Способ определения мутагенной активности химических соединений на дрожжах sасснаrомuсеs cerevisiae

(51)4 С 12 Н 2щ Да по биолокнх соеди(56) Мц 1 71-86(54)(57) ГЕННОИ АК НЕНИИ НАА- ЕДИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ОПИСАНИЕ АВТОРСКОМУ СВИДЕТ,(71) ЛГУ им, А.А. Жданова и Нисследовательский институтгическим испытаниям химичеснений(53) 616.07 (088.8) оп гевеагсЬ, у, 31,1975.СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУТТИВНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ СДРОЖЖАХ ЯАССНАКОМУСЕЯ БРЕТЕНИЯ СЕКЕ 71 ЯХА., включающий выращиваниекультуры дрожжей, ее суспендирование, посев на селективную среду,введение в центр газона тестируемого химического соединения с последующей оценкой мутагенной активности по появлению колец протогроФ, ных колоний в центре газонов,о т л и ч а ю щ и йс я тем, что,с целью повышения точности способа,в качестве культуры используютсмесь суспензий двух штаммов дровжей Ы, -типа спаривания, имеющихкомплементарные пищевые потребности,.8взятых в концентрации. 10 -1 О кл/мл,при соотношении 1:1.1207144 в центре чашки.,ЗО Подписное Тираж 520 ВНИИПИ Заказ 775 Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к генетикемикроорганизмов, а также к области,связанной с защитой окружающей среды от генетически опасных химическихсоединений, и может быть использовано в генетической токснлогии.Целью изобретения является повышение точности способа.П р и м е р. Проводили тестирование химических соединений на мутагенную активность на двух штаммах дрожжей БассЬагошусев сегеуз 1 а 1 20 А-П 3912, имеющего генотипсс Ыз 4 1 еи 2" 1 ув 2-А 38 Ь 1 в 7-1 шеС 5А 1, и 38 А-П 3663, имеющего генотипос 1 ец 2-2 йМ 4 гауз 2-А 12 аде 1-6 ас 1 е2-163.Смена типа спаривания м -ф а может происходить в результате потериШ хромосомы гаплоидной клетки, делеции в правом плече Ш хромосомы,точковых мутаций или микроделецийв локусе типа спаривания. Поэтомуродительские штаммы маркированытаким образом, чтобы по пищевым 25потребностям гибридов можно былоустановить события, в результатекоторых произошла смена типа спаривания одного из родителей. Регистрируется три основных класса такихсобытий.:1) потеря Ш хромосомы у клетокштампа 20 А-П 3912, в этом случаеу гибридов наблюдается потребностьв треонине и лейцине и отсутствиегетероаллельной рекомбинации по локусу 1 ец 2; потеря Ш хромосмы уклеток штамма 38 А, при этому гибридов наблюдается потребностьв гистидине и лейцине и отсутствие 40гетероаллельной рекомбинации по1 еп 2;2) делеция в правом плече Ш хромосомы у клеток штамма 20 А-П 3912,в этом случае у гибридов наблюдается потребность в треонине и лейцине,но в отличие от первого класса гибриды характеризуются наличием гетероаллельной рекомбинации по 1 еи 2;3) точковая мутация или микроделеция в локусе типа спаривания МАТу клеток штамма 20 А-П 3912 илиштамма 38 А-П 3663, при этом у гибридов наблюдается потребность в лейцине и наличие гетероаллельной рекомбинации по 1 ец 2, а также прототрофность по гистидину и треонину. Культуры штаммов 20 А-П 3912 и 38 А-П 3663 выращивали на твердой полкой среде, затем суспендировали в дистиллированной воде, суспензиит двух штаммов, содержащие 10 - 10 кл/мл, смешивали в равной провпорции и высевали на твердую полную среду по 0,2 мл газоном. В центр газона помещали фильтр с определенным количеством текстируемого химического соединения и инкубировали 22-24 и при 30 С, затем перепечатывали на селективную среду, содержащую гистидин, лейцин, треонин и лизин, для отбора гибридов. На 3-4 сутки учитывали появление колец прототрофных колоний (гибридов) Было проанализировано действие четырех химических соединений, которые являются известными мутагенами. С каждым из них поставлено по два повторных опыта, Среднее число гибридов на чашку при обработке любым из четырех мутагенов значительно возрастает по сравнению с контролем дистиллированная вода). Распределение гибридов по классам показывает, что изменение типа спаривания юс - ду клеток одного из родительских штаммов происходит различным образом под действием разных мутагенов. Диэпоксиоктан преимущественно вызывает потерю Ш хромосомы или делецию в ее правом плече. Этилметансульфонат не увеличивает числа гибридов с потерей хромосом или делециями, хотя общее число гибридов на чашку возрастает в 150-200 раз по сравнению с контролем, так как он индуцирует точковые мутации в локусе типа спаривания МАТ. Аналогично этилметансульфонату действует Д -пропилактон. Нитрозогуанидин вызывает потерю Ш хромосомы и делеции в ее правом плече, а также индуцирует точковые мутации или микроделеции в локусе типа спаривания.