Патенты с меткой «днк-полимеразы»

Номер патента: 1108105

Опубликовано: 15.08.1984

Авторы: Бабаева, Боровик, Ремнев, Самохвалов, Урываев, Юферов

МПК: C12N 9/14

Метки: выделения, днк-полимеразы, рнк-зависимой

...Р-П и аффинной хроматографией на гепарин-сефарозе 4 В, перед которым осуществляют обработку диа. лизного мешка раствором бычьего сывороточного альбумина в концентрации 1-2 мг/мл в течение 10 мин,приводит к тому, что молекулы бычьего сывороточного альбумина связываются с поверхностью диализной мембраны и создают биологически аинертную поверхность, которая при взаимодействии с ферментом не влечет эа собой его инактивацию.Результаты 10 экспериментов по выделению ревертазы предлагаемым способом показали, что для получения препарата фермента, пригодного в работах по генной инженерии, достаточно двух стадий очистки: фосфоцеллюлоэа Р-П и гепарин-сефароэа 4 В, Полученный препарат обладает достаточной концентрацией, пригодной для проведения...

Номер патента: 1232261

Опубликовано: 23.05.1986

Авторы: Белякова, Крутяков

МПК: A61K 38/43

Метки: днк-полимеразы, крыс, печени, ядер

...в течение 30 мин экстрагируют в соотношении 1:5 по объему в среде состава: 0,3 М НС 1, 10 М трис-НС 1, рН 8,0 в гомогенизаторе Даунса, Затем центрифугируют при 6000 п 10 мин. Осадок отбрасывают. Супернатант используют для дальнейшей очистки целевого продукта из хроматина.Колонку объемом 50 мл с отношением диаметра к высоте 1:4 уравновешивают средой состава: 0,4 М МаС 1, 10 щМ трис-НС 1, рН 8,0, Экстрат хромаэтом отбрасывают элюирующий буфер,составляющий "свободный объем" колонки и равный 1/3 объема набивки, После этого собирают объем злюата, равный объему нанесенного препарата. Кпрепарату, полученному после хроматографии на сефадексе ДЕАЕ А, добавляют прн смешивании за 30 мин сульФат аммония до 50%-ного насыщения,Перемешивают...

Номер патента: 1392094

Опубликовано: 30.04.1988

Авторы: Дегтярев, Кравченко, Кузнеделов, Нетесова, Петренко, Ривкин

МПК: C12N 15/00

Метки: coli, днк, днк-полимеразы, кленова, кодирующая, конструирования, плазмидная, рекомбинантная, рсек, синтез, фрагмента

...фрагменты ДНК электрофорезом в 47.-ном полиакриламидном геле. Гель окрашивают в растворе бромистого этидия 2 мкг/мл, вырезают из геля зону, содержащую векторную часть ДНК плазмиды рСЕЕ 12, и выделяют ДНК из геля методом электроэлюции. 10 мкг плазмидной ДНК рС 155 гидролизуют 20 ед. рестрикционной эндонуклеазы ВашН 1 в 100 мкл буфера для гидролиза, содержащего 20 мМ трис-НС 1 рН 7,8, 10 мМ МяС 1, 50 мМ МаС 1, 2 мМ 2-меркаптоэтанола, при 37 С 1 ч. В полученную реакционную смесь добавляют 25 ЙАТР, ВСТР, ЙСТР и ТТР, до 0,05 мМ каждого, 10 ед. ДНК-полимеразы 1 и инкубируют 30 мин при 12 С. Реакцию останавливают добавлением Иа ЭДТА до концентрации 20 мМ, белок удаляют экстракцией водным фенолом, рН 8,0 и ДНК трижды переосаждают...

Номер патента: 1541256

Опубликовано: 07.02.1990

Авторы: Баронайте, Вайткявичене, Марцишаускас, Пасечник, Песлякас, Суджювене, Федорова

МПК: C12N 15/00, C12N 9/00

Метки: большого, днк-полимеразы, еsснеriснiа, кленова, фрагмента

...ферментного экстракта полимином Р и сульфатом аммония. К центрифугату (215 мл), полу5 15412 ченному на предыдущей стадии, при постоянном перемешивании в течение 30 мин добавляют 107.-ный (13,7 мл) раствор полимина Р до конечной концентрации 0,67, После добавления 5 всего объема полимина перемешивание продолжают еще 30 мин. Экстракт центрифугируют в течение 15 минпри 4000 Полученный осадок используют для получения фрагмента Кленова. Фермент экстрагируют из осадка 100 мл 0,1 М калий-фосфатным буфером рН 7,0, содержащим 0,001 М /ь-меркаптоэтанол, 0,002 М ЭДТА, 0,1 М ЯаС 1. Процедуру повторяют еще раз. Супернатанты объединяют, Экстракт центрифугируют в течение 15 мин при 4000 я. К супернатанту (230 мп), медленно перемеши вая,...

