C12N 15/00 — Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев

Номер патента: 1571062

Опубликовано: 15.06.1990

Авторы: Бочарова, Козлова, Сабурова, Ченак, Черныш

МПК: C12N 1/18, C12N 15/00

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, дрожжей, используемый, хлебопечении, штамм

...0,1Дрожжевой автолизат 0,1Агар-агар 16Вода ОстальноеКультивирование осуществляют прио28 С в течение 7 сут, Затем суспенэию дрожжей каждого клона переносят на скошенный сусло-агар для изучения различных признаков и свойств. Дрожжи, проявившие наиболее высокие показатели производственно-ценных свойств, помещают в жидкое солодовое сусло 8 Е СВ. Через 24 ч культивирования производят посев на скошенный сусло-агар и выросшие дрожжи хранят в холодильнике для дальнейшего использования. П р и м е р 2. Осуществляют по примеру 1, но рассев производят на среду следующего состава, г/л:Глюкоз а 202,0Аспарагин 5,0Дрожжевой автолизат 5,0Агар-аг ар 20Вода ОстальноеДля изучения свойств нового штамма его культивируют периодическим способом на стадиях и...

Номер патента: 1572419

Опубликовано: 15.06.1990

Авторы: Гюнтер, Кристиан, Норберт, Петер, Рудольф, Эва

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, кодирующей, омега-интерферон, плазмидной, рекомбинантной

...этих фрагментов. Сделан вывод, что в случае вставки клонов, Е 76 Е 9 и Р 9 А 2 речь идет о до сих пор неизвестных интерфероногенах, а именно о омега-интерферонах.Информацию об омега-интерферонах используют для того, чтобы переварить кДНК-ставку с рестрикционными эндонуклеазами. Образовавшиеся фрагменты лигируют в с 1 з ДНК-форму (репликативная форма) М 13 тпр 9 и секвенсируют с помощью дидеокси-метода Бащег. Однонитевую ДНК рекомбинантных фагов изолируют. Послесвязывания синтетического олигомера в четырех отдельных приготовлениях осуществляют двухнитевые синтезы при применении большого фрагмента ДНК-полимеразы 1 из Е.со 1 (фрагмент Кленова). В каждой из четырех частичных реакций добавляют один из четырех дидезоксинуклеозидтрифосфатов...

Номер патента: 1573026

Опубликовано: 23.06.1990

Авторы: Васюренко, Глатман, Кравец, Кузьмин, Солонин, Тарутина, Фролов

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, определяющая, плазмидная, рекомбинантная, рестрикции, синтез, эндонуклеазы

...штамма Е. со 11К 802, трансформанты подращивают 2 чв бульоне 1,В инфицируют фагом р 801 г9с множественностью заражения 10 ивысевают на агаризованную среду, содержащую 50 мкг/мл ампициллина, Изклонов, резистентных к ампициллину,выделяют плазмидную ДНК рВС МЗ известными способами,Проведен анализ наличия рестриктазы сГгВ 1 в клетках Е, со 1 ь.Для этого клетки Е. со 11 К 802//рВС МЗ выращивают в 10 мМ 1,В бульона до поздней логарифмической стадиироста, собирают центрифугированием,ресуспендируют в 5 мл буфера В, (10 мМтрис НС 1, рН 7,5, 50 мМ НаС 1, 10 мМЭДТА 10 мМ 2-меркгптоэтанола), раз-.рушают ультразвуком, центрифугируютпри 6000 об/мин 1 ч для освобожденияот клеточных обломков,Для определения активности готовятразведения экстракта в...

Номер патента: 1582990

Опубликовано: 30.07.1990

Авторы: Роберт, Стивн

МПК: C12N 15/00

Метки: двудольных, клеток, растений, трасформированных

...нА, цшехасхепз или клетку другого типа, которая способна перенести коинтегративную плазмиду в растительныеклетки,Плазмиду, такую как рМОЕ 128, объединяют с Тх плазмидой с получениемкоинтегративной плазмиды б, КультуруА. цшеГасхепз СЧ 3111, содержащуюкоинтегратинную плазмиду, полученнуюиз рМОМ 128 и Тд плазмиды дикого типа рТт 8653,депонируют в Американскойколлекции типовых культур и присваивают регистрационный номер 39266,Если коинтегративную Тх плазмидувключают и растительную клетку, то нрастительный геном может войти любойиз двух участков ДНК, Т-ДНК,участок14 или Т-ДЕК 16,Разрабатывают альтернативньй способ, н котором избегают необходимостиотделять опухоленые клетки от неопухолевых клеток. Выделяют некоторыемутантные штаммы А,...

