C12N 15/00 — Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев

Номер патента: 686463

Опубликовано: 30.04.1987

Авторы: Березовская, Выпияч, Егоров, Зарубина, Иванова, Мануйлова, Маркелова, Силаев

МПК: C12N 15/00, C12P 1/04

Метки: 101-продуцент, грамицидина, штамм

...Производственно-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул,Проектная, Эфб 8 бИзобретение относится к обмикробиологии и касается проиэводс Ъва антибиотиков.Известен штамм Вас 111 ия Ьгечяайаг. С-В продуцент грамицидина С,Однако известный штамм обладаетнизкой антибиотической активностью(синтезирует 0,5-1 г/л грамицидина С).Целью изобретения является новый Юштамм Вас 11 ия Ьгечя 101, синтезирующий грамицидин С,Штамм Вас 111 ця Ьгечя 101 - продуцент грамицидина С. Хранится в коллекции микроорганизмов лаборйтории 15антибиотиков биологического факультета МГУ им. М.В,Ломоносова под номером 101.Штамм является мутантной формойи получен под действием химических 20мутагенов из естественного вариантаВас 11 ия Ьгеч 1 я айаг...

Номер патента: 1190640

Опубликовано: 07.06.1987

Авторы: Вертиев, Гинцбург, Мотин, Смирнов, Шагинян, Янишевский

МПК: C12N 15/00

Метки: 1672-продуцент, токсина, холерного, штамм

...взвесь сероватого цвета.Мясо-пептонный бульон. Аэробные условия выращивания. Через 6 ч образуют ровную интенсивную муть. Через 24 ч на дне пробирки появляется микробная взвесь серовато-белого цветаКазамино-дрожжевой бульон. Черезо18 ч при 30 С образуют ровную интенсивную муть.физиолого-биохимические признаки. Бактерии штамма Е, со 11 КЯ 1672 растутов пределах от 5 до 43 С при оптимуме - 37 С и рН 6,8. В качестве источника углерода используют многие углеводы, спирты, органические кислоты. Глюкоза, мальтоза, арабиноза, рамноза и другие углеводы сбраживаются с образованием пирувата.Бактерии в качестве источника азота используют как минимальные соли в аммонийной и нитратной форме, так и в органической. форме в виде пептона,...

Номер патента: 1102270

Опубликовано: 23.06.1987

Авторы: Гинцбург, Смирнов, Стафеева, Янишевский

МПК: C12N 15/00

Метки: 1651, 307-продуцент, плазмиду, содержащий, термолабильного, токсина, штамм

...прижатые сровными краями.Кровяной агар. Колонии бледно-серого цвета, круглые с ровными краями. Гемолиз не выявлен.Среда Эванса. Аэробные условиявыращивания. Через 5 ч образуют муть.Через 15 ч на дне пробирки появляется микробная взвесь сероватого цвета.Мясо-пептонный бульон. Аэробныеусловия выращивания. Через 6 ч образуют ровную интенсивную муть. Через 24 ч на дне пробирки появляется микробная взвесьсеровато-белогоцвета.1Физиолого-биохимические признаки.Бактерии штамма Е.со 1 КЗ 1651 растутв пределах от 5 до 43. С при оптимуме 37 С и рН 6,8. В качестве источника углерода используют многие угле-.35 воды, спирты, органические кислоты.Глюкоза, мальтоза, арабиноза, рамноза и другие углеводы сбраживаются собразованием пирувата.Бактерии в...

Номер патента: 1333710

Опубликовано: 30.08.1987

Автор: Егорова

МПК: C12N 15/00

Метки: дрожжей-сахаромицетов, отбора, спаривания, типа, штаммов

...Гомозиготизация по локусу типа спаривания иногда сопровождается гомозиготизацией по генам гЬг 4 и 1 ец 2, которые у БассЬагоаусев сегечвае также нахо" дятся в 171 хромосоме и сцеплены с локусом к -типа спаривания. Результаты приведены н табл.1.Отбор клонов Ы, -типа спаривания у штамма БассЬагошусен сегечздае П 5188 дан в табл.1.зуют штамм ВКПМУ, а также другие штаммы Бза Петергофской генетической коллекции дрожжей - 2 Г-П 3238, 27 Б-П 3238, 223-П 3238.На отбор Ы. -клонов данным спосо-с бом требуется 5-6 дней. Способ позволяет проводить отбор с 6 -клонов у культур различной плоидности и у прототрофов.Изобретение иллюстрируется примерами.П р и м е р 1. В качестве исходной культуры для отбора штаммов ив типа спаривания используют...

