C12Q 1/68 — использующие нуклеиновые кислоты

Номер патента: 219114

Опубликовано: 01.01.1968

Автор: Шмурун

МПК: C12Q 1/68

Метки: выявления, кислот, нуклеиновых

...лом пли толуолом полистиролом, В о обоазцах дезокси дает синее окраши лиловато-красное; вая, у оксифильнь омыва т баль х так новая бои к. а клет лее нн ют ксило. замом или тм образомкислота теиновая - ок - розотенсивная. ет изобретени еиновых кислот на парате с использон-хромовыми квасто, с целью диффеовой и дезоксирипарат дополнигельм бж. Известны способы выявления нуклеиновых кислот на одном гистологическом препарате с использованием окраски галлоцианин-хромовыми квасцами,Предлагаемый способ отличается тем, что 5 препарат дополнительно обрабатывают рода- мином бж. Это позволяет дифференцировать дезоксирибонуклеиновую кислоту от рибонуклеиновой.Для выявления нуклеиновых кислот по пред лагаемому способу депарафинированные и обезвоженные...

Номер патента: 391172

Опубликовано: 01.01.1973

Автор: Авторы

МПК: C12Q 1/68

Метки: выявления, кислот, нуклеиновых

...путем индукции люминесцентного свечения обработкой клеток акридин-оранжем. Этот способ, однако, характеризуется длительностью процесса.Для упрощения процесса в предлагаемом способе в качестве индуктора используют рифадин (рифампицин).Способ не требует предварительных условий произведения реакции, и не зависит от спирализации нуклеиновых кислот в клетках. Для выявления нуклеиновых кислот в клетках фиксированные препараты обрабатывают в растворе рифадина (рифампицина) 1: 1000 - 1: 10000 в цитратно-фосфатном буфере при рН 4,2 - 4,5 в течение 5 - 30 наин, затем препараты промывают проточной водой 5 мин, высушивают на воздухе и заливают нефлуоресцирующим вазелиновым маслом, Исследование препаратов проводят под люминесцентным микроскопом в...

Номер патента: 1112062

Опубликовано: 07.09.1984

Авторы: Блох, Паскевич

МПК: C12Q 1/68

Метки: днк, концентрации

...реактивы; высокомолекулярная 1 НК, вьеделее 1 ная из зобиойжелезы теленка и диализовянная в те.Нке, ст протиь 11,0, 1 н. НС 10 Е,02 ц, ПС 1 ОН 0,5 ц. НС 101, растворцасьшЕеццого КОН, культура 1 ЯССОЬЯС 1.11 .з дсо 1 ор 11,пз Но, питательнаясреда дге 1 микроорганизмов,5 мл раствора ДНК смешивают с 5 млраствора 1 ц, НС 10. и кипятят на водяной бяце в течение 25 мкн. Г 1 олучен 1.-11 гкдролкзят ДНК охлаждают и нейтрд)1 изу 1 о 1 цескольке 1 ми каплями раствора КОП. Выпавший осадок отделяютпецтрифугкрава 11 ием (3000 аб/мин,20 мкц), Р надосадачной жкдкости остд 1 отся продукты кислотцагс гкдролизаДПК, Ка Ецецтрдц:"Ею ДПК в надосадачной.е:.кпкосте 1 определяют спектрофотометричеси, П а; в .Исывдемом экспериментеконцентрация ДНК в...

Номер патента: 1386031

Опубликовано: 30.03.1988

Авторы: Туула, Ханс

МПК: C12N 15/00, C12Q 1/68

Метки: бактерий, вирусов, идентификации

...в которой вирусный передатчик РНК детектируется посредством метода сзндвичгибридизации (табл. 3). Реагенты сэндвич-гибридизации получают иэ ДНК вируса БЧ 40 (ВВЬ) путем разделения ДНК на две части с использованием РяС 1-фермента. Эти фрагменты выделяют и очищают посред-. ством электрофореза на агарозном геле. Фрагмент А (4000 основных пар) подвергают радиоактивному мечению путем "ник" трансляции 1 " и фрагментыВ (1220 основных пар) фиксируют на фильтре;Фрагменты.ДНК выбирают таким образом, что каждый содержит гены, кодирующие как ранние, так и поздние передатчики инфекции. Так, например, фрагмент В содержит примерно 700 основных пар от структурного белкового гена ЧР 1 и более 600 основных пар от гена более ранних передатчиков...

Номер патента: 1557528

Опубликовано: 15.04.1990

Авторы: Залите, Куликова, Стенгревицс, Хадаев

МПК: C12Q 1/68, G01N 33/53

Метки: биологических, биотиновых, биотинузнающего, макромолекулах, меток, обнаружения, реагента

...препарата не наблюдается в течение 4 иес,Результаты модификации авидина взависимости от концентрации уксусногоангидрида в растворе приведены втабл,1,1,05вязывающей активносотекает не до конца, вительности. П р и м е р 2, Получение бизнающего реагента,.Модификацию авидина проводят ана огично описанному в примере 1 при онцентрации уксусного ангидрида(Егзо/Еаьо) Опыт рН буфера 89101112 1,45 1,45 1 ф 45 1,40 1,05 9,9 6,9 9,9 7,2 9,5 Ф Не достигается максимальная степень модиФикации,П р и м е р 3. Получение биотинузнающего реагента,Модификацию авидина проводят аналогично описанному в примере 1 приконцентрации уксусного. ангидрида0,05 М и рН буфера 9,7, но время инкубации меняют в пределах 20-35 мин,Степень модификации авидина в...