Номер патента: 1585331

Опубликовано: 15.08.1990

Авторы: Катомина, Марченко, Фунтикова

МПК: C12N 11/14, C12N 15/00, C12P 7/64 ...

Метки: lusiтаniсus, mucor, гриба, кислоты, линоленовой, липидов, повышенным, продуцент, содержанием, штамм

...Чапека-Докса в зависимости от качества и количества посевного материала рост мицелиальный, "крупинчатый" или одним комкомФизиолого-биохимические признаки, Отношение к источникам углерода.хоро-шо растет на глюкозе, ксилоэе, рибозе, мальтоэе; хуже - на галактозе; плохо - на лактозе. Не растет на этаноле.Отношение к источникам азота: хорошо растет на мочевине и органических источниках азота; хуже - на аммонийном азоте; плохо - на нитратном азоте.Строгий аэроб. Растет при 15-37 С, оптимальный диапазон 20-28 С. Область рН роста 3-8; оптимальный диапазон 20 5-7.Культура синтезирует липиды, содержащие 29-323 у-линоленовой кислоты.П р и м е р 1, В качестве иноку лята используют суспензию спор штамма с титром 10 . Споровый...

Номер патента: 1400075

Опубликовано: 30.08.1990

Авторы: Вертиев, Гинцбург, Ильина, Ливанова, Смирнова, Янишевский

МПК: A61K 35/74, C12N 15/00

Метки: ogawa, viвriо, бактерий, используемый, сноlеrае, токсина, холерного, штамм

...и Огава (1:800).Патогенные свойства.Вирулентен для кроликов-сосунков в дозе10" м.кл./мл.Пример. Высушенную ампульную культуру штамма Ч. сЬо 1 егае сЬо)егае КМ 75 засевают на агар Хоттингера рН 7,6, содержащий 5 мкг/мл тетрациклина или 50 мкг/мл канамицина, и инкубируют 18 ч при 37 С,Лля количественного определения холерного экзотоксииа используют иммуноферментный метод огпЕ 1.15 А. В качестве конт. роля и для определения чувствительности метола используют очищенный препарат холерного токсина, Клетки штамма КМ 75 в объеме 10 мл выращивают 18 ч при 30 С в 0,1-литровых колбах в среде, содержащей 3% казаминовых кислот и 0,5% дрожжевого экстракта при рН 7,6. Клетки осаждают центрифугированием, в супернатанте определяют экзотоксин. Пробы...

Номер патента: 1413960

Опубликовано: 07.09.1990

Авторы: Борхсениус, Меркулова, Чернова

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, заражений, микроплазменных, обнаружения, плазмидная, рекомбинантная

...рКК 3535, несущей рибосомный оперон ггп В Е.со.Плазмиду рМя 16 получают врепаративных количествах и очищают в градиенте плотности 1 в 11.П р и м е р 2, ДНК клеточньм культур выделяли стандартными методами, для этого собирают клетки МХ и Не Ьа, и предполагаемых микоплаэм цеитрифугированием культуральной жидкости при 10000 об/мин 30 мин.Оказалось, что плазмида рМ 16 не гибридизуется с ДНК эукариот, не контаминированных микоплаэмами, что является необходимым условием ее применения.Оказалось также, чтс с помощью ДНК гибридизации с рМя ,6 можно уловитьнг ДНК микоплазмы, что соот 5ветстнует .1 О инфекционных частиц. Известно, что в 1 ил культуральной жидкости клеток, культивируемых 1 п ч 1 Сго при микоплаэменной инфекции,всодержится 10 -...

Номер патента: 1412306

Опубликовано: 15.09.1990

Авторы: Вертиев, Гинцбург, Ильина, Ливанова, Смирнова, Янишевский

МПК: C12N 15/00

Метки: 1446рс0107-2, ogawa, viвriо, бактерий, еlтоr, используемый, серовара, сноlеrае, холерного, штамм, экзотоксина

...свойства.Физиологические свойства типичныдля холерного вибриона.Отношение к углеводам: ферментирует до кислоты без газа маннозу, сахарозу, маннит, мальтозу, неферменти рует лактозу и арабиноэу, Эритроцитыбарана не лизирует, агглютинирует куриные эритроциты.Чувствителен к холерному диагностическому фагу эльтор, 3 и 5 фагам 45ХДФ.Холерными сыворотками 0 и Одамаагглютинируется до титра,Патогенные свойства.Вирулентен для кроликов-сосунковв дозе 10 мкл/мл.Использование штаммаиллюстрируется следуюшнм примером.П р и м е р, Высушенную культуруЧ. сЬо 1 егае из ампулы высевают наагар Хоттингера рН 7,6, содержащего5 мкг/мл тетрациклина или 50 мкг/мпканамицина, и посевы инкубируют 18 чпри С 37 С. Для проверки...