Номер патента: 1337408

Опубликовано: 15.09.1987

Авторы: Баев, Брантл, Ланг, Розенталь, Рослер, Скрябин, Эльдаров

МПК: C12N 15/00

Метки: cererrial-продуцент, psg94, sасснаrомuсеs, белка, вируса, днк, дрожжей, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, оболочки, плазмидная, производ, производного, рекомбинантная, рогатого, синтез, скота, штамм

...пентрцфуировлттця аглдокклеток сусценпцруют в том ж суфрав концентрации 3 х 10 клток/ьтцц,К 200 мл сусцензиц к:теток прибавляют 20 мкг плдзмидной ПНК УЕр 809 тк тОО мкл 507, раствора П.Э.1 . 4000выдерживают 1 ч при 30 мин. Пос.те0инкубируют 5 миц при 42 С. Суспензгттоосаждают пентрцфугированием 1 О с прц1 О тыс. аб./мин. Осадок сусцендцруют в 300 ыкл воды и высевяют цо100 мкл на часики с твердой се:тектив - )Внай средой (0,67 Х дрожжевых азотистых оснований, 2 Ж глюкозы, 20 мпт/лгистидицл, 22 бактолгара),Колонии трансформацтов поятляютсяца 2- децт пос:те пасетов)тот:. - 20чг.кую стлбклтность плазмцдь тЕРВС 94в трацсформацтах определяют клк процент клеток, сохранивших плазктдупри росте в селективных условкяхминимальной среде без лейпкттд,...

Номер патента: 1346048

Опубликовано: 15.10.1987

Авторы: Герхард, Гюнтер, Марк-Брус, Петер, Эва

МПК: C12N 15/00

Метки: coli, pbr322, бактерий, вставку, еsснеriснiа, интерферон, клона, кодирующую, плазмидой, рсть, содержащей, трансформированного

...позиции 1 С 12,1 Р 12, Е 52 Е 1. Кпоны Р 1 А 6 и Р 2310 анализируют таким же методом,П р и м е р 6. Поли(А) РНК отделяют от индуцированных и неиндуцированных клеток намальва, денатурируют в результате инкубации в течение 1 ч при 50 С в 1 моль глиоксаля, 50 .-ном диметилсульфоксиде, 10 ммоль буфера фосфата натрия, рН , разделяют на 1,4 -ном плавающем агаре, переносят на нитроцеллюлозный фильтр и гибридизируют с плазмидной ДНК, Р-меченной с помощьв никтрансляции. Плазмидную ДНК, которая произошла от индуцированного гена, гибридизируют вэтой серии опытов только РНК из индуцированных клеток, но не РНК иэ неиндуцированных клеток. Применяемые для гибридизации плазмиды-ДНК являются Р 1 Н 1 (А), Р 1 У 12 (В,1), Р 2 Н 10(С), Р 1 А 6 (Е), Р 2 В 10...

Номер патента: 1285785

Опубликовано: 30.10.1987

Автор: Куличенко

МПК: C12N 15/00

Метки: ауксотрофных, бактерий, мутантов

...подращивают в полученном после добавленияунитиола растворе в течение 14 ч,после чего высевают на плотную питательную среду (агар Хоттингера) дляполучения изолированных колоний, которые дентифицируют по питательнымпотребностям. П р и м е р 3. Проверк возможноймутагенности продуктов взаимодействия нитрозогуанидин с унитолом.5В опыте использовали штамм Ба 1 ш.гурйтцгцт ТА 100(8), обладающийотносительно высокой частотой спонтанных мутаций, вследствие наличиямутагенных свойств у общепринятыхпитательных сред, и использующийсяспециально для выявления мутагенности, которая оценивается по частотереверсии от Ьз к Ьз+. Штамм несетмутацию типа замены оснований, аналогичные изменения ДНК в основномвызывает и нитрозогуанидин.Готовили разведения...