Номер патента: 1613493

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Вейко, Карпухин, Потапов, Спитковский

МПК: C12Q 1/68

Метки: детекции, иммобилизованных, кислот, нуклеиновых, флуоресцентной

...метилумб цтиферона (Я о. в= - 360 цм; Ъ з,ииссии = 450 нм) и Флуоресцеица (Ъ вом 490 цм; / миссии = - 510 цм) . Зависимости интенсивности Флуоресценции от количества ДНК ца Фильтре показывают близкие значения при определении ДИК с разцымц метка - ми в одном пятне и цацесецными по отдельности. Интенсивность Флуоресцецции Флуоресцеица для гидразцдной ДНК ц 4-метилумбеллиферона для биотинировацной ДНК соответствует Фоновым значениям и це зависит от концентрации модифицированной ДИК. Сле - довдтельцо, отсутствуют перекрестное взаимодействие и Факторы, препятствующие детекши ра гличных меток в одном пятне. Чувствительность способа позволяет определять до 0,1 пг меченной ЛНК.П р и м е р 2. Количественное определение двух различных...

Номер патента: 1615181

Опубликовано: 23.12.1990

Авторы: Булгакова, Попов

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: бактерий, днк, днк-зонда, еsснеriснiа, иде, идентификации, конструирования, микроба,несущих, пестициногенности, плазмидная, плазмиду, продуцент, рек-7-днк-зонд, рекомбинантная, чумного, штамм, штаммов

...Злюат экстрагиру ют Фечолом, хлороформом и обрабатываю эфиром. ДНК плазмиды рАТ 153(10 мкг) подвергают гидролизу рестриктазами Ипд 111 и ВапН 1 по методике, описанной ныше. Больший 15 (3,3 т.п,н,) из двух полученных в результате гидролиза фрагментов извлекают из геля. электроэлюцией. Злюаточищают от примесей агарозы и смешивают с злюатом, содержащим Нлпс 1 111- 20 "ВапН 1 - ррагмент рРзс, ДНК осаждают 96 Е-ным этаколом, промывают 70 Еньм зтанолом и подсушивают, Осадокрастворяют н буфере для легирования(5 ец,), Легирование проводят 1012 ч при 16 С.В. Анализ рекомбннактных плазмид 30 и получение штамма - продуцента Р 1- зонда для диагностики штаммов чумногомикроба,хлорамфениколом (С = 20 мкг/мл).ДНК плазмид рРзС и рАТ вьделяют.Клетки...

Номер патента: 1620938

Опубликовано: 15.01.1991

Авторы: Венер, Зубов, Кнорре, Коваленко, Лукин, Свердлов, Туркин, Турчинский, Щербо

МПК: C12Q 1/68, G01N 33/543

Метки: анализа, гибридизационного, проведения

...1,1 ЭС 1. Раствор биотин;лировзнной ДНК хранят при -20 С,25 г) Гибридизация,Нейлоновые фильт ы с нанесенной наних, НК переносят в .Зшки Петри с 3 млпредГибридизационнОГО раствора (1 мл нз1 см ), содержащего (на 10 мл) 2 мл воды,30 5 мл формзмида, 1 мл 10%-ного додецилсульфзта натрия 1 ДСН), 2 мл 59%-ного декстрансульфэта, 0,5 мл 1 М трис-НС 1, рН 7,5,и 0,58 г Г 1 ЭС 1. Инкубирчат 10 мин при 42 ОС.Затем добавляют 120 мкг (из расчета35 40 мкг/мл) ДНК спермы лосося и 0,6 мкгбио.ги нилированной ДН К из расчета0,2 мкг/мл), которые и редварител ьн о денатурируот 10 мин при 100 С. Гибридизацию ведут при 42 С в течение 16 ч при40 постоянном перемешивании, По окончаниигибридизации фильтры отмывают два разапо 5 мин раствором 3 мл), содержащим0,3 М...

Номер патента: 1645302

Опубликовано: 30.04.1991

Авторы: Ананенко, Бобков, Вельтищев, Видута, Гараев, Франк-Каменецкая

МПК: C12N 15/38, C12Q 1/68

Метки: вируса, вирусспецифических, герпеса, дифференциальной, индикации, нуклеотидных, последовательностей, простого, типа

...1, 2 сайта Ндпд 111, 3 сайта В 81 11. В составе рСН 2014 присутствуют последовательности 1, К В 81 11, гг 0 ЕсоК 1, 1, К Н 1 пб 111 фрагментов ДНК ВПГ 2. Эти участки генбма кодируют поверхностные гликопротеиды ВПГ 2 р и р (участок 0,892-0,950) и являются наименее консервативными в отношении перекрестной гибридизации. Выбор этой конструкции в качестве типоспецифичного зонда обусловлен тем, что участок генома ВПГ 2 в области 0,892-0,950 единиц карты имеет наименьшую гомологию с ДНК ВггГ 1.П р и и е р 1. На каждый из нитроцеллюпоэных Фильтров в количестве 9 штук наносят серию пятен ДНК, ВИГ 1 (штамм Ф,) в количестве от 10" до 10 мкг ДНК в пятне, предварительно денатурированную нагреванием в течение 15 мин на кипящей водяной бане,ДНК...

