Патенты с меткой «днк»

Способ получения высокополимерной днк из тканей животных

Загрузка...

Номер патента: 489017

Опубликовано: 25.10.1975

Авторы: Рассказов, Головлев

МПК: A61K 38/16, C07H 21/04

Метки: тканей, высокополимерной, днк, животных

...( на 1 Г молок 20 мл раствора) при температуре0не выше 5 С. Раствор ДНП фильтруют чО ре; бумажную пульпу под давлением, Фильтрат разбавляют равным объемом дистиллированной годы. ДНК осаждают равным объемом 96; ного этилового спирта и промывают в 70-, 80, 90 и 96%-ном этаноле.25 Высу 1 пивают спирт-эфиром 3:1 и эфиром. ей жи- ждения вотных путем хлористого натением дезоксиридвухмолярным растворомрия с последуюшим осаждбонуклеопротеидов (ДНПводой и освобожде иемлярном растворе хлориссью хл Ор Опор м-Ок тило въ 1 Й), разбавлениемот белка в одномоого натрия со смеспирт. беспе 1 ивае ой способ не ства очистки Однако тысокого ка цель ния ювышения качества очистки иесса. по к технологического про 1 юму способу Окстр 11 кц рО м с 0 рнок и...

Способ получения биомассы, обогащеннойфаговой днк

Загрузка...

Номер патента: 834123

Опубликовано: 30.05.1981

Авторы: Витенберга, Хейслере, Шмите, Ансберга

МПК: C12N 1/00

Метки: биомассы, обогащеннойфаговой, днк

...аналогичныпримеру 1, После нагревания культу.оральной жидкости до 44-45 С глюкозудобавляют в количестве 1,0%, а лецитин 0,05%, Далее по примеру 1,Выход биомассымг/мл 5,220 Количество внутриклеточного вегетативного Фага,БОЕ/мг биомассы 2,8 ОфПредлагаемый способ обеспечивает25 получение Фаговой ДНК для нужд молекулярной биологии и исследований вгенной инженерии с высоким выходомбиомассы и целенаправленным накоплением в ней интактной ДНК фага лямбда. 3Глюкозу вводят в питательную средув виде стерильного раствора.Проводят термообработку биомассыпри 44-45 С в течение 2-3 мин с последующим выращиванием на среде, содержащей дополнительно 0,05-0,1% лецитина и 0,5-1,0% глюкозы.Выход биомассымг/мл 4,0-5,2Количество внутриклеточного вегетационного...

Способ получения днк из биомассы еsснеriснiа coli

Загрузка...

Номер патента: 861399

Опубликовано: 07.09.1981

Авторы: Ансберга, Шмите, Ясюкевича, Хейслере

МПК: C12N 1/08

Метки: еsснеriснiа, днк, биомассы

...А, Ач Корректор Е. Рашко Редактор Г, Бельская РЗаказ 6456/7 Тираж 528ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Очистку фага проводят в 33 мл градиентаСвС (д 1,4; д 1,5; О 1,3), Осадок центрифугируют.Полученную массу фага диализируют 2 раза. по часу против 2 л буфера, содержащего0,05 М йаС 1, 0,01 М трис, рН 7,9, 0,01 МЕДТА - йа. К массе фага прибавляют 3,5 мл10%.ного додецилсульфата натрия. Раствор нагревают до 48 С.Для удаления белка к раствору, содержащему 10фаговый ДНК, прибавляют. фенол. Осадокцентрифугируют, Операцию повторяют, к центрифугату прибавляют равный объем смесихлороформ-изоамиловый...

Способ выделения мутантов дрожжей, поглощающих из среды и включающих в днк экзогенные нуклеотиды

Загрузка...

Номер патента: 878794

Опубликовано: 07.11.1981

Авторы: Иванов, Королев, Грачева, Ткаченко

МПК: C12N 15/00

Метки: нуклеотиды, включающих, экзогенные, дрожжей, мутантов, выделения, поглощающих, днк, среды

...предшественников ДНК восполняется в результате биохимических реакций из УМФ, то для роста клеток це требуется добавки нерадиоактивных пиримидиновых предшествен- БО ивков Д 1-1 К, Радиоактивный предшественник ДНК с максимальной удельной активностью добавляется в среду роста в конечной концентрации 10 - 100 мкКи/мл.После 40 ч выращивания клетки отделяют 55 от радиоактивной среды, промывают фос 1 ратным буфером (рН = 7) и ресуспендиру.ют в этом же буфере.Полученные радиоактивные клетки про.веряют по трем параметрам. Во-первых,60 определяется количество метки, поглощен.ной клетками. Определенное количество клеток гидролизуется. Радиоактивност 1 гидролизата определяется на жидкостном сцинтилляционном счетчике. Во-вторых, оп.65 ределяется...

Способ отбора микроорганизмов, содержащих рекомбинантные молекулы днк

Загрузка...

