Способ отбора штаммов дрожжей-сахаромицетов -типа спаривания

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А 4 Г ЯГОЙ;уел АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЕТЕЛЬСТВУ К АВТОРСКОМ ДРОЖЖЕЙВАНИЯк микрон и касаработ сль изобвление па спаротборе тестерногсверхчувфактора,в аналиосев тес ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ(56) Захаров И.А., Симаров Б.В. Мутации в локусе типа спаривания и.выведение высокогомозиготных линий Бассйагошусез сегечхзае.,Генетика,1966, т. 2, Р 3, с. 118.Читавинюс Д.Б., Инге-Вечтомов С.Г. Множественные мутанты ЯассЬагошусев сегепзае. Генетика, 1972, т. 8, У 1, с. 95. 12 Н 15/00//(С 12 М 15/00,12 К 1:865)(54) СПОСОБ ОТБОРА ШТАММОВ САХАРОМИЦЕТОВ юь -ТИПА СПАР (57) Изобретение относится биологической промышленнос ется генетико-селекционных дрожжами-сахаромицетами. Ц ретения - ускорение и удеш процесса отбора клонов с 6 вания. Способ заключается с-клонов, подавляющих рост штамма М. -типа спаривания, ствительного к действию ь при посеве методом отпечат зируемых колоний на густой терного штамма. 2 табл.13337Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается генетико-селекционных работ с дрожжами-сахаромицетами,Цель изобретения - ускорение и удешевление процесса отбора штаммон дрожжей-сахаромицетов ю,-типа .спаривания.Способ заключается в том, что ис ходную культуру рассевают отдельнымию колониями, которые переносят методом отпечатков на густой посев тестерного штамма с -типа спаривания, сверхчувствительного к действию Ы, -факто ра (Бзаф), визуально выявляют зоны подавления роста вокруг отпечатанных клонов и на исходном посеве отбирают клоны, подавляющие рост тестерного штамма, 20Для увеличения выхода клонов М - типа спаривания исходную культуру обрабатывают дополнительно мутагеном.В качестве тестерного штамма Ы,-типа спаривания, сверхчувствительного 25 к действию Ы,-фактора, (Бза ) исполь Таблица 1 фенотип К-клоКоличество отобКоличестно проанализиронанныхколоний нов раиныхК-клонон Еец 1 О 2роста вокруг отпечатанных клонов и с матричных чашек отбирают клоны, по- давляющие рост штамма ВКПМ У. Все выделенные клоны представляют собой клоны м, -типа спаривания. Гомозиготизация по локусу типа спаривания иногда сопровождается гомозиготизацией по генам гЬг 4 и 1 ец 2, которые у БассЬагоаусев сегечвае также нахо" дятся в 171 хромосоме и сцеплены с локусом к -типа спаривания. Результаты приведены н табл.1.Отбор клонов Ы, -типа спаривания у штамма БассЬагошусен сегечздае П 5188 дан в табл.1.зуют штамм ВКПМУ, а также другие штаммы Бза Петергофской генетической коллекции дрожжей - 2 Г-П 3238, 27 Б-П 3238, 223-П 3238.На отбор Ы. -клонов данным спосо-с бом требуется 5-6 дней. Способ позволяет проводить отбор с 6 -клонов у культур различной плоидности и у прототрофов.Изобретение иллюстрируется примерами.П р и м е р 1. В качестве исходной культуры для отбора штаммов ив типа спаривания используют прототрофнйй диплоид БассЬагошусез. сегечдз 3.ае П 5188 Петергофской генетической коллекции дрожжей, гетерозиготный по локусу сс -типа спаривания. Суспензию облученных клеток 1,УФ лучи двух параллельных бактерицидных ламп ДБ- 1, мощность дозы 2,5 Дж(мс), рас севают на чашки с полноценной питательной средой РЕАРД (глюкоза 20 г, пентон 20 г, дрожжевой автолизат 1 О мл, агар 30 г, дистиллированная вода до 1 л) из расчета 200-300 колоний на чашку. Через 3 дня выросшие клоны пересевают методом отпечатков на чашки, засеянные густой суспензией (10 -1 О клеток на чашку) тестерного штамма ВКПМ У, снерхчувствительного к действию сс -фактора (Бна ) . Через 2 дня выявляют зоны подавления6010 12 30 Количествоотобранныхсс-клонов честнонализироых коло 45 П 510 3100 2630 5200 3-1 7 3420 3-175 00 П р и м е р 2, В качестве исходных культур для отбора штаммов о -ти" па спаривания используют два диплоида, гетерозиготные по локусу Ы -типа спаривания, П 5199 и П 5200 а также три триплоида 3-172, 3-174 и 3-175 из той,же коллекции. Отбор в 6 -клонов 40 проводят по способу, описанному н примере 1. Результаты сведены н табл.2.Таблица 21 О Составитель С.Лях Техред И. Ходанич Корректор А,Зимокосов Редактор М.Недолуженко Заказ 3926/24 Тираж 499 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 13337Формула изобретения Способ отбора штаммов дрожжей-сахаромицетов м, -типа спаривания, пред"5 усматривающий рассев исходной культуры отдельными клонами, пересев их на полноценную питательную среду методом отпечатков на густой посев тестерного штамма м -типа спаривания с 10 последующим отбором клонов ы -типа спаривания, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью ускорения и удешевления процесса отбора, в качестветестерного штамма Ос -типа спариванияиспользуют штамм, сверхчувствительный к действию с 6 -фактора, а отборклонов ведут на исходном посеве путем выявления зон подавления ростатестерного штамма вокруг отпечатанных клонов.