомощью эндонуклеазы Нпб В были получены соответствующие фрагменты и испытаны на видоспецифичность в качествемолекулярных зондов, Радиоактивную мет 45 ку (32 Р-АТР или 32 Р-СТРг. Ташкент, межреспубликанское объединение В/О"Изотоп") вводили с помощью ник-трансляции,Гибридизацию проводили на нитроцел 50 люлозных фильтрах после получения на нихотпечатков колоний Ч.стоегае 01 ине 01(150 штаммов), и 12 других видов рода Ч 1 Ьг 1 о(всего 37 штаммов), а также шигелл, сальмонелл, аэромонад, алломонад, псевдомонэд55 и Е,соИ (всего 25 штаммов) и их соответствующей обработки с использованием модифицированного...

Номер патента: 1809837

Опубликовано: 15.04.1993

Авторы: Дональд, Майкл, Тимоти

МПК: C12N 15/06

Метки: адгезии, гликопротеин, днк, кодирующей, межклеточной, плазмидной, рекомбинантной, рсдус

...СОМ 8, она демонстрируетналичие как зависимых от ЗСАМ, так инезависимых от 1 САМкомпонентов адгезии, зависящей от ЛФА. Трансфецированные клетки СОЯ инкубируют в покрытыхЛФАчашках Петри при наличии моноклональных антител 3 САМдля предотвращения выделения кодирующей ДНК ЗСАМ, 15Адгезированные клетки элюируют ЭДТА, аплазмиды выделяют и амплифицируют, После трех циклов трансфекции, адгезии, выделения плаэмиды и фракционирования поразмерам, 30 плазмид анализируют с использованием рестрикционной эндонуклеазы, Из трех плазмид со вставкой более 1,0тыс. пар оснований (т.п,о,) одна, введеннаяв клетки СОЯ посредством трансфекции,обуславливает адгезию по отношению к,25Л ФА.П р и м е р 2. Характеристика последовательности, кодирующей ДНК 3...

Номер патента: 1825376

Опубликовано: 30.06.1993

Авторы: Акико, Мориюки, Сейга, Сусуму, Тамио

МПК: C12N 15/18, C12N 15/70

Метки: гормон, днк, днк,кодирующей, днк-фрагмент, кодирующий, конст-ния, лосося, плазмид, плазмидной, промежуточной, рекомбинантной, роста, содержащей

...экстрагируют смесью фенола с хлороформом и осаждают этанолом с получением 0,5 пмоля кДНК-вектора-затравки ДНК, связанной с (дЦ) цепями. Затем 0,08 пмоля ДНК и 0,16 пмоля упомянутой связующей ДНК добавляют к 40 мл раствора, содержащего 10 мМ трис-НС (рН 7,5), 0,1 М йаС и 1 мМ ЭДТА, и инкубируют при 65 С, 42 С и 0 С в течение соответственно 10, 25 и 30 мин. Реакционный раствор доводят до 400 мл (полный объем) раствора. содержащего 20 мМ трис-НС 1 (рН 7,5) 4 мМ МцС 12, 10 мМ (НН 4)2504, 0,1 М КС 1 и 0,1 мМ Р.НАД, К реакционному раствору добавляют 10 единиц ДНК-лигазы Езсег 1 сЬ 1 а со 11 и инкубируют в течение 1 сут при 11 С. Реакционный раствор доводят до раствора, содержащего 40 мкМ дНТФ и 0,15 мкМ /3-НАД. Затем добавляют пять единиц...

Номер патента: 1838411

Опубликовано: 30.08.1993

Авторы: Бриан, Брус

МПК: C12N 15/09, C12N 15/15, C12P 21/02 ...

Метки: белка, днк, зимогенной, плазмидной, рекомбинантной, формы, человека

...типичных эукариотических клеток, включая клетки линии АУ 12, и к векторам экспрессиинастоящего изобретения,30 Клетки 293 были получены из АТСС (подномером СР 1573) в 25-мм -колбе, содер 2жащей сплошной монослой около 5,5 х 10клеток в минимальной поддерживающейсреде Игла (ОЬсо) с 10; термо-инактивиро 35 ванной лошадиной сывороткой, Колбу инкубировали при 37 С, а среду меняли два разав неделю. Среда состояла из ОМЕМ (ОЬсо),дополненной 10 оь околоплодной сывороткой,.теленка, 50 мкг/мл гентамициа, и 1040 мкг/мл витамина К 1, фитонадиона АкваМефитон В Мегс: ЯЬагр В ОоЬпе, Мегс В СоЗлс., ЧЧезт Ропс, РА, 19486). Клетки суб культивировали путем удаления среды, промывания сбалансированным голевым45 раствором Хэнкса (ОЬсо), добавления в течение...

