Штамм бактерий рsеudомоnаs sp., используемый в качестве тест-культуры для определения никотиновой кислоты

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЕ.ЕИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК увствцтельны цию никотин кислоты в с помощью рого можно выяНОВО Кис, ОТЫ,на простых по ять праду ю никоти 1 мкг/мл,ВЕЧЦСЛ ,ЦИГ)ле хновцч цачицая с 0оставу жидк аг х и У Р церальць аэличм чисванных а микроорганизмовирующ 1 х низшие с. ных групп ле ассими НОЛ 1 МЕЗ црт стоце ц( ра циячиваюкая р ник ост бак гаризов ерин этог цых мине 0,1 ыкг/ ожцо про ральныхл. Ца ага жидких и а редах, со тавл ризо 13 анных только кач дукццц ник ких - каче ить е венное опредовой кислот ние про е на жидственное, рциональот кы в ср де центраций ЕЦИО е и колич рямо проп ост,( штам й кислоты ИМОСТЬ Р котицово ЕС ТЛ(, н Л 1. : кткрооргалирующих а зличых рупп асси а низмов, в том чис ющегос ЕР 1 о опреде кисл(т ПЕЛЯ ьвитес мин д Р качестШ тамдина иновоитипа Р мощью ццтрозогуаципол чец(3,1( по никотцмма дикого еленного иэ медпрепа является аук тр,Е осуществляли по ец(Еошопав рци ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРИТИЯПРИ ГННТ СССР ОПИСА:йК Н А Ц" "уР(:Я(Щ С(с 1 ДЕТЯД(5("Р ЕЕСР ЕЕ("Е 1 Е)ЕЕОЕ(с Р ЕЕСЕ;.(тЕЕПЕЕЕ, (Ес;ТЕ 1, Т(ЕСТ-ЕГУЛЫУРЫ (ЕЕ (111(Е,ЕЕЕЮЕЕ, ЕЯЕГГ 1.ЕЕЕЕОВОЙ КИГ;ЛОТЬЕ Г 57) 11., ); ( к 7 отц( сиг(.я к микробиоЛо 1(с К(В Р(ЦЛЕН ОС(1 И КасастСЯ цовс(го "ам, ,ктерий. яви(ющсгося те(. гК.л 1:, .1,я 11)ее 1 ия:икоги 1-,; , :,. Е(;ьВ ; оретец(1 яв-. (йКс "." Гак 1 риРе(сЕОщоар Ц .- . 114 се.фчцьй и Г( Л(1,1 ЗВ.(ЯЕТСЯ ЦОВЫИ Рз( 1(Е(и 1 с(а( зр., спе- тВте; 11111 к содержа- КИСЛОтЬ В СРЕДЕ, С о КИСЛОТЫ начиная гг етых по составу 801 535893(51)5 С 12 ЕЕ 15/00, 1/20, ,С 12 Я 1/00//(С 12 ЕЕ С 2 , : ризовацньх минеральных низшие спирты (этацол и метанол) в сточцика углерода и энергии ти икацию мутации пасЕ у бактотсутствию способности расти на минеральных средах без никотиновой кислоты. Минимальная концентрация никотиновой кислоты, обеспечивающая, рост бактерий этого штамма в жидких и агаризованных минеральных средах, составляет 0,1 мкг/мл.Штамм Рвесошопаз зр. (лабораторный номер М 11)хранят в лиофилизирован-,0 ном состоянии,Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промьппленных микроорганизмов под номером ВКПМ Ви имеет следующую характеристику. 15Культурально-морфологические признаки.Клетки прямые, палочковидной Формьс округлыми концами О,бх 2-3 мкм, подвижные с 2-4 монополярными жгутиками,граммотрицательные, спор не образуют,Колонии на агаризованных питательных средах (мясопептонном агаре, КингВ агаре) гладкие, плоские, круглые,серовато-белые с ровными краями. Через 24 ч при 28 С образуют колонии 23 мм диаметром. Рост по уколу в МПА .