Номер патента: 1348369

Опубликовано: 30.10.1987

Авторы: Кравченко, Мишанкин, Рыжков

МПК: C12N 15/00, C12Q 1/04

Метки: ev-94тнy, yersinia, используемый, питательных, реsтis, средах, тимидина, штамм

...Ф -аланине.ФФерментирует с образованием кислотыбез газа глюкозу,арабинозу,мальтоэу,маннозу,галактозу,манит и це ферментирует сахарозу, дульцит, рамноэу, сорбит, лактозу и глицерин. Лизируется чумцым диагностическим фагом, фагами Л, Ти ДЭрелля. Синтезирует прц 28 С пестицин, фибринолизиц ц плазмокоагулазу, На среде Джексона Берроуза формирует колонии, которые це сорбируют гемин. При 37 ОС синтезирует дцтигец фракцию 1.При подкожном и вцутрибрюшинцом введении 10 - 10 микробных клеток гибели лдбораторных животцых не вызывает. При определении плаэмидного состава штамма методом элсктрофореза в геле агарозы отличии от родительского штамма це обнаружено. Клетки штамма устойчивы к триметоприму (50 мкг/мл) и чувствительны к...

Номер патента: 1364241

Опубликовано: 30.12.1987

Авторы: Анджей, Эва

МПК: C12N 15/00

Метки: векторов, конструирования, рекомбинантных, усr

...на этой средесоставила почти 95%, а количество копий на клетку ос" талось постоянным: 5-10 копий (см. пример 5 в табл. 1). Таким образом, глюкоза вновь дезактивирует АПН 2-промотор (АЭН 2"АУЯ) и реактивирует СЕИЗ"Функцию (СЕИ 3-АИ). Однако сами дрожжи во время культивирования на этаноле не могли больше аккумулиро-. вать УСКрг-плазмиду, Даже после 50 генераций на среде этанола УИВ+САА ко" личество копий не превьппало 8-12 копий на клетку (см. пример 6 в табл.3),П р и и е р 2. Получение УСЕ рзи УСЕ р 4-плаэмид схематически пред; ставлено на Фнг. 2. Вектор р 1 ПВ 207 содержит бактериальную рАТ 153-плаэмиду (34) с резистентнымн генами ампицилина (Арй) и тетрациклина (Тес" ) и7 136424 ОК 1 для селекции и стабильного роста в Е.со 11....

Номер патента: 1207144

Опубликовано: 28.02.1988

Авторы: Инге-Вечтомов, Карпова, Репневская

МПК: C12N 15/00

Метки: cerevisiae, sасснаrомuсеs, активности, дрожжах, мутагенной, соединений, химических

...можно былоустановить события, в результатекоторых произошла смена типа спаривания одного из родителей. Регистрируется три основных класса такихсобытий.:1) потеря Ш хромосомы у клетокштампа 20 А-П 3912, в этом случаеу гибридов наблюдается потребностьв треонине и лейцине и отсутствиегетероаллельной рекомбинации по локусу 1 ец 2; потеря Ш хромосмы уклеток штамма 38 А, при этому гибридов наблюдается потребностьв гистидине и лейцине и отсутствие 40гетероаллельной рекомбинации по1 еп 2;2) делеция в правом плече Ш хромосомы у клеток штамма 20 А-П 3912,в этом случае у гибридов наблюдается потребность в треонине и лейцине,но в отличие от первого класса гибриды характеризуются наличием гетероаллельной рекомбинации по 1 еи 2;3) точковая...

Номер патента: 1386031

Опубликовано: 30.03.1988

Авторы: Туула, Ханс

МПК: C12N 15/00, C12Q 1/68

Метки: бактерий, вирусов, идентификации

...в которой вирусный передатчик РНК детектируется посредством метода сзндвичгибридизации (табл. 3). Реагенты сэндвич-гибридизации получают иэ ДНК вируса БЧ 40 (ВВЬ) путем разделения ДНК на две части с использованием РяС 1-фермента. Эти фрагменты выделяют и очищают посред-. ством электрофореза на агарозном геле. Фрагмент А (4000 основных пар) подвергают радиоактивному мечению путем "ник" трансляции 1 " и фрагментыВ (1220 основных пар) фиксируют на фильтре;Фрагменты.ДНК выбирают таким образом, что каждый содержит гены, кодирующие как ранние, так и поздние передатчики инфекции. Так, например, фрагмент В содержит примерно 700 основных пар от структурного белкового гена ЧР 1 и более 600 основных пар от гена более ранних передатчиков...