Номер патента: 1838412

Опубликовано: 30.08.1993

Авторы: Бригитте, Рональд, Хансен

МПК: C12N 15/18, C12N 15/70

Метки: биосинтеза, бычий, бычьего, гормон, гормона, днк, кодирующей, плазмидной, производного, рекомбинантной, роста

...трансформантыэкспрессируют вышеупомянутое производное МЕТ бГР с высокими уровнями, Поскольку плазмида рАТ содержит15 термоиндуцируемый репликон неконтролируемого роста, максимальная экспрессияжелаемого продукта производного бГР происходит при культивировании при температурах около 37 С,20 П р и м е р 9. Конструирование плазми 25 ДНК; ССС ЛАС ССТ СТССТ 3ССС ТТС ССЛ С 515 30 35 40 ки, и затем культивируют для последующего продуцирования и выделения плазмиды45 рАЯР 1. Как показано ЯОЯ-гель-электрофо 50 55 В, Лигирование и трансформация,Примерно 20 пикомолей линкернойДНК примера 7,Б, 1 мкг перевара рММ 608примера 7,А, 0,5 мкг ВаоН 1-ЕсоВ 1 фрагмента примерно 10,2 3 сЬ плазмиды рСЕ 101(полученного в соответствии с методикойпримера 2;Б, с...

Номер патента: 1438240

Опубликовано: 20.03.1996

Авторы: Болдырева, Добрынин, Коробко, Кравченко, Недоспасов, Турецкая, Филиппов, Чувпило, Шахов, Шингарова

МПК: C12N 1/21, C12N 15/28

Метки: ген, днк, кодирующая, конструирования, некроза, опухоли, плазмида, плазмидная, плазмидной, полипептид, полусинтетический, промежуточная, рекомбинантная, рекомбинантной, ртnf, содержащая, фактора, человека

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pTNF 22, содержащая полусинтетический ген фактора некроза опухоли человека, - промежуточная плазмида для конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК pTNF 31, с мол.м. 3,6 MD (5,95 т.п.о. ), содержащая:Bam I - Hind III-фрагмент ДНК плазмидного вектора PVR 291 с промотором, оператором и измененным геном -галактозидазы, кодирующим 1027 аминокислотных остатков размером 5,35 т.п.о.;Bam I - Msp I-фрагмент синтетической ДНК с участком, инициации трансляции Escherichia coli, инициирующим кодоном ATG и 31 N-концевым кодоном фактора некроза опухоли размером 120 тыс. п.о.;Msp I - Hind III-фрагмент ДНК рекомбинантного фага l 422 с...

Номер патента: 1445193

Опубликовано: 20.03.1996

Авторы: Болдырева, Добрынин, Коробко, Кравченко, Максимова, Недоспасов, Турецкая, Филиппов, Чувпило, Шахов, Шингарова

МПК: C12N 1/21, C12N 15/28

Метки: днк, кодирующая, конструирования, плазмидная, плазмидной, полипептид, продукт, промежуточный, рекомбинантная, рекомбинантной, свойствами, фактора

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pGA 23 - промежуточный продукт для конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК pT pTNF311 с мол.м. 2,5 МД, содержащая:Rst I -Bam I-фрагмент ДНК плазмиды p 4256 с тандемом промоторов A2 и A3 ранней области фага T7 и с частью гена b лактамазы размером 1,01 т.п.о.;Bam I - Pst-фрагмент ДНК плазмиды pDSI T0 2+ с геном дигидрофолатредуктазы, хлорамфениколацетилтрансферазы с терминатором транскрипции фага l и частью гена b -лактамазы;генетические маркеры:ген b -лактамазы и хлорамфениколацетилтрансферазы, детерминирующие устойчивость трансформированных плазмидой pGA 23 клеток Escherichia coli к...