Штамм бактерий еsснеriснiа coli, предназначенный для идентификации r-плазмид

(19) 111) СО)ОЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 16 А ТЕН Е ИЗ ституитут икробио длят х к Изо логии иденти штаммо эпиде чествЦе па.зон лазм СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СНИДЕТЕЛЬС(71) Ижевский медицинский ин ти Кубанский медицинский инстим, Красной Армии(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ЕБСНЕК 1 СН 1 А С 01,ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИК-ПЛАЗМИД(57) Изобретение относится к мологии и может быть использованидентификации К-плазмид у природныхштаммов энтеробактерий, а акже вэпидемиологических исследовайия вкачестве эпидемиологического мар ер ретение относится к микробноможет быть использовано дляикации К-плазмид у природныхэнтеробактерий, а также вологических исследованиях в кэпидемиологического маркера.изобретения - расширение диаидентификации природных КСущностью изобретения является выявление К-плазмиды, принадлежащей к группе несовместимости Х,Плазмида была обнаружена у штамма З.воппе 1, выделенного от больного острой дизентерией, и получила обозначение рКМК 242-2, Учитывая пато- . Целью изобретения является расширение диапазона идентификации природных К-плаэмид, Штамм получен путем трансформации в стандартный штамм Е.со 1 К 12153 плазмиды рКМК 242-2, Плаэмида первоначально обнаружена в штам" ме ЯЬ 1 ее 11 а воппе 1 и получила обозначение рКМК 242-2, Плазмида наделяет клетку-хозяина устойчивостью к тетрациклину и хлорамфениколу (200 мкг/мл) является конъюгативной, частота передачи 1,510 , рКМК 242-2 не наделяет клетки-хозяина чувствительностью ксфагам, специфическим в отношении 1 пс-групп Р,1,Б,Р, способна ингибировать фертильность (Р 1.+), Молекуляр 6 ная масса плазмидной ДНК 50 10 шЭ. Изученная плазмида относится к группе несовместимости Х. генность данного штамма, плазмиду передали в штамм Е.со 1 К 12153 Ма 1 путем конъюгационного скрещивания,СОШтамм депонирован в Центральном музее СЛпромыщленных микроорганизмов инс титу" фта ВНИИгенетика, коллекционный номер СЬВ, Штамм с плазмидой может бытьиспользован для идентификации К-плазмид в эпидемиологических исследова- .ниях и в генно-инженерных работах,Свойства,.выявленной плазмиды установлены с использованием генетических, физико-химических и микробиологических методик, Возможность использования плазмиды для идентификацииК-плазмид у диких штаммов энтеробактерий апробирована в случае идентифи 1479516кации К-факторов, обнаруженных у дизентерийных больерий, выделенных отбольных,Морфологические признаки.Клетки имеют вид прямых палочек.величиной 1,5-3,0 х 0,3-0,5 мкм,слабо подвижны перитрихи, спор икапсул не образуют, грамотрицательны,Культуральные признаки. На мясопептонном агаре колонии слегка выпуклые, полупрозрачные, с ровными краями, диаметр колоний 1-3 мм, на кровяном МПА круглые колонии без зоны гемолиза, полупрозрачные, на среде 15Энда круглые колонии, окрашенные втемно-красный цвет с металлическимблеском, на голодной среде с метионином и пролином плоские, полупрозрачные колонии размером 1-3 мм (ауксотроф по метионину и пролину),на мясопептонном бульоне образует равномерное помутнение и осадок.Физиологические признаки. Е,со 1Вне образует оксидаэу, расщепляет глюкозу с образованием кислотыи газа, ферментирует арабинозу, лактозу, мальтозу, манноэу, сорбит,ксилозу, восстанавливает нитраты внитриты, дает положительную реакцию 30с метиловым красным, не ферментируетсахарозу, дульцит, мнозит, не усваивает цитрата натрия, не обладает уреаэной активностью, не образует ацетилметилкарбинола.Генетические особенности, ШтаммВимеет хромосомную устойчивость к налидиксовой кислоте, ауксотроф по метионину и пролину, Плазмида наделяет клетку-хозяина устойчивостью к тетрациклину и хлорамфениколу (200 мкг/мл), является конъюгативной, Частота передачи 1,5 1 ОПлазмида рКМК 242-2 не наделяют клетки-хозяина чувствительностью к до.норспецифическим фагам МБ 2, И, Л 1,Ц, р 2,Н 1, 1 Ке, РК 4, имеет Р-фенотип.Физико-химические свойства, Молекулярная масса плаэмидной ДНК5050 10 шЭ.П р и м е р, Отношение вновь выявленных плаэмид к группе несовместимости Х изучали по методу Эаса, Перенос второй плазмиды в клетки микроорганизмов, несущих одну (резидентную) плазмиду, осуществляли при помощи канъюгационного скрещивания. Селекцию трансконъюгантов проводили на среде Энда па хромосомному маркеру реципиента и неперекрывающимся маркерам данорной плазмиды, На среде Энда с антибиотиками расчищали до 10 клонов-потомков, а затем не менее 30 клонов проверяли на свойства, характерные для каждой из плазмид, В том случае, если произошла элиминация резидентной плазмиды, проводили повторную проверку в противоположном направлении.1При скрещивании штамма Е,со 1 х С 600 КЫ с плаэмидой К 6 К Ариш со штам. мом Е,со 11 1 53 Ба 1, несущим исследуемую плазмиду с фенотипом АрЯшТс создавали селективную среду АрНа 1. Установить произошла ли элиминация какой-либо плазмиды оказалось невозможным, так как вводимая и резидентная плазмиды имеют сходный фенотип, Чтобы провести этот опыт в качестве известной плазмиды использовали штамм, несущий плаэмиду ркМК 242-2 с фенотипом ТсСш, Скрещивали штамм Е,со 1 С 600 КЫ с плаэмидой рКМК 242"2 ТсСш со штаммом Е.со 1 х 53 Иа 1, несущим исследуемую плаэмиду с фенотипом АрЯшТс, Для селекции трансконъюгантов создавали селективную среду Энда с антибиотиками ТсСшЮа 1, Получили трансконъюганты с фенотипом ТсСшБа 1, т.е, фенотип резидентной плазмиды утратился вследствие элиминации ее, Следовательно эти две плаэмиды являются несовместимыми.Таким образом, использование данного штамма позволяет установить принадлежность исследуемых К-плазмид к группе несовместимости Х.Формула изобретенияШтамм бактерий ЕэсЬегс 1 п.а со 11ВКП М В"3351, предназначенный дляидентификации К-плазмид.