Номер патента: 1387878

Опубликовано: 07.04.1988

Авторы: Акио, Ацуси, Кениси, Нобуяа, Сикатеру, Фукусабуро

МПК: C12N 15/00

Метки: антигена, белка, вируса, гепатита, поверхностного

...при тех же условиях что описаны, в течение 12 ч.Трансформируют Е.со 1 Х 1776 полученной плазмидой и получают трансфор мированную культуру, стойкую к ампициллину, Из колоний вьделяют ДНК плазмиды, определяют нуклеотидную последовательность ДНК, а затем определяют область гена кислой фосфатазы, удаленную при помощи ВА 1, 3 1. Среди этих35 ДНК отбирают и вьделяют искомые плазмиды рАМ 81, рАМ 82, рАМ 83 и рАМ 84, в которых полностью отсутствует структурный ген фосфатазы.40Обозначают "А" в кодоне АТС, кодирующем первую аминокислоту (метионин) продукта Р 60 структурного гена фосфатазы, через "+1", вэтих челночных носителях удаляют следующие области, рАМ 81; до +2, рАМ 82: до - 33, рАМ 83". до -50 и рАМ 84: до -51. рАМ 81, рАМ 82, рАМ 83 и рАМ...

Номер патента: 1392094

Опубликовано: 30.04.1988

Авторы: Дегтярев, Кравченко, Кузнеделов, Нетесова, Петренко, Ривкин

МПК: C12N 15/00

Метки: coli, днк, днк-полимеразы, кленова, кодирующая, конструирования, плазмидная, рекомбинантная, рсек, синтез, фрагмента

...фрагменты ДНК электрофорезом в 47.-ном полиакриламидном геле. Гель окрашивают в растворе бромистого этидия 2 мкг/мл, вырезают из геля зону, содержащую векторную часть ДНК плазмиды рСЕЕ 12, и выделяют ДНК из геля методом электроэлюции. 10 мкг плазмидной ДНК рС 155 гидролизуют 20 ед. рестрикционной эндонуклеазы ВашН 1 в 100 мкл буфера для гидролиза, содержащего 20 мМ трис-НС 1 рН 7,8, 10 мМ МяС 1, 50 мМ МаС 1, 2 мМ 2-меркаптоэтанола, при 37 С 1 ч. В полученную реакционную смесь добавляют 25 ЙАТР, ВСТР, ЙСТР и ТТР, до 0,05 мМ каждого, 10 ед. ДНК-полимеразы 1 и инкубируют 30 мин при 12 С. Реакцию останавливают добавлением Иа ЭДТА до концентрации 20 мМ, белок удаляют экстракцией водным фенолом, рН 8,0 и ДНК трижды переосаждают...

Номер патента: 1393317

Опубликовано: 30.04.1988

Авторы: Акио, Ацуси, Кениси

МПК: C12N 15/00

Метки: вектора, челночного

...как описано выше. Полученные таким путем ДНК анализируют различными ограничительными ферментами, такими как ХЬо 1 и НпЫ 111, и в результате определяют ввод НВЧ ДНК в векторы,и их направление.Полученные плазмиды, выражающие ген НВз Ар, включают ген НВз и ген НВс, идущие от гена кислой фосфотазы.Фрагмент гена НВз Ая (3 мкг), полученный путем расщепления плазмиды рНВЧ посредством Вав Н 1, обрабатывают ДНК полимеразой Т, (0,2 Б) в растворе (100 мкл) 67 мМ Трис-НС 1 (рН 8,6), 6,7 мМ МРС 1, 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 6,7 мМ ЕДТА и 16,7 мМ (МН)80, который содержит 200 мМ 1 АТР, 1 СТР, Ы ТТР и ЫСТР, в течение 30 мин с тем, чтобы заполнить расщепленный Вав Н 1 конец. Реакционную смесь подвергают экстракции фенолом и осаждению этанолом. Полученные...

Номер патента: 1395674

Опубликовано: 15.05.1988

Авторы: Горлов, Жарова, Кириллова, Кордюм

МПК: C12N 1/16, C12N 1/18, C12N 15/00 ...

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, дрожжей, протопластов, регенерантов

...улитки. Суспенэию инкубируют при осторожном перемешивании (50 качаний/мин) при 30 С в течение 8"10 мин. Полученные протопласты отмывают два раза пятью объемами 0,8 1 сорбита при центрифугировании (3000 я, 5 мин). Отмытый осадок протопластов ресуспендируют в 20 мл среды УРД, содержащей, г/л; дрожжевой экстракт Дифко 10, пелтон Дифко 15, глюкоза 20, сорбит 146, добавляют 2,6-дитретбутил.-метилфенол (ионол) до конечной концентрации 2- 5 мкг/мл (для сравнения берутся и другие концентрации), причем ионол предварительно растворяют в зтаноле, и смесь инкубируют при медленном перемешивании (50 качаний/мин) в течениео0,5-3 ч при 30 С (суспензия протопластов разбивается на варианты по 1.мл), Затем протопласты центрифугируют, осадок отмывают 5...