Номер патента: 912754

Опубликовано: 15.03.1982

Авторы: Солонин, Таняшин, Баев, Кузьмин

МПК: C12N 15/00

Метки: рекомбинантные, отбора, молекулы, микроорганизмов, содержащих, днк

...исходным вектором. Такие векторные молекулы ДНК называют векторами инсерционной инактивации. 4ганиэмов отбирают с того места контроля, где клетки опыта погибли,П р и м е р 1, Клоны клеток получают после трансформации компетентных клеток Е,сой НВ 101 .чесА смесью сшитых с помощью полинуклеотидлигазы фага Т 4, Гсо 1-Фрагментов ДНК Фага Т 4 с расщепленной эндонуклеазой Есор ДНК векторной молекулы рХ 13.Полученные клоны клеток пересевают на поверхность твердой питательной среды, содержащей 10 г бакто"трипто" на, 5 г дрожжевого экстракта, 10 г МаСВ, 15 г бакто-агара на 1000 мл воды, с помощью шаблона. Пересев де.лают одновременно на две чашки Петри, после чего поверхность питательной среды одной чашки облучаютУф-светом, (опыт)....

Способ приготовления комплексов днк с белком для электронно микроскопического исследования

Загрузка...

Номер патента: 946517

Опубликовано: 30.07.1982

Авторы: Попенко, Венгеров

МПК: G01N 23/225, A61B 10/00, G01N 33/48 ...

Метки: приготовления, электронно, комплексов, днк, белком, микроскопического, исследования

...путем смешивания растворов ДНК и белка, перенесения их на пленки-подложки иконтрастирования, раствор ДНК наслаивают на поверхность гипофазы раствора белка,р и м е р. Исследование струккомплексов ДНХ с гистоном Н 1. 3 Каплю раствора ДНК (5 мгк/мл в 25 мМ ТЭА-НСЯ буфере) осторожно наслаивают на поверхность гипофазы, содержащей 2 мкг/мл гистона Н в присутствии 0,14 М НаСС.Образование пленки ДНК на поверхности контролируют по меткам талька. Затем через различные промежутФки времени касаются полученного пят" на электронно-микроскопической сеточкой, покрытой коллодиевой пленкой-подложкой, Избыток жидкости отсасывают фильтровальной бумагой. Сеточку контрастируют круговым напылением сплавом Рс-РЙ. Просмотр производят на электронном...

Способ определения днк в клетках на цитологическом препарате

Загрузка...

Номер патента: 998910

Опубликовано: 23.02.1983

Авторы: Загольская, Иржанов, Серов

МПК: A61B 10/00, G01N 33/48

Метки: днк, клетках, цитологическом, препарате

...клетки, а иногда комплексы клеток или даже мелкие кусочкитканей.Наличие свободных кле лексов их дает основание. данные препараты цитологхотя при изготовлении со(20 случаев) 7,36 -0,20 Составитель С. МалютинаТехред А.Бабинец Корректор Ю. Макаренко Редактор В. Лазаренко Подписное Заказ 1143/65 Тираж 871ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП фПатентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 клеток травмируется, остается достаточное количество их, чтобы судитьо структуре органа или ткани, а также для,количественного определениясодержания ДНК тех или иных компонентов в цятоплаэме и ядрах клеток.5Кроме того, данные препараты. можноподвергнуть...

Способ определения степени гомологии последовательности нуклеотидов днк

Загрузка...

Номер патента: 1013468

Опубликовано: 23.04.1983

Автор: Швецов

МПК: C12N 1/00

Метки: нуклеотидов, гомологии, степени, последовательности, днк

...а не- связавшиеся меченые фрагменты ДНК- в нижней части.Нижнюю часть геля с несвяэавшимися мечеными фрагментами ДНК удаляют, а верхнюю часть геля разрезают по пробам, Пробы просчитывают на радиоактивность. Из каждого значения радиоактивности по пробам . высчитывается значение, полученное при просчете контрольный пробы, где в реак" цию гибридизации не бралась высокомолекулярная ДНК, а были только од" ни низкомолекулярные меченые фрагменты реперной ДНК. В пробе, где проводилась гибридизация высокомолекулярной реперной ДНК и низкомолекулярных меченых Фрагментов реперной ДНК, значение радиоактивности будет самым большим, Это значение и степень гомологии принимают эа 1003 и относительно ее расчитывают степень гомологии других исследуемых...

Способ определения моноаддуктов и диаддуктов днк

Загрузка...