Номер патента: 1443404

Опубликовано: 23.09.1990

Авторы: Вейко, Карпухин, Салимов, Спитковский

МПК: C12N 15/00

Метки: биотинирования, кислот, нуклеиновых

...40 мл во 11 ы, Далее все операции с гэидами проводят в затемненной комнате, Лосле 30 минреакции прн комнатной температуре осадок отделяют, Перекристаллиэонываеот из воды. Выход очищенной 4-аэидо-нитробензойной кислоты состав 55 ляет 65 Ж. 20 ммоль 4-аэ 11 до-нитробензойной кислоты растворл 1 от в 25 мл диоксана, прибавляют по 20 ммоль Б-оксисукцинимида и дициклогексилкарбодиимида, Реакционную смесь выдер" . жнааЕот.20 ч при 20 С и сильном встря" хивании. Выпавший осадок отфильтро" вывают и промывают диоксаном. фильтрат уаривают при пониженном давлеииие Полученный Б ОксиДукцинимидный эфир 4-аэидо"нитробензойной кислоты используют в дальнейшем беэ предварительной очистки.К 2 ммоль 1,7-диаминогептана в 3 мл диокеана добавляют по каплям...

Номер патента: 1469858

Опубликовано: 23.09.1990

Авторы: Зыбин, Костюнин, Пахомов, Угнивенко, Хованова

МПК: C12N 15/00

Метки: гамма, индуцированного, мутагенеза, облучением, снижения, соматического, спонтанного, частоты

...назначению.Для анализа антимутагенного и проекторного (по отношению к спонтанному мутагенезу и индуцированному Облучением) действия гипербарического кислорода использованы тест-системы, Основанные на регистрации частоты соматического мозаицизма у дроэофилы. Антимутагенный эффект гипербарической Оксигенации исследовали на мухах 1 ида ОгозорМ 1 а зхщо 1 апв, протекторный - иа мухами вида ЭговорЬ 1 а ще 1 айодавек, Дпя обработки мух гиперба 11 ическим кислородом испольэовали режим, предложенные .ранее для лечения больных с местными лучевыми поражениями в остром периоде. Культуры с ю 1 нчинками дрозофилы, гетероэиготными50 по рецессивным Х -хромосомным генам, 11 омещали в одноместную лечебную 1 ипербарическую систему "ОКА-МТ" при давлении...

Номер патента: 1476896

Опубликовано: 23.09.1990

Авторы: Добрица, Шевченко

МПК: C12N 15/00

Метки: bacillus, polya15, spp, векторная, генов, днк, еsснеriснiа, клетках, клонирования, конструирования, плазмидная, предназначенная, чужеродных

...0 С. На следую- тов, Зля трансформации берут в рабощнй день О, мл Са ф -клеток смешиваютту 0,5 мл суспензин полученных прото"с 0,05 мп ДНК (10 мкг/мп), инкубируют пластов, смешивают с ДНК, растворен-.1 ч при температуре ОС и 5 мин ной в ЯММР буфере,н добавляют 1,5 мппри температуре 42 С и затем перено- полиэтиленгликоля (ПЭГ). После разсят в пробирку с 1,5 мп среды ЬВ. 1 О бавления в 5 мп БММР буфера клеткиПосле 2 ч инкубации в этой среде при центрифугируют и ресуспендируют в37 С со встряхиванием клетки высева мл ЯММР буфера. Через 1,5 ч суспенют на чашки с индикаторными (Ьас) зию высевают на чашки Петри со средойсредами, содержащими тетрациклин ДМЗ. Чашки инкубируют при температурео(15 мкг/мл). В качестве индикаторных 5 37 С в течение 2...

Номер патента: 1453896

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Бурьянов, Витенене, Косых

МПК: C12N 15/00

Метки: corii, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, метилазу, метилазы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рестриктазу, рестриктазы, рук11, штамм

...штаммаЕ, соН В 834(рС 857),обусловлен тем,что штамм не содержит интерферируюих с ферментами Есо КП примесей исодержит плаэмиду с геном термочувст Овительного репрессора с 1 фага ляйбда,Содержаний рестриктаэы и метилазцЕсо К 11 в сконструированном штаммеравно 500000 ед, каждого фермента наг сырой биомассы клеток,Штами ЕвсИехсЫа со 1. ВКИ СК 2889 характеризуется следующими признаками;Иорфологические признаки.6 6ную как р 7 К 11 и содержащую в своем . составе трк фрагмента, которые обра,зуются при гидролизе плазмидной ДНК эндокуклеаэой рестрикции Рве 1Выделенную .ДНК р 7 К 11 трансформируют в штамм Е. со 11 В 834/рС 1857 Трансформаиты отбирают на среде, содержащей ампицкплин (50 мкг/мл) и канамкцин (25 мкг/мл). Плаэмида РС 1857 несет...