Номер патента: 1406163

Опубликовано: 30.06.1988

Авторы: Гоготов, Корсунский, Митронова, Фролова, Шестаков

МПК: C12N 15/00

Метки: rноdовастеr, sрнаеrоidеs-продуцент, бактерий, убихинона, штамм

...глюкозу,Отношение к источникам азота: хорошо усваивает (ИН) Я 04; аминокислоты: глутамин, алании, пролин, глутамат,Оптимальные условия роста; температура 30-32 С, освещенность 15002000 лк, рН .7,0.На,среде Оппейог при росте на свету при 32 С через 72 ч инкубирования концентрация клеток составляет 2-4 х х 10 клеток на 1 мл.Для выращивания штамма ВпойоЪасгег ярЬаегоЫея 2 В М,122 используется55 среда Огпегод следующего состава, г/л:МаЯО, 7 нгО 0,200СаС 12 Н 0 0,075 РеЯО 4 7 Н 0 0,011ЕДТА 0,020Микроэлементы 1 мдК,НРО, 0,900КН 2 РО 4 0,600(ЫН 4), ЯО 4 1,250с 1,1-малат Иа 4-6Витамины 1 млСостав микроэлементов, г/л:НЭВО 2,8602 пЯО 4 7 НО . 0,240Стл(Юз) ЗНО 0,040МпЯО 4 4 НО 2,100ИаМоО, 2 ЙО0,750Состав витаминов, мкг/л:Биотин 100Никотиновая...

Номер патента: 1414319

Опубликовано: 30.07.1988

Авторы: Девид, Сидней

МПК: C12N 15/00

Метки: интерферонов, лейкоцитарных, человека

...5,5 г борной кислоты,0,09 г Ма - ЭДАТУК в 1 л воды), Вод.4 Б ный раствор собирают из диализатор.ного бачка, экстрагируют фенолом,экстрагируют хлороформом, делают0,2 М раствор хлористого натрия иизвлекают ДНК в воце после осаждения этанолом, содержащий ген игрпромотор-оператор с липкими концамиЕсо ЕЕ идентифицируют по указаннойниже процедуре, которая вызь,ваетвставление Фрагментов в чувствительную к тетрациклину плазмиду, которая ЗВпри вставлении промотор-операторастановится устойчивой к тетрациклину.Плазмида рВРНЕ экспрессирует ампициллиновую устойчивость и содермощью ПАГЭ н нзолнру,от после электроэлюирования, Этот ДНК-фрагмент изрН Б 32 (0,2 мкг;) связывают в условиях, подобных указанным выше, с ЕсоК 1-Тар 1-фрагментом триптофанавого...

Номер патента: 1418339

Опубликовано: 23.08.1988

Автор: Медведев

МПК: C12N 15/00

Метки: двунитевых, днк, ингибитор, разрывов, репарации

...НАГ против 400 мкМ в случае 9-р-арабинофуранозиладенииа); время обработки клеток предлагаемыми ипгибиторами, необходимое для получения максимального эффекта, з 2-4 раза меньше, чем при использовании известногоингибитора (10-15 мин против 3060 мин) .Кроме того, ПГ и ПАГ не проявляютизбирательной токсичности по отношению к клеткам, находящимся з Б-Фазеклеточного цикла, и, следовательно,работа с ними не требует синхронизации клеточных культур и перевода их встационарную фазу роста.П р и м е р 1. Ингибирование репарации дзунитевых разрывов ДНК в клетках Не 1 а, облученных в дозе 100 Гр,полиаспартилглутаматом. Испольэовалинесинхронизованную, находящуюся влогарифмической стадии роста, монослойную культуру дзуднезных клетокНе 1 а, которые...

Номер патента: 1431681

Опубликовано: 15.10.1988

Авторы: Клаус, Ральф

МПК: C12N 15/00, C12N 9/38

Метки: coli-продуцент, бактерий, галактозидазы, еsснеriснiа, штамм

...колонии. Все колонии собирают, 1 О очищают и отделяют.Каждая из полученных указанным способом колоний обладает способностью использовать рафинозу в качестве единственного источника углерода и одно временно была устойчива к действию ампициллина. Таким образом, они обладают иными свойствами по сравнению со штаммом, который был применен в качестве организма-хозяина. 20Из полученных колоний в каждом случае выделяют плазмидную РБА.Отбирают плазмиду из колоний, которые после обработки ферментом Есо В 1 или Нпй 111 дают меньший второй фрагмент, чем плазмиды других колоний. Бактерии, которые несут эту плазмиду, могут использовать рафинозу в качестве единственного источника углерода и про изводить все ферменты-оперона. По 10 мкг РБА рВТ 100 иэ...

