Патенты с меткой «расщеплять»

Номер патента: 1442546

Опубликовано: 07.12.1988

Авторы: Дегтярев, Жилкина, Репин

МПК: C12N 15/00, C12N 9/14

Метки: cgtagn, gcatcn, нуклеотидов, последовательность, расщеплять, рестриктазы, способной, узнавать

...проводят при 4 С, Биомассу ресуспендируют в буфере А (0,05 М трис-НС 1, рН 75; 5,4 10 М ЭДТА, О, 1 М 2-меркаптоэтанол, 0,2 Х ИР) в соотношении 6 г биомассы на 20 мл буфера. Разрушают ультразвуком в ультразвуковом дезинтеграторе МБЕ три раза по 40 с на частоте 20 кГц, амплитуда 12 мкм, Осаждают клеточные остатки при 16 тыс, об/мин в течение 30 мин, Осветленный супернатант наносят на колонку с фосфоцеллюлозой Р, предварительно уравновешенную буфером В (0,02 М КНРО, рН 7,5; 5,4 10 М ЭДТА, 0,1 М 2-меркаптоэтанол), колонку промывают этим же буфером, объем которого равняется двум объемам смолы. Сорбированный на Фосфоцеллюлозе белок смывают 1 М ИаС 1 в буфере, собранный белок диализуют 3 ч против 3 л буфера и.наносят на колонку с...

Номер патента: 1458388

Опубликовано: 15.02.1989

Авторы: Битинайте, Буткус, Горбачев, Грубер, Кюдулене, Лазарявичюте, Лаучис, Манялене, Поляченко, Янулайтис

МПК: C12N 9/22

Метки: catg-3, gpucgpyc-3, нуклеотидов, обладающих, последовательности, расщеплять, способностью, узнавать, эндонуклеаз-рестриктаз

...буфером В, содержащим 0,1 М ИаС 1. Колонку промывают 150 мл того же буфераи элюируют линейным градиентом ИаС 1 от 0,1 до 1,0 М в 500 мл буфера В. Отдельно собирают фракции, элюируемые при 0,25-0,36 М НаС 1, содержащиеосновную часть активности рестриктазы Нхп 1 1, и фракции, элюируемыепри 0,58-0,7 М, содержащие активностьрестриктазы Н 1.п 1 11. Далее очисткурестриктаз Нп 1 1 и Нп 1 11 провоАктивность рестриктаз тестируют методом гидролиза ДНК фага лямбда с последующим . разделением полученных фрагментов электрофорезом в агарозном геле. Реакционная смесь для гидролиза ДНК фага лямбда рестриктазой Ндп 1 1 содержит 10 мМ трис-НС 1 рН 8,5, 25 мМ НаС 1, 5 мМ МяС 1 100 мкг/мл альбумина бычьей сыворотки, 2 мкг ДНК фага лямбда в 40 мкл...

Номер патента: 1752769

Опубликовано: 07.08.1992

Авторы: Андреева, Афиногенова, Гордиенко, Лебедев, Майстренко, Пустошилова

МПК: C12N 9/14

Метки: gtcgac, нуклеотидов, последовательность, расщеплять, рестриктазы, способной, узнавать

...в 6 - 8 раз больше, чем в известном способе, Полученная рестриктаза характеризуется следующими свойствами;узнает и гидролизует последовательностьнуклеотидов 6 ТС 6 АС, оптимальное значе 10 ние рН для действия рестриктазы 8,0; оптимальная температура 37 С; для проявленияактивности рестриктазы требуются ионыМц (оптимальная концентрация Мц 1015 мМ); оптимальная концентрация йаС в15 реакционной смеси 100-120 мМ.Полученный ферментный препарат свободен от значительных количеств неспеци-фицеских нуклеаз и фосфатаз, Приинкубации 200 ед,акт. фермента с 1 мкг ДНК20 фага в течение 2 ч при 37 С наблюдаетсястандартный набор фрагментов ДНК, Фрагменты ДК, полученные при инкубации 10ед.акт, фермента с 1 мкг ДНК фага в течение2 ч при 37 С, сшиваются...