умеренный, в основном на поверхностисреды, В жидких питательных средахбразчет интенсивн,св мутХсропо растет ца минера. ; ,;. гпростого состава, дооле х и,новой кислотой.ФиэиолоГО бохе.кие 1; з ч к .Отн.шние к истоникам угл;-ода,35использчют глюкозу, глиц .вии са карсзу, галактозу, мальтозч, рук.эз,этанол, метанол, тирозин, фенила:анин,орнитин, гвицин, лейцин, глютамиовуюкислоту аспарагиновую кислоту. Не14 лутилизирует: арабинозу,;аннозу, ксилозу, лактозу, мгннит, раффинозу,дульцит, сорбит, целлобиозу, инозит,серии, лизин, трилтофан, антраниловуюкислоту, ацетамид.45Отношение к источникам азота: использует аммоийньйнитрать азот,мочевину.Реакция на оксидазу и каталазу положительная. Реакция фогес - Проскауэ 50 ра отрицательная. Индол не образует.Тест на анаэробную аргинин-дегидралазу полоительый. Реакция на анаэробную денитрификацию отрицательная. Лецитиназная активность отсутствует.55Не гидролизует крахмал, желатин, Твин.Образует желто-зеленый водораств 1- римь флюоресцирующий пигмент на среде Кинг В. Внутриклеточисг; : ментане образует.Облигатный аэроб.Оптимальная температура роста 28- 32 С.Оптимальный рН 6,8-7,3,Штамм Рвесотопаз зр. ВЕПМ Вможет быть использован в каче тве индикаторной тест-культуры для качественного и количественного определеня продукции никотиновой кислоть на агаризованных и в жиркхреда На агаризованных средах можн пр. иодть только качественное оределевие продукции никотиновой кисло:ы,и ,зд -ких средах - качественос и кс ественное,Проведенный ан;. э з; и:с . ежду величиной зоны ро.га ицд.ас рного штамма 1."с 1: ,р. 81 Я 1 ";-38на агаризованво-;е . к, и р.т , количеством никс синовйс.лотк иоз -волил установить, те. ччиа зоп индикаторной культуры в врастает прямо пропсрциональво количеств. никотиновой кислоты только в очень узодиапазоне кон;,с рации, аено отО, до С," мк л.Геэультэ , олов слеусщи:1 Сс- ос ,о , от,- дае: зоны,в в й кис лоты,смс. мпО ОО 05 00,10 1,3О, 1.5 ,О0,20 2,90,25 3,70,30)0,35 4,50,40 4 э0 450,50Никотиновая кислота в колествс 0,3 мкг дает максимальный размер зоны роста индикаторного штамма на ггаризсванной среде (4,5 см). Дал.е,сее увеличеие количестванкотинов " кислоты уже не приводит к возрастанию размеровзоны.В дипазоне О, 1-О, 3 кг/. никотиновой кислоты можно проследить прямопропорциональную зависимость увелиения размеров зоны роста идикгторной тест-культуры от количества никотиновой кислоты.Однако даже в этом дсасве размеры зоны роста индикатвой тт-куль 153589 1тури цд дгдрц пдццой с 1 е 2 е мо Утварьцровдт двцс 2 цмастц От ц.отцос - тц ц марки д дрд ц других факторов.