Номер патента: 1436887

Опубликовано: 07.11.1988

Авторы: Аксель, Вильям, Говард, Джон, Питер, Рэймонд

МПК: C12N 15/00

Метки: гормон, днк, кодирующей, крысы, плазмидной, рекомбинантной, роста, человека

...0,1 ммоль ЭДТКдо 25 смоль и тДНК,После экстрагирования этанолом реакционной смеси и хроматографического анализа на БерЬайех С, 32 ркДНК, элюированную в пустой объем,осаждают при помощи этанола. В результате такой обработки обеспечивается высокий выход молекул кДНК, концы которой связаны основанием, Линкер Ыпй 111 лигируют с кДНК осущестовляют при помощи инкубации при 14 Св смеси бб ммоль трис-НС 1, рН 7,6,6,6 ммоль хлорида магния, 1 ммольАТФ, 10 ммоль дитиотрейтола, 3 ммольдекамера Нпй ТТТ с показателем 105отсчетов в 1 мин/мол и лигазы ДНК Т 4,приблизительно 500 ед./мл, в течение1 ч. Чтобы дезактивировать лигазу,ореакционную смесь нагревают до 65 С;которуи поддерживают в течение 5 мин,Предварительно к ферментам, содержащим...

Номер патента: 1439122

Опубликовано: 23.11.1988

Авторы: Гончарова, Заренков

МПК: C12N 15/00

Метки: антигена, дефектных, микроба, мутантов, оболоченного, синтезу, фракции, чумного

...сохраняется. Выделения и гель-электроФорез у плазмидной ДНК обнаруживают делецию плазмид рУТ. Реверсии к Рга 1 -фенотипу не наблюдают в течениео года при хранении штаммов при +4 С.П р и м е р 2. 10 клеток У,рея 5+1 я 377 (рУТ, рУРТп 10) высевают на пластинку 1,57-ного агара 1 В с 20 мМ оксалата Еа, рН 7,2. Посевы инкубируют при 37 С 3 сут. Частота появления крупных колоний -1 О . 10 таких клонов исследуют на продукцию "Фракции 1", "мышиного" токсина и проводят гель-электрофорез выделенной из них плазмидной ДНК. В восьми из них имеется делеция рУТ-плаэмиды с потерей "фракции ", но с сохраненной продукцией мышиного токсина.П р и м е р 3. 10 клеток штамма У.резня 377 (рУТТп, рУ 7, рУРТп 10) высевают на агар, содержащий 25 мм оксалата Иа,...

Номер патента: 1439123

Опубликовано: 23.11.1988

Авторы: Бабичев, Коротяев

МПК: C12N 15/00

Метки: nb-4065, r-фактора, бактерий, вкпм, еsснеriснiа, идентификации, штамм

...(3000 мкг/мл).Штамм Е.со 11 К 12 С 600 Кхй (рКМК 334) используют в.качестве донора в коньюгационном скрещивании. В качестве реципиента используют штамм Е.со 1 д К 12 153 шей рго Ба 1 Устойчивость к тетрациклину, стрептомицину и сульфаниламидам у трансконь югантов соответствует таковой у донор- ного штамма. Частота переноса рКМК 334 в бесплазмидный штамм сос тавляет 1,510 при 20-часовой конь" югации. При. 5-минутной коньюгации передачи плазмиды в бесплазмидный штамм не происходит,П р и м е р 1. Плазмидную ДНК из штамма Е.со 1 К 12 С 600 КхЕ " (рКМК 334) выделяют по методу ВхгпЪохш, Эо 1 у. Молекулярный,вес определяют по элект рофоретической подвижности ДНК плазмиды рКМК 334 в 0,8 Х-ном агарозном геле в трис-боратном буфере (рН...

Номер патента: 1439124

Опубликовано: 23.11.1988

Авторы: Анисимов, Дроздов, Можаров

МПК: C12N 15/00

Метки: бактериальной, выделения, днк

...на освободившуюся ДНК. В результате применения указанного методического приема получаемый продукт содержит меньше по.45 вреждений и в меньшей степени, чем в случае использования известного способа, загрязнен примесями ДНК и белкаПредлагаемый способ позволяет регулировать полноту лизиса путем изменения времени инкубации клеток с лизирующей смесью, а следовательно, в отличие от известного может быть использован не только для получения плаэмид, но и для выделения хромосомной ДНК, Дополнительное обогащение продукта нужным типом ДНК (хромосомной или плазмидной) осуществляется за счет изменения температурногорежима при центрифугировании,П р и м е р 1. Вьщеление плазмидыр 11 Г 4 К иэ ЕвсЬег 1 сМа со 11 НВ 101,Культуру бактериальных клеток...