Номер патента: 1469856

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Ажикина, Анджапаридзе, Антонова, Арсенян, Балаян, Блинов, Вальяно, Василенко, Дроздов, Коврига, Кравченко, Кусов, Маркова, Насташенко, Овчинников, Петров, Приходько, Ростапшов, Рохлина, Свердлов, Серпинский, Снешков, Урманов, Фролов, Царев, Чернос, Чижиков

МПК: A61K 39/29, C12N 15/00

Метки: гепатита, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, полипептидных, против, рекомбинантной, синтез, субстанций

...эндонуклеазой рестрикции Вя 11 и затем Рз 1, как описанов примере 1, Полученный больший фрагмент лигируют с Вя 11 - (ЛРцц 11)Рзг.фрагментом длиной 1243 п.о., вьделенным из плазмиды рНА 123. Лигазной смесью трансформируют компетентные клетки штамма Е,.со 1 НВ 101 и в клонах, содержащих плазмиду со встроенным фрагментом, определяют ориентацию последнего с помощью эндонуклеаз рестрикции ЕсоВ. и Ваш 1,Клоны, содержащие плазмиды с нужной ориентацией фрагмента, наращиваютв среде Мс, тетрациклином и р -индЬ- дилакриловой кислотой, синтезируемый гибридный белок, содержащий полный 7 ф-интерферон человека и фрагменты белков ОРЗ (со 11 О по 23,а.к.) и УР5 (спо 271 а.к.) ВГА, выделяют из бактериальных клеток и используют дпя иммунизации морских...

Номер патента: 1597391

Опубликовано: 07.10.1990

Авторы: Бондарев, Грачев, Дробченко, Исаева-Иванова, Энейская

МПК: C12N 15/00

Метки: лейциновой, т-рнк

...ДЕАЕ-целлюлозой, размером 12 1 см, Элюирование35сначала проводят низкой ионной. силой;50 МКоАс буфером, рН 4,5 и 0,2 МИаС 1 (буфер Р 1). При этом выходитальдоенолдекстран и декстранлейциновая тРНК.40После достижения нулевой плотности (Анм) проводят смену элюирующего буфера: 50 М КоАс, рН 4,5 и1,5 М ИаС 1 (буфер Р 2), Высокой ионной силой вымывается вся непрореагировавшая тРНК. Контроль за вымываниемс колонки продуктов проводят по измерению плотности на А о и радиоактивности по С,По плотности вымывают 12 ед, тРНК5 О(3 ед, плотности - вклад поглощенияальдоенолдекстрана), т.е. 100% индивидуальной лейциновой тРНК, по актив,ности - 85% (следует учесть, что наличие соли при выделении гасит счет),55фракцию (с 10 по 18 мл), содержащую...

Номер патента: 1597392

Опубликовано: 07.10.1990

Автор: Друца

МПК: C12N 15/00

Метки: вставок, днк, мутагенности, неприродных, оценки

...узла, а по соотношению мутантных и немутантных клонов легко определить вероятность генерации мутаций.П р и и е р 1 (контрольньй). Конструирование гетеродуплексной ДНК.1 икг однотяжевой ДНК Фага М 13 шр 8 ор55 и 0,5 мкг большого ЕсоК 1/Н.пд 111 Фрагмента ДНК - Фага М 13 шр 8 орг нагревают в 90 мкл ТЕ-буфера 3 мин прн 100 С, быстро охлаждают, добавляюто10 мкл 10-ББС-буфера и отжигают 24 чпри 65 С. Осаждают ДНК 3 объемамиэтанола, растворяют в 30 мкл воды,добавляют 10 мкл 5"-лигазного буфера(0,1 мМ АТР) и 10 мкл водного раствора немодифицированного олигонуклеотида) рАССТТСССТССАССТССАСССАТССССССС(0,001 О Е гса). Смесь нагревают10 мин при 60 фС и медленно (3 ч) охлаждают до комнатной температуры.Добавляют 1 мкл раствора Фермента Т...