Поэтому 12 я 112 учсц 15 Г иЗадукцц ци(сти5 новой кислоты цд плотных средах рекалеСд(вдцо цспа;ьзовдть шгдмм толькодля качественного анализа, причем 11 зоцчкгГ 2 ГГГ а ГГГцгс с ."1 а.га гг 1,;гГО регис Г 21 с пп , 1 дч д а О,.кгл Г. 0Прц .к"цс рцмецтд" .Ом д ,2.цэе здвисигсс Гц размеров в ны роста Г 5 дикдторг го ГТкма ОГ КЗЗИЧ:стад 1 цкатцн воц кс,ты прц исОльзовдцц агаврц за. дцзых сред, с г;гг;21 х в кдчес.тве(5.:ОЧ ГИ г , 12 О.ГД " РГП 3 ТсЦОЛ ИЛИ ГС Г;2 НС,д.1 ГГс Н,с ЛГс 1 с ЗОН ) Вссзтгслг: ГГ 2 д. т:; и ц чпгоцдл ь;гдя:3 а В( . МгС ". Г 2 ГСсэ. Г О Т К 021 И Ч Е С Т В а цикатццаОГ к: Оти, тсч о тдкоц же, 20 КсК 1, НЛ; С.,Х С Г 2 1Г И ГХОДИТ СЯ В ПрЕдс ГдХ (. -О,Г Г,Л, ЭаэмсрЫ 3(г Гсз КгС 1 Г г ц 111., 1,.СО ПрИ ИСпользовании Зрс. с ге; д.22 ам зоны роста ицдшсстарц г" гггдммд нсабходцма ре гистрцрапдт; и; сутки поз;:е. В ы 1 г.; 1 еда х с цсмощГю Гптамма В(ПМ Бса 1 о проводить кдчественцое 1 колцчсс гнеГное Зпределецце про И ц с 1,. ": Пй .ГЧТ 11(1 С Т 30О ,Ъа,т(ПГ. СУГ С ГГЗ.15 ПЯ 1:УТЕГ,. С, ВО П К Г Г:В Г,(ц г, В П ЗбЕГс" : - Г а иГОЛД "аций ацтИ- чес ко 111 (с., ) Ультурь сГ С1 СЧО " г,ГГЦЕМ .:.ГСРСГ 2 С, ГРафИКа.д Гс гзт.гс. И;Рс;: с( кд. Гибэавас 40 ндя к,:Нд;зц.кай п.гцсс г 1 штамм Рсц Гс 1, гвд;:-:р. Е 1 РГ -3834, выра.;снцаг , гц, г:11,1 ой Г 2 е е Г 19 с Глюк зсц (О 27) в эдв;сии-стц т концентрс цс 1 цика" цГ Оц кСлаты в среде. 452.ГГ(21. "ГДГДЯ 11 Ц ГМССТЬ Цс 1 РаС:сг ч Г. Гь , 0 мкгсмл величина ОП 40ДОС. ГС- ГДЦЛ 1 Л ГСГ 2 ЗНДЧЕНИЯ Иг 12 и Дс 11, й ш(гУ ГеЗцче ццс конце нтРа151 ЦК ТЦГ Ой КИСЛОТЫ ИСЗМЕЦЕГИйОГГ-и Геок и тц г Гч ку ьтуры уже це нд б 1 г,;,с .ссее ньгс оком содер;с(ЗГц ц г., , : ". К СЛОтЫ Са.ИЧЕСТвсццыц "и 1 р и . 255 т "алька при С Л Г:З г: СГ и ЕМ; ЕНИН ПрабЫ.;кцл Обд зам, с цс НОЛЬ Овднием штдмгд ВЕПГ Вв жидкой среде л(2 И проводить качественный и колцестнецный анализ определения продукции (содержания) цсатиновой кислотыкоццецтрдцй 0,1в дцдпдзоце1,0 лкгмл,Г р .: 12 Г.ц; Е,(.ЕНИЕ НИКО; Г 1,2211 кис.1 Г Нл;1 ;1 цоезснц 1;, сЗеПЕГсЮТ ГОСЕВ Штам"Д С КОСЯКД ВГ 1 ПБ либо другую штательцую среду,Обеспечивающую рост бдктерий, и кульгцзцруют в течение ночи Гр 28 С.Вате аКтЕрцц ОтлвшвдЮт дваждЫ фцзцологическцм раст 2 ром с помощью центриугиродния (1 О мцц, 5000 д) и ресусцендцруют до первоначального объема вэтол же растворе, 0,1 мл суспензииклеток вносят в пробирку с 4 мл расплавленного и Охлажденного до 45 СиГнИальп "о палужцдкого агара (0,7%),приготовленного ца осьсове минеральной среды Г 9 следующего состава, 7.:глюказд 0,2; Г 1 анРО 4 (безводный) 0,6;КН РО+ 0,3; Г 1 аС 0,05; ГГН+С 0,1;СдС 0,0015; Г 11;804 7 Н О 0,2; рН 7,0.