Номер патента: 1028719

Опубликовано: 15.07.1983

Авторы: Евграфов, Тиняков, Федотов, Македонов

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, моноаддуктов, диаддуктов

...часть препарата ДНК сепарируют на восемь отцельных порций 10обьемом по 100 мкл. Кажцую порцию,ПНКоблучают повторно длинноволновымиультрафиолетовыми лучами с длиной волны 337 нм с помощью импульсного лазера ЛГИнри комнатной температуре 15разное время, в пределах от 20 до 550 мин,Часть исходно обработанной ДНК икаждую порцию повторно-облученной ДНКпо отдельности денатурируют необратимо.для этого ДНК нагревают при 68 С 202 мин в следующем составе; 50 мклраствора ДНК, 10 мкл 30% глиоксаля,100 мкл 99% формамица.После ценатурации готовят известнымспособом препараты для электронной25микроскопии. Электронно-микроскопическим методом измеряют длину молекул ДНК и количество сшивок (циаддуктов) в этих молекулах в каждой порции ДНК, Для...

Способ определения концентрации днк

Загрузка...

Номер патента: 1112062

Опубликовано: 07.09.1984

Авторы: Паскевич, Блох

МПК: C12Q 1/68

Метки: днк, концентрации

...реактивы; высокомолекулярная 1 НК, вьеделее 1 ная из зобиойжелезы теленка и диализовянная в те.Нке, ст протиь 11,0, 1 н. НС 10 Е,02 ц, ПС 1 ОН 0,5 ц. НС 101, растворцасьшЕеццого КОН, культура 1 ЯССОЬЯС 1.11 .з дсо 1 ор 11,пз Но, питательнаясреда дге 1 микроорганизмов,5 мл раствора ДНК смешивают с 5 млраствора 1 ц, НС 10. и кипятят на водяной бяце в течение 25 мкн. Г 1 олучен 1.-11 гкдролкзят ДНК охлаждают и нейтрд)1 изу 1 о 1 цескольке 1 ми каплями раствора КОП. Выпавший осадок отделяютпецтрифугкрава 11 ием (3000 аб/мин,20 мкц), Р надосадачной жкдкости остд 1 отся продукты кислотцагс гкдролизаДПК, Ка Ецецтрдц:"Ею ДПК в надосадачной.е:.кпкосте 1 определяют спектрофотометричеси, П а; в .Исывдемом экспериментеконцентрация ДНК в...

Способ получения плазмидной днк

Загрузка...

Номер патента: 1124033

Опубликовано: 15.11.1984

Авторы: Ансберга, Хартмане, Камрадзе, Шафранский, Зилбере, Муйжниекс

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, плазмидной

...следующим 55 образом.Повышение выхода обеспечивается эа счет сохранения суперспиральной структуры ДНК в процессе лиэиса.Понижение количества додецилсульфатанатрия и натра едкого, которые всреду вводятся в определенных соотно"шениях, т.е. в количествах, определяющих возможность регулирования лизисас целью сохранения ковалентно связанной кольцевой плазмидной ДНК, а условия инкубации обеспечивают разделение ковалентно-замкнутой кольцевой,плаэмидной ДНК от балластных веществ.Условия лизиса и инкубации предотвращают релаксацию ковалентно-замкнутойкольцевой плазмидной ДНК в линейнуюи открытую кольцевую ДНК.Предлагаемый способ обеспечиваетнакопление ковалентно-замкнутой кольцевой плазмидной ДНК 95-96 . Процессочистки от РНК проводят...

Рекомбинантная плазмидная днк, способ конструирования плазмидной днк и штамм-продуцент эндонуклеазы рестрикции

Загрузка...

Номер патента: 1130602

Опубликовано: 23.12.1984

Авторы: Кузьмин, Таняшин, Мороз, Глатман, Солонин, Баев, Кравец

МПК: C12N 15/00

Метки: рестрикции, конструирования, днк, плазмидная, штамм-продуцент, эндонуклеазы, рекомбинантная, плазмидной

...цитритов. Желатцну не разжижают.Уреаэцая активность не обнаруживается. Ицдол не образуют.Устойчивость к антибиотикам. Проявляет устойчивость к ампициллину.Генетические признаки штамма:1 фЕсо НФ спи Есо цугес ВСэЪсВ,Г , гпу 1, 1 еп 6, рго А 2, Ьз 4,ГМ 1, агд Е, 1 ас 41, да 1 К 2, ага 14ху 1 5, шег, еэх.П р и м е р 1. Конструированиерекомбцнантной плаэмидцой ДНК р 1 ЬНЧ 86.Плазмцдную ДНК рЬКч 8 вьсцеляютиз штамма ВКИ ВД по методу(С 1 еюе 11, Не 1 пе 1 су, 1969, РНАЯ, 62,1159-1163) .2 мкг выделенной ДНК гидролиэуютрестриктазой Нжд 111 в 100 мкл раствора, содержащего 50 мИ трис-НС 1,рН 7,8, 10 мМ МИКСТ , 2 мМ 2-меркаптоэтанола, 20 мИ ИаС 1 при 37 ОС 1 ч.После прогревания реакционной смесипри 65 ОС в течение 10 мин проводятчкольцевание"...

Способ конструирования рекомбинатной плазмидной днк и штамм продуцент эндонуклеазы рестрикции

Загрузка...