Номер патента: 1599434

Опубликовано: 15.10.1990

Авторы: Максимова, Прокулевич, Титок, Фомичев

МПК: C12N 15/00

Метки: pmtf59, бактерий, днк, еnтеrовастеriасеае, мутагенеза, плазмидная, предназначенная, семейства, транспозонного

...а среди них счастотой 1,17, отбирают ауксотройные50мутанты,П р и м е р 2. Для полученияауксотроАных мутантов используютштамм Егюп 1 а ЬегЬ 1 со 1 а 103 К/рМТР 59.Способ получения ауксотроных мутантов такой же, как и в примере 1, различия состоят в том, что частотаВтранспозиции транспозона Тп 5 вхромосому этого штамма 9,9 10 а ауксотрофные мутанты отбирают счастотой 5,57,П р и м е р 3. Для полученияауксотройных мутантов используютштамм Аитопатогенных бактерий Егт- па сЬгуяапгЬе 1 п 1 ЕИА 49/рМТР 59, Способ получения ауксотройных мутантовтакой же, как и в примере 1, разли"чия состоят в том, что частота транспозиции транспозона Тп 5 в хромосому этого штамма 1,2 10 -, а ауксотроАные мутанты отбирают с частотой2,07,П р и м е р 4. Для...

Номер патента: 1601119

Опубликовано: 23.10.1990

Авторы: Каленик, Мотавкина

МПК: C12N 15/00

Метки: идентификации, флекснера, хемотаксономической, шигелл, эшерихий

...ИК-спектры образцов липидов определяют в диапазоне 400-4000 смв виде жидкихпленок на подложке из калийбромида.Для идентификации классов фосфолипидов применяют универсальныефосфорномолибденовый реактив, специфические реактивы на функциональные группы. В качестве стандартовиспользуют коммерческие фосфолипиды. Фосфор в целых липидах и во фракциях определяют согласно руководству М,Кейтса. Для получения моноеновых жирных кислот фосфатидилэтаноламины подвергают кислому метанолизу.Полученные экстракты очищают тонкослойной хроматографией .на силикагеле марки КСК в системе: петролейный -диэтиловый эфир, (Ч/Ч) 19:1. Качественно-количественную характеристику жирных кислот получают при использовании газожидкостной хроматографией при...

Номер патента: 1253141

Опубликовано: 30.10.1990

Автор: Тец

МПК: C12N 15/00

Метки: s-формы, патогенных, рекомбинантного, штамма, эшерихий

...надоса. дочкув жидкость, которая представляф После четвертого, осаждения из бактерий была приготовлена взвесь, содержащая 1,0 1 О клеток в 1 мл. К1,0 мл такой взвеси добавили 1,0 10 1 О 15 20 25 дуру отмынки повторяют 3-5 раэ. Изобработанных таким образом бактерийготовят нэнесь, содержащую 1,092,0 1 О живых клеток н 1 мл. К 1,0 млтакой взвеси добавляют трансдуцирующттй бактеркофаг в концентрации 1,02,0 10 (0,1 мл), после чего смесь инкубируют прк 36,6-37,2 С в водяной бане в течение 40-45 мин а затем при 18-22 С - 120-30 мин, Смесь центрифугируют при 2500-3000 об/мин 20-30 мин при 18-22 С для осаждения бактерий, Надосадочную жидкость, содержащую неадсорбиронанные фаговые частицы, сливают. Осадок ресуспендируют н 0,3-0,4 мл раствора...

Номер патента: 1604845

Опубликовано: 07.11.1990

Авторы: Гурмаза, Ильина, Коваль, Косиков, Куренная, Лисицина, Мосендз, Рудниченко, Середа, Ткаченко

МПК: C12N 1/18, C12N 15/00

Метки: cerevisiae, sасснаrомuсеs, гибридный, дрожжей, используемый, хлебопекарных, штамм

...роста при 30-35 С. Мелатину це разжижа- о ет, крахмал не сбраживает. Сбраживает глюкозу, фруктозу, сахар озу, маль.тозу, галактозу, раФфинозу ца 1/3,не сбраживает ксилозу, арабинозу,лактозу. Усваивает уксусную и молочную кислоты, не усваивает янтарной,яблочной, винной и лимонной кислот.Без источников азота в среде не размножается, усваивает неорганическийазот. Чувствителен к нистатину и циклогексимиду, практически не чувствителен к бактериальным антибиотикам.Непатогенен. Усваивает глицерин,этанол: не усваивает маннит, дульцит,сорбит,П р и м е р 1. В лабораторных условиях выращивание дроккевых клетокизвестных штаммов ЛКи Уипредлагаемого штамма ВКПМ У для получения посевного ицокулюмапроводят газоном на агаризованномнеохмелецном...