Номер патента: 1440915

Опубликовано: 30.11.1988

Авторы: Золотилина, Мавлани, Нурматова, Эгамбердиев

МПК: C12N 1/18, C12N 15/00

Метки: cerevisiae, sасснаrомuсеs, вкпм, дрожжей, используемый, лепешек, нон, оби, приготовления, у-695, хлебопечении, штамм

...рафинозу, фруктоэу, мальтозу, галактозу,маннит, сорбит, Не усваивает лактозу, арабинозу,дульцит,Отношение к органическим кислотам,Усваивает винную, уксусную. Не усваивает яблочную, янтарную,Отношение к азотистым соединениям, Усваивает серно-кислый аммоний,пептон. Не усваивает мочевину. Штамм является представителем пылевидных расс дрожжей, По классификации В.И,Кудрявцева относится к Басспагошусея сеге 1 яае.Для получения предлагаемого штамма, изучен микробиологический состав раэ личных спонтанных тестовых заквасок "хамир-туруш". Выделено 39 штаммов хлебопекарных дрожжей, Первичный отбор проводили в ферментере для непрерывного культивирования. В опытах использовали 8 Блг Солодовое сусло.оОтобран штамм дрожжей при Д=М=0,19 ч.55...

Номер патента: 1442546

Опубликовано: 07.12.1988

Авторы: Дегтярев, Жилкина, Репин

МПК: C12N 15/00, C12N 9/14

Метки: cgtagn, gcatcn, нуклеотидов, последовательность, расщеплять, рестриктазы, способной, узнавать

...проводят при 4 С, Биомассу ресуспендируют в буфере А (0,05 М трис-НС 1, рН 75; 5,4 10 М ЭДТА, О, 1 М 2-меркаптоэтанол, 0,2 Х ИР) в соотношении 6 г биомассы на 20 мл буфера. Разрушают ультразвуком в ультразвуковом дезинтеграторе МБЕ три раза по 40 с на частоте 20 кГц, амплитуда 12 мкм, Осаждают клеточные остатки при 16 тыс, об/мин в течение 30 мин, Осветленный супернатант наносят на колонку с фосфоцеллюлозой Р, предварительно уравновешенную буфером В (0,02 М КНРО, рН 7,5; 5,4 10 М ЭДТА, 0,1 М 2-меркаптоэтанол), колонку промывают этим же буфером, объем которого равняется двум объемам смолы. Сорбированный на Фосфоцеллюлозе белок смывают 1 М ИаС 1 в буфере, собранный белок диализуют 3 ч против 3 л буфера и.наносят на колонку с...

Номер патента: 1443806

Опубликовано: 07.12.1988

Авторы: Дьердь, Имре, Пал

МПК: C12N 15/00

Метки: вектора, конструирования, плазмидного, рнс312, рнс314, рнс624

...геле,Концы молекулы содержащей однотяжевые участки, пслуча.ные при расщеплении ферментами ВашН 1 и НпГ 1,превращают в тупые концы субфрагмен з144380 том Кленова с помощью ДНК полимеразы 1,а затем рециркуляризируют Т индуцированной полинуклеотидной лигазой. Легированные ДНК трансфор 5 мируют в клетки НВ 101 и выделяют един:чные .:олонии. Получают плазмиду рНС 312, которую нельзя расщепитьэндонуклеазой ВашН 1, но можно линеаризировать ЕсоК 1 и получить фрагменты 10 1495 вр и )1 э вр после расщепления НпГ 1. Для получения вектора с большим числом копий подходящего для клонирования ДНК фрагментов с тупыми концами, плазмиду рНС 312 расщепля ют рестрикционными эндонуклеазами ЕсоК 1 и Нпй 111, а затем из агарозного геля выделяют фрагмент...