Номер патента: 1074139

Опубликовано: 30.12.1984

Авторы: Кравец, Солонин, Глатман, Кузьмин, Таняшин, Баев, Мороз

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, штамм, эндонуклеазы, рестрикции, плазмидной, рекомбинатной, конструирования, продуцент

...1159-1166).Рестрикционный анализ выделеннойплазмиды р 1 ЬКЧ 7 проводят. с помощьюэндонуклеаз Р 11,ВфИ,Есор .На втором этапе в полученную плазмиду Р 1 йЧ 74 вводят область иммуни-,тета фагас промотором ранних генов Рг и термочувствительным репрессором. Для этого выделяют ДНК фагас 1857 по методу (А,Р. Ка 1 яег,Нояпея 0.8. 1960, /, Мо 1 В 1 о 1392-415),мкг ДНК плазмиды р 1 ЬКЧ 7 и4 мкг ДНК фага 3 с 1 857 инкубируют вбуфере А (2 О мМ Трис-НС 0 рН 7,6,10 мМ МС 12,10 мМ дитиотреитола) сэндонуклеазной рестрикции Вд 1 11Гидролиз проводят в течение часапри 37 С, после чего гидролизат проверяют электрофорезом в О,97 агарозе в ацетатном буфере. ФрагментыДНК фага Л с 1857 (2 мкг) смешивают с линейной ДНК плазмидыр 1 РЧ 7 й (О, 2 мкг), добавляют...

Способ конструирования плазмидной днк, штамм -продуцент эндонуклеазы рестрикции и способ получения эндонуклеазы рестрикции

Загрузка...

Номер патента: 1040791

Опубликовано: 07.02.1985

Авторы: Мороз, Кузьмин, Глатман, Солонин, Кравец, Таняшин, Баев

МПК: C12N 15/00

Метки: конструирования, продуцент, штамм, днк, эндонуклеазы, рестрикции, плазмидной

...Физической структурыплазмидную ДНК выделяют ускореннымметодом (К 1 е 1 п Р,1 ейа 1, 1980,Р 1 азтпЫ, 8, 88-93) .Рестрикционный анализ проводят спомощью эндонуклеаз Р-1, Вя 1 11,11, Отобранные. клоны проверяютна присутствие системы рестрикциимодификации Есо 87. Для этого сравнивают эффективность посева (э.п.)фага; 0 на клетках, содержащихрекомбинантные плазмиды, а такжештаммах С 5183 (гь. -где ) и ) С 5183( г т+ ) с плазмидой рЬ 13. Наличие в клетках модификации устанавливают при снижении э.п. методом(Т. Ага, А.Ао 1 с 1, 3.Васй. 5, 18,1962) . Полученные данные представлены в табл. 2,Как видно из табл. 2, штамм3 С 5183/С 113 на четыре порядка ограничивает размножение фага Ъ0по сравнению со штаммом 1 С 5183( ГО ), не несущем плазмидуу...

Рекомбинантная плазмидная днк 435, кодирующая синтез днк лигазы фага т 4. способ ее конструирования и штамм. вкм в-1449-продуцент днк-лигазыфага т4

Загрузка...

Номер патента: 1122003

Опубликовано: 15.12.1985

Авторы: Таняшин, Солонин, Баев, Трояновский

МПК: C12N 15/00

Метки: днк-лигазыфага, рекомбинантная, днк, кодирующая, фага, плазмидная, конструирования, лигазы, вкм, синтез, в-1449-продуцент, штамм

...Е.со 1 С 600 с множественностью 1 в среде ЬВ (1 О г бактотриптона, 5 г дрожжевого экстракта, 10 г 11 аС 1 нал воды),зсодержащей 10 М МАЗО, Ливис клеток завершают добавлением в среду хлоро7 11 форма (1;100). После удаления обломков клеток центрифугированием (6000, 30 мин, 4 С) клеточные ДНК и РНК лизата гидролизуют одновременно панкреатическими ДНКазой и РНКазой (по 10 мкг/мл) при 20 С, 1 ч, Первичную очистку и концентрирование фага проводят с помощью полиэтиленгликоля 6000 (Зошашого К, Р ег а 1., Чт.го 1 огу, 40, 734-744, 1970). Окончательную очистку Фага проводят равновесным центрифугированием в 4 М СяС 1, 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 0,01 М МяС 1 (И 1 яоп С. С. ег а 1., Мо 1 ес.Сеп.Сепег 156,203-214, 1977). Очищенный препарат фага АМ...

Способ маркирования 11-й хромосомы человека, рекомбинантная плазмидная днк 53 для маркирования, фрагмент геномной днк 53 для маркирования и способ получения фрагмента днк 53

Загрузка...

