Патенты с меткой «интерлейкина-2»

Номер патента: 1446154

Опубликовано: 23.12.1988

Авторы: Войтенок, Осипович, Панютич, Циманис

МПК: C12N 5/00

Метки: антител, белку, гибридных, еsснеriснiа, животных, интерлейкина-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, мембранному, моноклональных, препарате, рекомбинантного, человека, штамм

...частично очищенным РИЛ(иммуноферментный анализ).Продукция МКА сохраняется как ми) нимум до 10 пассажей п ч 11 о, В асцитной форме штамм не пассируется более одного раза.Контаминация, Бактерии и грибы в культуре .:не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на пита" тельные среды. Заражение микоплазмой не выявлено по характеру включения тимидиновой меткиКриоконсервирование, Для длительного хранения клетки штамма замораживают в эмбриональной телячьей сыво" ротке с добавлением 10 диметилсульфо оксида. Режим замораживания: 1 С в 1 мин до -70 С. После замораживания клетки переносят в жидкий азот, Раэморажйвание - на водяной бале при +3 С. Жизнеспособность клеток послеоразмораживания 70-80 , по окрашиванию трипановым синим,П р...

Номер патента: 1446157

Опубликовано: 23.12.1988

Авторы: Бундулис, Войтенок, Панютич, Скривелис, Циманис

МПК: C12N 5/00

Метки: антител, белку, гибридных, еsснеriснiа, животных, интерлейкина-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, мембранному, моноклональных, препарате, рекомбинантного, человека, штамм

...в препарате РИЛчеловека, Методы оценки сохранения специфичности: тест на связыва" ние МКА с иммобилизованным частично очищенным РИЛ(иммуноферментный анализ), Продукция МКА сохраняется как минимум до 10 пассажей 1 п чдС- то. В асцитной форме штамм не пассируется более одного раза,Контаминация. Бактерии и грибы в культуре не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питательные среды. Заражение микоплаэмой не выявлено по характеру включения тимидиновой метки.. Криоконсервирование. Для длительного хранения клетки штамма замораживают в эмбриональной телячьей сыворотке с добавлением 10 диметилсульфоксида, Режим замораживания;1 С в 1 мин до -70 С, После замораживания клетки переносят в жидкий . азот, Размораживание - на водяной...

Номер патента: 1479005

Опубликовано: 07.05.1989

Авторы: Гадатсугу, Дзундзи, Масами, Нобуказу, Харуо, Хироси

МПК: C12N 15/00, C12P 21/00

Метки: интерлейкина-2, человека

...единственныйсайт РяС 1 в направлении вниз сразупосле полученного ранее промотораЯЧ 40.Вставку кДНК-плазмиды р 1 Ы 2-50 Аотсекают путем рассечения ферментомРя 1 1 и подвергают лигации с рСЕ,рассеченным РяС 1, с целью построениярСЕ 1 о, в котором экспрессия структурного гена ИЛдолжна осуществляться под контролем ранее вставленного промотора ЯЧ 40, Плазмида рСЕ ранее строилась для клонированиякДНК методом Г-С-концов в бактериии прямой экспрессии в клетках млекопитающего, 35 40 45 50 дые 24 ч 500 мл среды заменяют свежей средой, Каждую порцию среды, собранную в определенный момент времеони, хранят при 4 С до использования. Спустя 2-3 дня после трансфекции культуральную среду анализируют на активность ИЛчеловека,Как показано в табл. 1,...

Номер патента: 1622398

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Бука, Бундулис, Грен, Звиргзда, Циманис

МПК: C12N 15/00, C12P 21/00

Метки: бактериальных, выделения, интерлейкина-2, клеток, рекомбинантного

...на Фреичпрессе при давлении 700 атм. Полученную суспенэию центрифугируют 30 минпри 12000 об./мин на центрифуге. Осадок ресуспенднруют и по 3-4 раза промывают сначала буфером А с последующим цеитрифугированием в описанномрежиме, затем буфером А, содержащим2 М мочевину, и буфером А, содержащим4 М мочевину, Осадок суспендируют в40 мл буфера А, содержащего 27 додецилсульфата натрия, при перемещивании растворяют, прогревают 2 мин прио60 С, охлаждают до комнатной температуры и тестируют иммунохнмическимили биологическим методом.Раствор рИЛнаносят на колонку2 ч К 100/100 с себадексом 0-100,уравновешенную 50 ммоль трис-НС 1(рН 8,5) с добавками 5 ммоль ДТТ,1 ммоль бенилметилсульфонилбторидаи 17. додецилсульфат натрия. Фракции,содержащие...