Номер патента: 1611926

Опубликовано: 07.12.1990

Авторы: Афанасьева, Неверова, Павловская

МПК: C12N 1/18, C12N 15/00

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, дрожжей, заквасочных, используемый, препарата, сухого, хлебопекарных, штамм

...качества сухих заквасочных дрожжей приведены в таблице,По хлебопекарным свойствам сухойпрепарат дрожжей существенно не отличается от известного и обеспечива5ет подъемную силу жидких ржаных заквасок до 25-30 мин. Штамм хранитсяво Всесоюзной коллекции промышленныхмикроорганизмов "ВНИИгенетика" подномером ВКПБ Уи в коллекцииЛФВНИИ ХП под номером Л-СЗ.П р и м е р , Для получения биомассы Яассйагонусез сегенв ае ВКМПУвыращивают на двух анаэробныхстадиях на солодовом сусле плотностью 14,3% СВ, аэробной бесприточнойи приточной стадиях на концентрированной мелассной среде (кратностьразбавления 8-9) с добавлением 1, 6%азота и 0,9% фосфора (к массе мелассы) и повышением температуры от 30до 35 С. Выращенные дрожжи отпрессовывают,...

Номер патента: 1412305

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Айташева, Айтхожин, Дощанов

МПК: C12N 15/00

Метки: информосом, отделения, полирибосомных, свободных

...А ЬаЬогаСогу Мапцв 3ВегЫп НеЫе 1 Ьегя .Беч ЮогХ, 1979,р. 1-19, либо к этому количеству про- З 5теин А-сефарозы добавляют 4 мл иммунной сыворотки. В обоих случаях инку-бацию антител с носителем проводятв течение 30-60 мин в колонке из полипропипена (наконечник С 6000, 6 фк 1,25 см, Пипетман фирмы "Жилсон")с фильтром из распущенного мираклозана дне. Дпя удаления несвязавшихсябелков колонку промывают вьппе приведенным буфером (фосфатным) до техпор, пока поглощение элюата при280 нм не снизится до постоянногоуровня. Затем колонку промывают буфером, содержащим 20 мМ ТЭА, рН 7,6,25 иИ КС 1 5 мМ МКС 1 1 мИ МЭТе" 5 ОПроцедура иммуноаффинной хроматографии.Из раэбанленной в 10 раэ реакционной смеси общим объемом .300 икл (ме-ченый препарат...

Номер патента: 1494724

Опубликовано: 07.01.1991

Авторы: Александров, Ворсанова, Миткевич, Юров

МПК: C12N 15/00, G01N 33/60

Метки: количества, х-хромосом, человека

...5 мкл нерадиоактив 1494724цых дезоксицуклеозидтрифосфдтон (по 0,02 М каждого), 5 мкл ДКдзы 1 (концентрация 1 мкг/мл), 5 мкл ДИК- полимераэы 1 (коццентраццл 0,5- 2 ед/мкл), 10 мкл меченного тритием (для гибридизации ш я).ц) или Фосфором (гибридизация колоний) одного из дезоксинуклеозидтрифосфдта и но- ды до конечного дбъема 150 мкл, Реакцию ведут н течение 20-40 мин при 20 С, Средняя удельная радиоактивность составляет около 2,5 л 10импульсов в 1 мнц н расчете ца 1 мкм ДПК н случае трития и около 2,510 " им пульсов в 1 мин н случае фосфора (э Р) .Перед гибридизацией фильтр с колоо ниями бактерий вымачцндют при 67 С н растворе 6 юББС; 0,5 Х Б 1)Б; 0,1 Х 20 фиколлц 0,1 Х цолифенцлпцрролидоц н течение 60-90 миц, Вслед зд этим фильтр...

Номер патента: 1508574

Опубликовано: 07.01.1991

Авторы: Котик, Труфанова

МПК: C12N 15/00, C12Q 1/02

Метки: candida, дрожжей, используемый, качестве, микотоксинов, обнаружении, рsеudотrорiсаlis, тест-микроорганизма, трихотеценовых, штамм

...-,: 1,0 мм. Пивное неохмеленное сусло,06- раэуется плотный осадок, который прн вэбалтывании слегка взмучивается и быстро оседает.Физиологические признаки. Размножение почкованием. Усваивает глюкозу, лактозу, сахарозу, галактоэу,мальтозу.Чувствительность к трихотеценовым микотоксинам. Штамм СапйИа рзецйоСгорса 1 в Нсравнивают по чувст вительности к трихотеценовым микотоксинам со штаммом ЯассЬагошусев ГгаЕШз Ди СапйЫа рзецйоСгор 1 саНз 44 пк (прототип).Штаммы выращивают на сусло-агаре при 28 С в течение 1-2 сут и хранят в холодильнике при 4-6 С. Растворы испытуемых, микотоксинов (НТ 2 токсина, Ттоксина, рорйдина А, веррукарина. А) наформула н з о б р е т е н и я Штамм дрожжей СапдИа рвецйоФгортсаНз ВНИИА 0314 А, используемый в качестве...