Номер патента: 1203108

Опубликовано: 07.01.1986

Авторы: Зайцев, Яковлев, Юров, Шапиро, Гиндилис

МПК: C12N 15/00

Метки: плазмидная, днк, 11-й, фрагмента, хромосомы, человека, маркирования, фрагмент, рекомбинантная, геномной

...от анодной каме Оры диализной мембраной. Нижний крайцилиндра с фильтром опускают в катодную камеру;обе электродные камеры заполняют буАером,содержащим 89 мМ"тгйе НС 1,89 мМ Н ВО и 5 мМ ЕЭТЛ1 рН 8,3. Электрофильтрацию растворапроизводят при 5 мМ/см в течение 6-8 ч.После электрофоретического осаждения ДНК на фильтре жидкость удаляют из цилиндра, а желеобразныйслой ДНК растворяют в нужном объеме0,1 чТЕ,Для выделения препаративных количеств плазмидной ДНК культуру Е.со 1, несущую плазмиду, выращивают в25 100 мл среды В (10 г/л пептона, 5 г/л дрожжевого экстракта, 10 г/л ИаС 1) с добавками необходимых антибиотиков (100 мкг/мл ампицилина, 20 мкг/мл тетрациклина и 50 мкг/мл хлорамфеникола) при 37 С на качалке в течение ночи. Клетки...

Способ получения рекомбинантной днк, содержащей ген, кодирующий амилазу

Загрузка...

Номер патента: 1233805

Опубликовано: 23.05.1986

Авторы: Рауль, Коррине, Чарльз, Пирр, Колетт

МПК: C12N 15/00

Метки: рекомбинантной, ген, амилазу, кодирующий, содержащей, днк

...клокчговакие геи; а:ила.и -я,;бце уМ 781 ятьфа тт:уРргт мкг гтНК ,я:бдя 1 М 781 альфа Ату 1такое же когттчес гвс ЦНК плаз.тидырВР 322 разрезали Есс Е 1 при обычныхус.-.ов:лях, Связывание и трансформациювыполз:ллт: и метачке Описяннаи Вприм:ре 1. Каланчи Е, со 1 ттт содержа.шчт: рскамбинан "ную плязмиду, обнаружет:.ы по амилазной активности. Однатакая копания отобрана и обозначенаЕ, Гот 01, 7002 (рСР 2) и сдяка нахракэнис в 1 СВ 12 февраля 980 г.пад номерам т 1 С 1 В11573.Ауплифтлкяпля гена.Лмплфт;кяпия кодируютцего амитазугет 2 лямбдя мМ 781 ЯтльфЯ Лтт 1 Уи продуцирование амиляэы осушествлены сле-ютттм "б-;.:Бактерия - хозяин (Е, со 1 НВ 101)культлирозян в ЕВ среде с 2 мМохлоридя магния при. 3/ С до достижеь,.я оптичесьаи...

Рекомбинантная днк и способ ее получения

Загрузка...

Номер патента: 1250575

Опубликовано: 15.08.1986

Авторы: Татьков, Ильичев, Петренко, Семенова

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, рекомбинантная

...фермецтативную активность-галактозидаэы.П р и м е р. Лвухцепочечную кольцевую ЛНК МЗгггр ЯЯР 0212 выделяют из штамма бактерий Евс 1 гегсЬа со.1. ,гп 103, трансформированных этой ДНК и очищают пентрцфугированием в градиецте плотности хлористого ггезия.Гоответствие ЛНК приписываемой структуре подтверждают анализом продуктов Фермецтативного гидролиза ЛНК рег триктазами ЕсоК 1 Рв 1 и Ба 1 С 1, Продукты гидролиза, фрагменты ЛНК разчичцой протяженности, идентифицируют по их подвижггости в 67,-ггом полиакриламидцом геле в сравнении с зтаггоцными фрагментами Вэр 1 - гидролизата плазмиды рВ 1 321, Наблюдают образование фрагментов длиной около 300 и 500 пар цуклеотидов (п.н.), что соответствгет следующей ожидаемой схеме гилролиза: ЕсоВ...

Способ получения рекомбинантной днк, кодирующей нуклеотидную последовательность инсулина

Загрузка...

Номер патента: 1308199

Опубликовано: 30.04.1987

Авторы: Питер, Вильям, Рэймонд, Говард, Аксель, Джон

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, нуклеотидную, инсулина, последовательность, кодирующей, рекомбинантной

...9 мИ М 8 СС, 10 мИ дитиотрейтола, 50 мМ трех немеченных 10 деоксирибонуклезидтрифосфатов, 1 мМ меченого 32 в порции нуклеозидтриРфосфата с удепьной радиоактивностью1 - 10 Ки/ммоль, 50 мкг/мл к-ЛНК и 220 ед/мл обратной транскриптазы. Реакционную смесь инкубируют при 45 Со в течение 120 мин. Реакцию останавливают добавлением ЗДТА-Иа, до 25 мМ,экстрагируют фенолом и подвергают хроматографическому анализу на сефа дексе С, а затем осаждают этанолом, Порции продукта реакции с показателем от 500 до 1000 отсчетов в минуту анализируют с помощью электрофореза на геле. Полоса поглощения гетеродисперсоида сосредоточена вокруг 450 нуклеотидов по длине.Порции ДНК, полученные по примерам 1 и 2, порознь обрабатывают пищеварительными ферментами с...