Номер патента: 1644036

Опубликовано: 23.04.1991

Авторы: Бондарева, Полоцкая

МПК: G01N 33/60

Метки: активности, интерлейкина-2

...в стандартной концентрации, применяемой дляреакции бластотрансформации лимфоцитов.20В определенной последовательности(ФГА, итерлейкин 2, ДМ нли спирт)добавляют реагенты в необходимыелунки по схеме:клетки + 2 мкл этанола;25клетки + 2 мкл ДМ;клетки + 2 мкл ФГА;клетки + 2 мкл ФГА + 2 мкл ДМ;клетки + 1-5 мкл образца;клетки + 2 мкл ФГА + 1-5 мкл об-.30раэцарклетки + 2 мкл ФГА,+ 1-5 мкл об,разца + 2 мкл ДМ,Тестирование проводят.в 2-3 параллельных пробах,Клетки инкубируют в течение 72 чпри 37 пС и 5% СО,. За 6 ч до окончанияинкубации в каждую лунку добавляют1 мкКю метил- Н-тимидина. Клетки со- ФГА стимулированными лимфоцитами,бирают на фильтры из стекловолокнатипа ОРС с помощью прибора для полу 40автоматического сбора клеток...

Номер патента: 1554382

Опубликовано: 07.05.1991

Авторы: Данилюк, Серпинский, Синяков, Урманова

МПК: C12N 15/00

Метки: гена, интерлейкина-2, конструирования, человека

...5-8 0 клеток;,тиосфере 5 Х СО 0,25 мкКи зН-тииидина вводят в реакционную смесь н тер.мостатируют еще 4 ч в тех ае услови"ях. Клетки собираются на фильтре"М 1111 роге" (0,45 икм), промывают0,01 М КБРО (рН 7,5) с О, М йаС 1Количество включенного ЗН-тимидинаизмеряют по Черенкову, используютсчетчик МагЫ 1 П.Лизаты клеток Е.со 11 ЮИ 83, содераащие рРХ 1 Ь, достоверно вызывают пролиферацию мышиных лимфоцнтов, т,е, обладают активностью 1 Ь, Полученныеданные свидетельствуют о биологической полноценности синтезированногогена человеческого 1 Ь,Предлоаеннцй способ получения гена1 Ьимеет существенные преимущества, Вследствие применения на.стадииполучения субфрагиектов длинных частичнб коиплеиентарнцх полинуклеотидови использования...

Номер патента: 1684339

Опубликовано: 15.10.1991

Авторы: Агапов, Войтенок, Грэн, Коричнева, Кушниров, Панютич, Скрябин, Смирнов, Тер-Аванесян, Тоневицкий, Ураков, Циманис

МПК: C12N 15/26

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, дрожжей, интерлейкина-2, продуцент, человека, штамм

...содержащий структурную область гена интерлейкиначеловека, и в результате получают плазмиду рА 19, Есой-Яа 1 1 - фрагмент (1,8 т.п,н) плазмиды рА 19 клонируют по тем же сайтам в плаэмиду рГТР 4, сОдержащую терминатор транскрипции гена кислой фосфата з ы Р Н 05.В полученной таким образом плаэмиде рУ 116 сайт Есой 1 затем заменяют при помощи линкеров на сайт Вагп М 1, в результате получают плазмиду рУ 116 В. Ващ М 1 - Нпд 111 - фрагмент плаэмиды рУ 116 В клонируют в плазмиду рЗОВ 207 и получают плазмиду рЯ 1711 размером 8,9 т,п,нсодержащую ген ИЛчеловека под контролем препрообласти гена альфа-фактора и способная к репликации в дрожжах.Штамм бВ-Н 28/рЯ,.11711 - продуцент интерлейкиначеловека получен трансформацией клеток Я,сегеч 1 з 1...