Номер патента: 1622393

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Баронайте, Вайткявичене, Гаврюченкова, Громова, Марцишаускас, Песлякас, Суджювене

МПК: C12N 9/14

Метки: днк-полимеразы, еsснеriснiа

...баню и перемеаиваютстеклянной палочкой до получениягомогенной суспенэии, Суспеиэии кле"ток обрабатывают экструзиоииьи деэинтеграторои. Обломки клеток осаждают центрифугироваиием при 10000 В 2393 Ьв течение 1 ч. Выпавщий осдлок отбрасывают, центрифугят (560 мл) используют для выделения Фермента.б) фракционнрование ферментногоэкстракта полимином 11 и сульфатомаммония. К центрифугату (1560 ил),полученному нд предьдущей стадии,при постояннои перемещивянии в течение 30 мин добавляют 203-ный растворполимина 11 (48 ил) ло конечной концентрации 0,6 г После добавления всего объема полимина 11 переиещиваниепродолжают еще 30 мин, Экстракт цент Рифугируют в течение 10 иин при5000 е. Супернатант сливают, я полученный осадок суспенлируют в 780...

Номер патента: 1701112

Опубликовано: 23.12.1991

Автор: Каледин

МПК: C12N 9/12

Метки: jнеrмus, ruвеr, бактерий, биомассы, вкм, выделения, днк-полимеразы, микроорганизма

...7,5 и осаждают белок (ИН 4)рЯО( в интервале 35-75% насыщения за 30 мин при т = 4 С, центрифугируют 20 мин 15000 об/мин с 20000 9, Осадок1701112 Составитель В. ВарламовТехред М.Моргентал Корректор М, Максимишинец Редактор О. Головач Заказ 4480 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 растворяют в буфере А, содержащем 10 мМК-фосфата рН,5, 0,5 мМ ЭДТА, 5 мМ 2-меркаптоэтанола, диализуют против этого жебуфера (12 ч) и наносят на колонку с КМ(карбоксиметил)-Тоеперлом, 5Элюируют буфером А. Белок, не связавшийся с сорбентом, собирают при помощиспектрофотометра при длине волны 280...

Номер патента: 1147030

Опубликовано: 07.05.1992

Авторы: Крутяков, Махно, Шевелев

МПК: C12N 9/00

Метки: бактериофага, днк-полимеразы, еsснеriснiа, клетках

...за 30 мин при перемешивании а магнитной мешалке 100 мл 123 растора стрептомицинсульфата, который готовят непосредственно перед употеблением. Через 45 мин отделяют осаок центрифугированием. В супернатане остается около 952 ДНК-полимеразы актериофага Т 4.Благодаря такому осаждению ДНК трептомицинсульфатом отпала необхо 511470Вследствие вышеуказанных причинотпадает необходимость в проведенииавтолиза (упрощается процесс), а так"же значительно увеличивается выходцелевого продукта с более высокой5удельной активностью.Кроме того, предложение изменитьпоследовательность хроматографической очистки; сйачала очищать от нукФлеиновых кислот, затем от белкаобеспечивает повышение выхода целевого продукта. Это объясняется.тем,что удается...

Номер патента: 1360195

Опубликовано: 30.01.1994

Авторы: Дегтярев, Нетесов, Нетесова

МПК: C12N 9/10, C12N 9/14

Метки: вируса, выделения, днк-полимеразы, миелобластоза, птиц, рнк-зависимой

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ РНК-ЗАВИСИМОЙ ДНК-ПОЛИМЕРАЗЫ ИЗ ВИРУСА МИЕЛОБЛАСТОЗА ПТИЦ, предусматривающий добавление к вирусной суспензии лизирующей смеси и ингибиторов протеаз, инкубирование ее, отделение нерастворимого осадка от жидкой фазы с последующим хроматографическим выделением из нее целевого продукта на ДЕАЕ- и КМ-целлюлозе в присутствии ингибиторов, отличающийся тем, что, с целью повышения активности выделяемого фермента и его стабильности при последующем хранении, в качестве ингибитора протеаз используют диизопропилфторфосфат в концентрации 10-4 -10-5 на всех стадиях хроматографического выделения.