Способ определения днк в клетках

Загрузка...

Номер патента: 1317360

Опубликовано: 15.06.1987

Авторы: Малиновский, Ланда

МПК: G01N 33/52, G01N 33/48

Метки: клетках, днк

...5 мин 20 при 5000. Осадок промывали в дистиллированной воде и обрабатывали 1 ч раствором РНКазы (0,17-ный раствор в трис-буфере рН 7,2-10 мМ Мя 61 ) при 37 С, После обработки 25 РНКазой клетки подвергали кислотному гидролизу в 6 ИНС 1 при комнатной температуре до полной депуринизации ДНК, Для приготовления рабочего,раствора красителя брали 10 мг бромистого этидия на 100 мл воды. Непосредственно перед окраской к раствору красителя добавляли О, 1 мл хлористого тионила. Это количество с учетом растворимости БО позволяет получить в растворе эквймолярные концентрации красителя и сернистого газа. Указанные концентрации красителей и хлористого тионила быпи получены опытным путем при проверке зависимости интенсивности флюаресценции...

Рекомбинантная плазмидная днк уе psg94, кодирующая синтез производного белка оболочки вируса лейкоза крупного рогатого скота, способ ее конструирования и штамм дрожжей sасснаrомuсеs cererrial-продуцент производ

Загрузка...

Номер патента: 1337408

Опубликовано: 15.09.1987

Авторы: Эльдаров, Брантл, Рослер, Скрябин, Розенталь, Ланг, Баев

МПК: C12N 15/00

Метки: psg94, оболочки, рогатого, днк, рекомбинантная, лейкоза, скота, производного, cererrial-продуцент, sасснаrомuсеs, белка, крупного, кодирующая, плазмидная, конструирования, синтез, дрожжей, вируса, производ, штамм

...пентрцфуировлттця аглдокклеток сусценпцруют в том ж суфрав концентрации 3 х 10 клток/ьтцц,К 200 мл сусцензиц к:теток прибавляют 20 мкг плдзмидной ПНК УЕр 809 тк тОО мкл 507, раствора П.Э.1 . 4000выдерживают 1 ч при 30 мин. Пос.те0инкубируют 5 миц при 42 С. Суспензгттоосаждают пентрцфугированием 1 О с прц1 О тыс. аб./мин. Осадок сусцендцруют в 300 ыкл воды и высевяют цо100 мкл на часики с твердой се:тектив - )Внай средой (0,67 Х дрожжевых азотистых оснований, 2 Ж глюкозы, 20 мпт/лгистидицл, 22 бактолгара),Колонии трансформацтов поятляютсяца 2- децт пос:те пасетов)тот:. - 20чг.кую стлбклтность плазмцдь тЕРВС 94в трацсформацтах определяют клк процент клеток, сохранивших плазктдупри росте в селективных условкяхминимальной среде без лейпкттд,...

Рекомбинантная плазмидная днк рсек 10, кодирующая синтез фрагмента кленова днк-полимеразы 1 е. coli, и способ ее конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1392094

Опубликовано: 30.04.1988

Авторы: Кузнеделов, Дегтярев, Нетесова, Кравченко, Петренко, Ривкин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, рекомбинантная, кодирующая, кленова, coli, фрагмента, днк-полимеразы, синтез, конструирования, плазмидная, рсек

...фрагменты ДНК электрофорезом в 47.-ном полиакриламидном геле. Гель окрашивают в растворе бромистого этидия 2 мкг/мл, вырезают из геля зону, содержащую векторную часть ДНК плазмиды рСЕЕ 12, и выделяют ДНК из геля методом электроэлюции. 10 мкг плазмидной ДНК рС 155 гидролизуют 20 ед. рестрикционной эндонуклеазы ВашН 1 в 100 мкл буфера для гидролиза, содержащего 20 мМ трис-НС 1 рН 7,8, 10 мМ МяС 1, 50 мМ МаС 1, 2 мМ 2-меркаптоэтанола, при 37 С 1 ч. В полученную реакционную смесь добавляют 25 ЙАТР, ВСТР, ЙСТР и ТТР, до 0,05 мМ каждого, 10 ед. ДНК-полимеразы 1 и инкубируют 30 мин при 12 С. Реакцию останавливают добавлением Иа ЭДТА до концентрации 20 мМ, белок удаляют экстракцией водным фенолом, рН 8,0 и ДНК трижды переосаждают...

Способ конструирования рекомбинантной плазмидной днк per-33, кодирующей зрелый -интерферон человека

Загрузка...