Номер патента: 1552643

Опубликовано: 15.01.1991

Авторы: Данилюк, Серпинский, Синяков

МПК: C12N 15/00

Метки: вектор, днк, конструирования, концами, липкими, произвольными, фрагментов

...и минимальной длиной встроенного фрагмента.а) для определения рекомбинантов вектора рГН 124 с максимальной длиной встроенного фрагмента в этом векторе клонируют по Рз 1 1 и Ба 1 1-сайтам фрагмент ДНК полноразмерной копии гена интерлейкина - 2 человека, длиной 413 п.о.Дпя этого 0,25 пкмоль векторной ДНК, полученной иэ рРН 124, совместным расщеплением эндонуклеазами рестрикции РзС 1 (7 ед. 50 мМ МаС 1,ч, 37 С) и Ба 1 С 1 (О ед. 150,мМ ЮаС 1 1 ч, 37 С) и 3 пкмоль указанного фраг-. мента ДНК обрабатывают 20 ед. Т ДНК- лигазы в условиях, описанных выше. Полученной лигаэной смесью трансформируют клетки Е. со 1 1 М 103, Колонию+с Ьас фенотипом проводят через 4. пассажа, как описано в примере 2. После каждого пассажа выделенную иэ биомассы...

Номер патента: 1552645

Опубликовано: 15.01.1991

Авторы: Горн, Зарытова, Коваленко, Мартвецов

МПК: C12N 15/00

Метки: ангиогенин, белка, галактозидазы, днк, кодирующая, конструирования, мз», пептид, рекомбинантная, синтез, слитого, фаговая

...для трансфекции.Компетентные клетки для трансфекции готовят следующим образом, Клетки Е,со 11 Л(103 иэ 50 мп среды 2 х УТ (16 г триптона, 10 г дроскеного экстракта, 5 г МаС 1 на 1 л воды) при тит-Мре 5;10 кл/мл осаждают центрифугированием, ресуспендируют в 25 мл сте-, рильного 50 пИ СаС 1 при 0 С, вновь Осаждают 10 мии 5000 я при +40 С, ре" суепендируют н 3,6 мп 50 11 СаС 1 при ОС, инкубрунт 30 мин при 0 С. К 200 мкл клеток добавляют 20 нг геТЕРОДУПЛЕКСНОй ДИ:(, инкубируют ЗО мин при 0 С, затем прогренают 2 мнп при 42 С, добавляют 200 мкл экспоненциальной Л 1103, 40 мкл 2% 7-яа 1 и 10 мкл 0,1 И 1 РТС и с 3 мл верхнего агара высенают на чашку с нижним ага" ром. Чеоез 12 ч образонынаются синие и белые колонии, Среди 603 белых колоний было...

Номер патента: 1622395

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Маркелов, Павлова, Прасолов, Фролова, Чумаков

МПК: C12N 15/00

Метки: pps-4-neo, введения, вектор, генов, клетках, культивируемых, млекопитающих, соматических, экспрессии

...расщопляют ЕсоК 1 и Ньпд 111, меньший Фрагмент, содержащий промотор БЧ 40, ген устойчивости к ампициллину и огдрВК 322 выделяют электроФорезом в легкоплавкой агарозе (1 ЛРА) нлигируют с большим Фрагментом плазмиды ИИТ ЧВНРР, расщепленной ЕсоК 1 и НпдП 1, обработанной фосфатазой и очищенной электрофорезом в 1,ИРА. Е результатеполучают плазмиду р 1, содержащую ген РНРК под контролем раннего промотора БЧ 40Получение плазмиды р 2. Нлазмиду р 1 расщепляют Рщ 11, дефосфорилируют с помощью фосфатазы из тимуса теленка (С 1 Р), очищают электроФорезом в 1.ИРА и лигируют синтетическим 8-членным ЕсоК 1 линкером. В результате получают плазмиду рЗ, содержащую слева от промотора БЧ 40 сайт ЕсоК 1.Получение плазмиды рЗ. Плазмиду р 2 расщепляют Нпд...