Номер патента: 1446159

Опубликовано: 23.12.1988

Авторы: Данилюк, Дегтярев, Серпинский, Синяков, Чижиков

МПК: C12N 15/00

Метки: вектор, днк, конструирования, концами, липкими, произвольными, рмв, фрагментов

...имеющий дополнительный Ро 1 1- сайт в плазмидной ДНК, выращивают . в 100 мп среды, содержащий 50 мкг/мпо апициллина, в течение 16 ч при 3 С на качалке (200 об/мин). Клетки собирают центрифугированием (6000 об/мин, 4 О 10 мин, 4 С), плазмидную ДНК рМВ 121 выделяют щелочным методом с последующей дополнительной очисткой в градиенте плотности СзС 1.5 мкг ДНК плазмиды рМВ 121 расщепляют 10 ед. эндонуклеазы рестрикции Рз 1 в 50 мкл раствора, содержащего буфер 1 и 50 мМ МаС 1, 1 ч прио37 С. Затем к реакционной смеси добавляют ИаС 1 до концентрации 150 мМ, 2-меркаптоэтанол до 20 мМ и 10 ед. эндонуклеазы рестрикции Яа 1 СТ, выдер-. живают 1 ч при 37 С. Реакционную смесь после добавления 6 мкл 0,4 М ЭДТА, рН 8,0 экстрагируют равным объемом...

Номер патента: 1446160

Опубликовано: 23.12.1988

Авторы: Данилюк, Дегтярев, Серпинский, Синяков, Чижиков

МПК: C12N 15/00

Метки: вектор, днк, конструирования, концами, липкими, произвольными, рмв, фрагментов

...добавляют ЙМТР., до концентрации 100 мкМ и НО до общего объема 100 мкл, прибавляют 1 ед, ДНК-полимераэы 1 (фрагмент Кленова) и выдерживают 30 мин при 20 С. Реакционную смесь разбавляют 5 мкл 0,4 М ЭДТА (рН 8;О) и экстрагируют водным фенолом и изоамиловым спиртом. ДНК осаждают двумя объемами этанола. 0,5 мкг полученной ДНК обрабатывают 2 ед. ДНК-лигазы фага Т 4 в 30 мкл буфера 2 в течение 16 ч прио10 С, Реакционную смесь используют для трансформации клеток Е.со 1 ВМН 7118. Суспензию клеток после трансфор - мации высевают на 1,5 Х агар, содержащий 45 мкг/мл ампициллина и 50 мкг/мл Х-Са 1. Из колоний, имеющих Ьас фенотип, выделяют плазмидную ДНК щелочным методом. Взр 1 и Взр 1 + Нпй 111 - гидролизаты полученной ДНК анализируют в 4 Х ПААГ....

Номер патента: 1449585

Опубликовано: 07.01.1989

Авторы: Инге-Вечтомов, Носков, Павлов, Тюлякова

МПК: C12N 15/00

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, гену, дрожжей, мутантов

...(РЬЬ 12) представляет собой дупликацию гена ЬУ 82, 50 полученнуюпутем интеграции плаэмиды гидроксиламинопурин в количестве 100 мкгмл, Обработку проводят в течение 4 ч. Затем суспензию аликвотами по О, 1 мл высевают на чашки с селективной средой. После 5 дней инкуобации чашек при 30 С отсевают выросшие на селективной среде колонии и, используя тест на аллелиэм, выявляют среди них мутантов по гену 1 Л 85,Данные отбора мутантов по гену ЬУ 85 у штаммов 53 Т-Д 327 и тра 1-53 ТД 327 (РЬЬ 12) после обработки 6-И-. гидроксиламинопурйном представлены в табл.1. Из табл.1 видно, чтоштамма53 Т-Д 327 основную массу отобранныхауксотройов по лизину представляютмутанты по гену ЬУБ 2 (99,9%) и лишьнезначительную часть. мутанты по генуЬУЯ 5 (1,1%), У...

Номер патента: 1451164

Опубликовано: 15.01.1989

Автор: Гуткевич

МПК: C12N 15/00

Метки: viтrо, кинетики, клеточных, оценки, популяций

...И- и Я-про филей аппроксимировали кусочно-линейными функциями. В общем виде эта процедура состоит в описании каждого пика М- и Б-профилей двумя линейными функциями 1 20 25 где 3 - коэффициент регрессии, характеризующий восходящуючасть пика;- время, в течение которогопеременная у увеличивается;- коэффициент регрессии, характеризующий нисходящуючасть пика;й " время, в течение которогопеременная у уменьшается.Приравнивая значения у и у нулю, находим точки начала и окончания пика. На фиг.1 рассмотрим второй пик кривой М-профиля (интервал между 3 и 1 О часами фракционирования). Восходящая часть пика начинается в точке, соответствующей 3 ч и продолжается в течение двух последующих часов, описывается выражением, которое является...