Номер патента: 1417800

Опубликовано: 15.08.1988

Авторы: Рудольф, Петер, Марк-Брус, Эва, Норберт, Гюнтер

МПК: A61K 38/21

Метки: конструирования, per-33, плазмидной, днк, рекомбинантной, зрелый, кодирующей, интерферон, человека

...тупой конец фрагмента размером 90 Ьр легируют с тупым концом КВБ и получают молекулы, в которых содержат КВБ в направлении ориентации вниз от промотора. После реакции лигазу инактивируют в течение 10 мин при 70 фС, устанавливают концентрацию ТА-буфера и дополнительно переваривают с помощью 200 единиц Ндпй 111 и 10 единиц Есо К 1. 50В образующихся в реакции мульти- мерах наряду с желательной реакцией могут.лигироваться друг с другом как Есо К 1-концы, так и также Нпй 111- концы и снова превращаться в мономеры. Затем пробу разделяют на 6 Е-ном полиакриламидном геле и вырезают из геля промотор-операторный КВБ-фраг мент. размером 100 Ьр, который имеет 0 8Есо К 1- и Нпй 111-концы электрофоретически элюируют, чтобы отделить от избытка...

Ингибитор репарации двунитевых разрывов днк

Загрузка...

Номер патента: 1418339

Опубликовано: 23.08.1988

Автор: Медведев

МПК: C12N 15/00

Метки: ингибитор, двунитевых, репарации, разрывов, днк

...НАГ против 400 мкМ в случае 9-р-арабинофуранозиладенииа); время обработки клеток предлагаемыми ипгибиторами, необходимое для получения максимального эффекта, з 2-4 раза меньше, чем при использовании известногоингибитора (10-15 мин против 3060 мин) .Кроме того, ПГ и ПАГ не проявляютизбирательной токсичности по отношению к клеткам, находящимся з Б-Фазеклеточного цикла, и, следовательно,работа с ними не требует синхронизации клеточных культур и перевода их встационарную фазу роста.П р и м е р 1. Ингибирование репарации дзунитевых разрывов ДНК в клетках Не 1 а, облученных в дозе 100 Гр,полиаспартилглутаматом. Испольэовалинесинхронизованную, находящуюся влогарифмической стадии роста, монослойную культуру дзуднезных клетокНе 1 а, которые...

Способ определения количества днк в клетках костного мозга

Загрузка...

Номер патента: 1427303

Опубликовано: 30.09.1988

Автор: Обухан

МПК: G01N 33/48

Метки: количества, мозга, костного, днк, клетках

...осуществляется следующим образом, 10Мазки костного мозга окрашивают по методу Фельгена и подвергают фотометрии при использовании в качестве стандарта оптической плотности ок" рашенных ядер малых лимфоцитов с дип лоидным набором хромосом, находящихся в стадии интерфаэы.П р и и е р. Мазки костного мозга фиксируют в смеси Карнуа (2 ч), гид" ролизуют в 1 н. НС 1 (11 мин), охра шивают основным фуксином (60 мин), обезвоживают и заключают в бальзам под покровное стекло. Цитофотометрию ДНК производят двухволновым методом на цитофотометре МУФпри длинах 25 волн 546 и .480 нм. Измерения выполняют по общепринятой методике, ис" пользуя зонд диаметром 200 мкм, винтовой окуляр-микрометр для измерения диаметра ядер при увеличении микроскопа Ок.7...

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей гормон роста крысы или человека

Загрузка...

Номер патента: 1436887

Опубликовано: 07.11.1988

Авторы: Аксель, Говард, Вильям, Джон, Питер, Рэймонд

МПК: C12N 15/00

Метки: плазмидной, человека, кодирующей, днк, роста, рекомбинантной, крысы, гормон

...0,1 ммоль ЭДТКдо 25 смоль и тДНК,После экстрагирования этанолом реакционной смеси и хроматографического анализа на БерЬайех С, 32 ркДНК, элюированную в пустой объем,осаждают при помощи этанола. В результате такой обработки обеспечивается высокий выход молекул кДНК, концы которой связаны основанием, Линкер Ыпй 111 лигируют с кДНК осущестовляют при помощи инкубации при 14 Св смеси бб ммоль трис-НС 1, рН 7,6,6,6 ммоль хлорида магния, 1 ммольАТФ, 10 ммоль дитиотрейтола, 3 ммольдекамера Нпй ТТТ с показателем 105отсчетов в 1 мин/мол и лигазы ДНК Т 4,приблизительно 500 ед./мл, в течение1 ч. Чтобы дезактивировать лигазу,ореакционную смесь нагревают до 65 С;которуи поддерживают в течение 5 мин,Предварительно к ферментам, содержащим...

Способ выделения бактериальной днк

Загрузка...