Номер патента: 1622398

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Бука, Бундулис, Грен, Звиргзда, Циманис

МПК: C12N 15/00, C12P 21/00

Метки: бактериальных, выделения, интерлейкина-2, клеток, рекомбинантного

...на Фреичпрессе при давлении 700 атм. Полученную суспенэию центрифугируют 30 минпри 12000 об./мин на центрифуге. Осадок ресуспенднруют и по 3-4 раза промывают сначала буфером А с последующим цеитрифугированием в описанномрежиме, затем буфером А, содержащим2 М мочевину, и буфером А, содержащим4 М мочевину, Осадок суспендируют в40 мл буфера А, содержащего 27 додецилсульфата натрия, при перемещивании растворяют, прогревают 2 мин прио60 С, охлаждают до комнатной температуры и тестируют иммунохнмическимили биологическим методом.Раствор рИЛнаносят на колонку2 ч К 100/100 с себадексом 0-100,уравновешенную 50 ммоль трис-НС 1(рН 8,5) с добавками 5 ммоль ДТТ,1 ммоль бенилметилсульфонилбторидаи 17. додецилсульфат натрия. Фракции,содержащие...

Номер патента: 1646489

Опубликовано: 30.04.1991

Автор: Гвен

МПК: C12N 15/00

Метки: бычьего, гормона, роста

...-Т и рМОИ 3214. ДНК рМОЮ 3209,рМОИ 3215, рВСРех-Т и рИОН 3214 анализируют на наличие Фрагмента ХваТв 590 пар оснований и фрагментаИыд ТТ 1/Бша 1 в 200 пар оснований,подтверждающих наличие кодирующихбГР (А,Л), бГР (В) и бГР (А,В) последовательностей ДНК в правильнойориентации, Далее плазмиды экспрессиирМОИ 3209 и рИОН 3215 анализируют при помощи анализа эндонуклеазами рестрикции (Пае ТТТ) с тем, чтобы убедиться в присутствии нового сайта Нае ТТТ, образовавшегося при присоединении кодонаГСС (аланина). Фрагмент ХваТ в 590 пар оснований из векторов рМОИ 3209, рМОИ 3214 и рМОМ 3215 анализируют на состав последовательности с тем, чтобы подтвердить присутствие в этих векторах экспрессии кодирующих для бГР (А,Л), бГР (В) и бГР (А,В)...

Номер патента: 1554382

Опубликовано: 07.05.1991

Авторы: Данилюк, Серпинский, Синяков, Урманова

МПК: C12N 15/00

Метки: гена, интерлейкина-2, конструирования, человека

...5-8 0 клеток;,тиосфере 5 Х СО 0,25 мкКи зН-тииидина вводят в реакционную смесь н тер.мостатируют еще 4 ч в тех ае услови"ях. Клетки собираются на фильтре"М 1111 роге" (0,45 икм), промывают0,01 М КБРО (рН 7,5) с О, М йаС 1Количество включенного ЗН-тимидинаизмеряют по Черенкову, используютсчетчик МагЫ 1 П.Лизаты клеток Е.со 11 ЮИ 83, содераащие рРХ 1 Ь, достоверно вызывают пролиферацию мышиных лимфоцнтов, т,е, обладают активностью 1 Ь, Полученныеданные свидетельствуют о биологической полноценности синтезированногогена человеческого 1 Ь,Предлоаеннцй способ получения гена1 Ьимеет существенные преимущества, Вследствие применения на.стадииполучения субфрагиектов длинных частичнб коиплеиентарнцх полинуклеотидови использования...

Номер патента: 1137762

Опубликовано: 07.08.1991

Авторы: Денисова, Киянов, Петрищев, Псурцева, Фалина

МПК: C12N 15/00, C12N 9/50

Метки: coprinus, dомеsтiсus, fr)gray, базидиального, вкм, гриба, продуцент, тромболитических, ферментов, фибринолитических, штамм

...солодоворостковым и кукурузным экстрактами.Соргхпця Йошевгсцв - культурадереворазрушающего гриба, относитсяк возбудителям бурой гнили древесины,дает отрицательный тест на реакциюБавендамма на среде с таннином,Штамм-продуцент выращивают глубинно в колбах на 0,5 л, содержащих100 мл питательной среды, при 25 лСна качалке при 130-160 об/мин. Посевной материал вносят в виде суспензии(иэмельченная пленка мицелия) в количестве 107. от объема среды. Для посевного материала и для культивирования гриба, используют питательную среду следующего состава, г/л: глюкоза, 11310, пелтон 2,5; КНРО 0,6; КНРО0,4; МдБО 4 НдО 0,05; ИаС 1 О,5; СаС 120,05; РеБО 4 0,005; ЕпБ 04 0,001;МпБ 04 0,003; солодово-ростковый экстракт 0,17 (по сух. весу), вода...