Засеянную среду наслаивают вторымслое. На поверхность агаризованцойсреди (1,5%) того же состава. Послездстывдця верхнего слоя с культуройиндикаторного штамма уколом делдютСГ . ЕПИ ОтпсЛЬЦЫХ КЛОНИВ ЦСПЫтУЕМЫХа про;укццю цикотианси КислотыКг гТу 2 Л 1 ИКЪОО 1 ГД НИЭГГОВ УТИГЦ 1 ЗЦРЧК- щцх в качестве источника углерода ц эцергцц глюкозу. Прсзбы ьчращивдют в течение 24-48 ч црц 28 ( Вокруг колонии, клетки кстарих продуцируют никотинаую кислоту, наблюдаются четкие зоны ростд ццдцкдторцого штамма,В 1 ПГ 1 В.П р и м е р 2. Посевной материал тест-культуры и последующие процедуры проводят аналогично примеру 1, однако в качестве источника углерода и энергии в используем.е минеральные среды добавляют вместо глюкозы 17 этацола, Уколом делают посевы культур микроорганизмов, утцлцзцрующцх этанол, определяя по росту вокруг укола шталгмд ВКПГ 1,Вобразование никотиновой кислоты.П р и м е р 3. Посевцой материал штамма и последующие процедуры проводят как в примере 1, однако в качестве источникд уг;еродд и эцергии В ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ Г 1 ГЕДЗЬГЬГЕ СРЕДЫ ДО- бавляют 17. летднс 2 д ц;елдют посевы/4 Я аг ац Составитель Л. Минееваедактор Т. Лаэоренко Техред М.Дидык Корректор С. 11 с.км,р Тираж 491 Подписноетвенного комитета по изобретениям и открытиям црц 11.11 Т О( 113 с 115, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 каз 85,ИИПИ Госуда Производственно-цзцательскцй комбинат "Патент", г.ужгород, ул. я я 1 Цвя,1 испытуемых на продукцию никотиновой кислоты культур микроорганизмов, утилиэирующих метанол. Пробы выращивают в течение 48-72 ч.П р и м е р 4 Определение продукции никотиновой кислоты в жидких средах. Посевной материал штамма ВКПИ Вготовят как в примере 1. Затем 0,1 мл посевного материала вносят 10 в пробирку с 4 мл жидкой минеральной среды М 9, содержащей в качестве источника углерода 0,27. глюкозы и 1 мл пробы (культуральной жидкости испытуемдго штамма-продуцента, полученной после культивирования в жидкой среде .и последующего осаждения клеток с помощью центрифугирования при 5000 8 в течение, 1 О мин), Пробы выращивают в течение 24-48 ч при 28 С. Наличие ни котиновой кислоты в пробе, а также ее концентрацию определяют, цс ля из показаний оптической плоти, с -ц (611540" культуры и калибровочного граФика.Полученные результаты свидетельствуют о том, что с помощью штамма Рзецс 1 ошопаз зр. ВКПИ Вможно выявлять и изучать продукцию никотиновой кислоты, начиная с О,1 мкг/мп, на простых по составу минеральных средах среди. различных групп микроорганизмов, в том числе ассимилцрующц нцзцие спирты (зтанол ц метансл 1 в качест источников углерода и всргцц. Бтамм бактерий Ряец 1 я. з; яр, В 1 с 1 П 1 В, использусмыц . к.г тс ткуЛьтуры для спр .",.вця в,к,актив;,ой кислоты.