Номер патента: 1703693

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Авот, Грен, Дебабов, Козлов, Косиков, Костров, Мазель, Машко, Мочульский, Носовская, Романчикова, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Трухан, Циманис, Черновская, Юрин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: 2-19, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...ДНК длиной =750 п.нвырезает и проводят элюцию ДНК. Для достройки о,;ноцепочечных концов ДНК с помощью Кленовского фрагмента ДНК-полимеразы 1 Е со, выделенный из геля фрагмент обоа;э; .пгают в пробе объемом 20 мкл, содер,кэ.,ей 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 10 мМ МдС 1:, по ЗО мкМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов Реакцию останавливают прогреванием, ДНК из смеси переосаждают этанолом и растворяют в 20 мкл,Полученный препарат фрагмента плазмиды рАА 1213-23 В используют на дальнейших этапах конструирования для интеграции кодирующей части интерлейкиначеловека в векторную плазмиду рВВ 124 В.3 мкг ДНК плазмиды рВВ 124 В расщепляют рестриктазой ВагпН в пробе обьемс . 12 мкл, содержащей буфер для рестрикци:- Реакцию останавливают фенольной...

Номер патента: 1761805

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Данилюк, Кравченко, Кьамынина, Сандахчиев, Синяков

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: pil-221, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкин-2, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, человеческий, человеческого, штамм

...ДНК-полимеразы (фрагмент Кленова) и выдерживают еще 10 мин при 10 С. 10мкл смеси используют для трансформациикомпетентных клеток Е.со 3 М 10 . Из колоний, имеющих фенотип Ар, Тс, выделяютплазмидную ДНК, обозначенную рВ, ипроводят Маги (Есор -ЯаО )-рестрикционный анализ, Правильность структуры нуклеотидов в области сайтов Есори ЯаОподтверждают методом Максама-Гилберта.П р и м е р 2, Конструирование рекомбинантной плазмиды рВ 1:2,20 мкг репликативной формы ДНК фагаМ 1 з гра гидролизуют в 100 мкл буфера 2 50ед, рестриктазы Есор1 ч при 37 С. Есор-Есор-фрагмент (198 п,о,) выделяют в 6%ПААГ,1 мкг ДНК плазмиды рВ -2 гидролизуют в 20 мкл буфера 2 рестриктазой Есогвописанных выше условиях, Смесь 0,25пкмоль линейной формы рВ:2,пкмоль(Есор -Есор...

Номер патента: 1770359

Опубликовано: 23.10.1992

Авторы: Авот, Грен, Мясников, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 1/19, C12N 15/26

Метки: cereuisial, msil, sасснаrомuсеs, sасснаrомyсеs, днк, дрожжей, интерлейкина-2, клетках, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...фаза Т 4 и проводят инкубацию в течение ночи при 4 С, 20 25 30 ампициллина Из полученных описанным способом отдельных клонов трансформантов выделяют плазмидную ДНК методом, аналогичным методу выделения плазмиды рМЯ 46, с тем отличием, что выращивание клетокЕ,сове; дут в 10 мл питательной среды и все объемы растворов соответственно уменьшают в 50 раз по сравнению с указанными. Кроме того, вместо центрифугирования в растворе 35 40 50 55 51015 Полученной таким образом лигазной смесью трансформируют клетки Е.со НВ 101. Для этого клетки Е,со выращивают в 100 мл средыВ при 37 С и интенсивном перемешивании до достижения оптической плотности при 600 нм 0,4 - 0,5. Культуру охлаждают на льду, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10...

Номер патента: 1830945

Опубликовано: 10.08.1999

Авторы: Авот, Грен, Мясникова, Останин, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 15/26, C12N 15/81

Метки: alphoil, cerevisiae, saccharomyces, биосинтез, днк, дрожжах, дрожжей, интерлейкина-2, конструирования, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, секреторный, секрецию, человеческого, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК plDB(ALPHOIL), обеспечивающая биосинтез и секрецию человеческого интерлейкина-2 в дрожжах, мол.м. 5,3 мДа и размером -8,1 т.п.о., содержащая: - Hind III - Sal I - фрагмент плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора plDB 207 размером 6,3 т.п. о. , включающий бактериальный ген устойчивости к ампициллину, бактериальную область инициации репликации, дрожжевой ген LEU2, а также фрагмент дрожжевой двумикронной плазмиды, обеспечивающий репликацию плазмиды в клетках дрожжей; - Sal I - Bam H1 - фрагмент полилинкера плазмиды pUC 19 размером 20 п.о.; - Bam H1 - Sau 3A - фрагмент промотора гена PHO5 дрожжей плазмиды pVY 18 размером 0,35 т.п.о. с...