Номер патента: 1439124

Опубликовано: 23.11.1988

Авторы: Дроздов, Анисимов, Можаров

МПК: C12N 15/00

Метки: выделения, днк, бактериальной

...на освободившуюся ДНК. В результате применения указанного методического приема получаемый продукт содержит меньше по.45 вреждений и в меньшей степени, чем в случае использования известного способа, загрязнен примесями ДНК и белкаПредлагаемый способ позволяет регулировать полноту лизиса путем изменения времени инкубации клеток с лизирующей смесью, а следовательно, в отличие от известного может быть использован не только для получения плаэмид, но и для выделения хромосомной ДНК, Дополнительное обогащение продукта нужным типом ДНК (хромосомной или плазмидной) осуществляется за счет изменения температурногорежима при центрифугировании,П р и м е р 1. Вьщеление плазмидыр 11 Г 4 К иэ ЕвсЬег 1 сМа со 11 НВ 101,Культуру бактериальных клеток...

Вектор рмв 123 для получения фрагментов днк с произвольными липкими концами и способ его конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1446159

Опубликовано: 23.12.1988

Авторы: Серпинский, Синяков, Чижиков, Дегтярев, Данилюк

МПК: C12N 15/00

Метки: фрагментов, днк, липкими, рмв, произвольными, вектор, концами, конструирования

...имеющий дополнительный Ро 1 1- сайт в плазмидной ДНК, выращивают . в 100 мп среды, содержащий 50 мкг/мпо апициллина, в течение 16 ч при 3 С на качалке (200 об/мин). Клетки собирают центрифугированием (6000 об/мин, 4 О 10 мин, 4 С), плазмидную ДНК рМВ 121 выделяют щелочным методом с последующей дополнительной очисткой в градиенте плотности СзС 1.5 мкг ДНК плазмиды рМВ 121 расщепляют 10 ед. эндонуклеазы рестрикции Рз 1 в 50 мкл раствора, содержащего буфер 1 и 50 мМ МаС 1, 1 ч прио37 С. Затем к реакционной смеси добавляют ИаС 1 до концентрации 150 мМ, 2-меркаптоэтанол до 20 мМ и 10 ед. эндонуклеазы рестрикции Яа 1 СТ, выдер-. живают 1 ч при 37 С. Реакционную смесь после добавления 6 мкл 0,4 М ЭДТА, рН 8,0 экстрагируют равным объемом...

Вектор рмв 124 для получения фрагментов днк с произвольными липкими концами и способ его конструирования

Загрузка...

Номер патента: 1446160

Опубликовано: 23.12.1988

Авторы: Серпинский, Синяков, Дегтярев, Данилюк, Чижиков

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, концами, произвольными, рмв, липкими, вектор, фрагментов

...добавляют ЙМТР., до концентрации 100 мкМ и НО до общего объема 100 мкл, прибавляют 1 ед, ДНК-полимераэы 1 (фрагмент Кленова) и выдерживают 30 мин при 20 С. Реакционную смесь разбавляют 5 мкл 0,4 М ЭДТА (рН 8;О) и экстрагируют водным фенолом и изоамиловым спиртом. ДНК осаждают двумя объемами этанола. 0,5 мкг полученной ДНК обрабатывают 2 ед. ДНК-лигазы фага Т 4 в 30 мкл буфера 2 в течение 16 ч прио10 С, Реакционную смесь используют для трансформации клеток Е.со 1 ВМН 7118. Суспензию клеток после трансфор - мации высевают на 1,5 Х агар, содержащий 45 мкг/мл ампициллина и 50 мкг/мл Х-Са 1. Из колоний, имеющих Ьас фенотип, выделяют плазмидную ДНК щелочным методом. Взр 1 и Взр 1 + Нпй 111 - гидролизаты полученной ДНК анализируют в 4 Х ПААГ....

Рекомбинантная плазмидная днк ptur1-6 для идентификации межиндивидуального полиморфизма днк человека и способ ее получения

Загрузка...

Номер патента: 1463760

Опубликовано: 07.03.1989

Авторы: Шапиро, Рогаев

МПК: C12N 15/00

Метки: человека, идентификации, плазмидная, ptur1-6, межиндивидуального, полиморфизма, рекомбинантная, днк

...ДНК-дезокситрифосфатов и рольной чашке и на идентичные места 5 е.а. ДНК-полимеразы 1. Реакционную на круглый нитроцеллюлозный фильтр смесь, имеющую конечный объем 100 мкг, диаметром 8,5 см, лежащий на поверх инкубируют 20 мин при комнатной темности агара с тетрациклином (Тс) во пературе и 2 ч при 1 О С. Удельная второй чашке. После подращивания ко- активность меченых препаратов составлоний при 37 ОС 15 ч контрольную чашку ляет 6,8 10имп/мин/мкг. На каждый хранят при 4 С в перевернутом поло- фильтр суммарно наносится 4:10имп/ жении, а бактерии на нитроцеллюлозиом 45 /мин меченого препарата ДНК, фильтре лиэируют. Для этого каждый Гибридизацию проводят при 42 С фильтр помещают на поверхность бума ч, Затем фильтры отмывают в двух ги 3 мм,...