Номер патента: 1659487

Опубликовано: 30.06.1991

Авторы: Домарадский, Дроздов, Злобин, Мельников

МПК: C12Q 1/68

Метки: гомологичных, нуклеотидных, обнаружения, последовательностей

...анти-АААФ-ДН К иммуноглобулинами растворяют в 1 мл физиологического раствора и диализуют в течение 48 ч при 4 С против физиологического раствора, Добавляют глицерин до 500-ной концентрации. Срок годности препарата не менее 1 года при температуре 5 +3 С,Полученный коньюгат пероксидазы с анти-АААФ-ДНК иммуноглобулинами используют для выявления АААФ-ДНК. На нитроцеллюлозный фильтр наносят в виде отдельных точек по 10 мкл растворов АААФДНК с концентрациями 10 мкг/мл, 1 мкг/мл, 100 мг/мл, 10 нг/мл, 1 нг/мл, 100 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 пг/мл и по 10 мкл растворов контрольной немадифицираванной ДНК (из тимуса теленка) в тех же концентрациях. Фильтр с ДНК высушивают на воздухе в течение 30 мин, Препарат конъюгата пероксидазы с анти-...

Номер патента: 1659488

Опубликовано: 30.06.1991

Авторы: Захаров, Сулимова, Шайхаев, Шевченко

МПК: C12Q 1/68

Метки: вариантов, генетический, животных, каппа-казеина, сельскохозяйственных

...ЯЦР, основанной на свойстве термофильной ДН К-полимеразы сохранять ферментативную активность после прогревания до 95 - 97 С, синтезируют два праймера химическим способом следующей структуры: Ы Е 23 5-ТАТСАТТТАТООСАТТООАССА и ЯОО 243-ТТОАОАТТССТСТОТАОТТТОТТС, комплементарных противоположным цепям ДНК и фланкирующих участок ДНК гена каппа-каэеина в районе 5-го экзона. Для амплификации составляют инкубационную смесь состава; 100 мкл инкубационной смеси содержат 10 мМ трис-НС, рН 8,4; 2,5 мМ МдС 2; 50 мМ КС, 200 мкг/мл бычьего сывороточного альбумина, четыре бчТР по 200 мкМ каждого, два праймера, ЯОЕ 23 и ЯОО 24, по 0,3 мкг каждого и 0,5 - 1,0 мкг хромосомной ДНК животного из клеток крови. Денатурацию ДНК проводят при 95- 97 С в...

Номер патента: 1664846

Опубликовано: 23.07.1991

Авторы: Бойко, Сиволап

МПК: C12Q 1/68

Метки: гомеостатичности, форм, ярового, ячменя

...получения зерен молочно-восковой спелости, выделяют из них тотальную ДНК, которую разрезают рестриктазой Вагп Н. Фрагменты ДНК фракционируют с помощью электрофореза в агарозном геле, переносят на нитроцеллюлозные фильтры . Эти фильтры с иммобилизованными на них1664846 Хп х-хг хг- 1,7 + 0,2 - 0,5 - 0,5 - 0,4 +1,5 - 0,8 - 0,4 + 0,4 - 0,1 + 1,5 10,2 7,0 4,4 5,4 9,2 2,1 10,2 13,1 2,0 1 1,9 23,7 8,5 7,2 3,9 4,9 8,8 3,6 9,4 12,7 2,4 1 1,8 25,2 9,9 8,8 7,8 7,1 6,0 5;5 4,8 4,0 3,4 3,0 2,0 - 1,7 Южный гомеостатичный Донецкий - 4 гомеостатичный+ 2,5 + 3,1 15,18,8 12,6 5,7 9,9 8,8 фрагментами ДНК гибридизируют с меченым фрагментом рДНК, который представляет собой последовательность размером 4,1 т.п,н., включающую часть 255 - 185 блат-гибридизация...

Номер патента: 1669981

Опубликовано: 15.08.1991

Авторы: Мишанкин, Павлович, Романова

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: coli, francisella, бактерий, днк, еsснеriснiа, зонда, источник, плазмидная, плазмидную, представителей, рrд, рекомбинантная, рекомбинантную, рода, содержащий, тестирован, тестирования, штамм

...смеси трансформируют штамм Е,со 1 М 103,Выбор штамма обусловлен тем, что вприсутствии рО С 19 он способен синтезировать фермент /3-галактоэидаэу эа счет комплементации дефектного хромосомальногогена Й-концевым фрагментом гена, находящегося на плазмиде, Эта способность штаммане проявляется в присутствии рекомбинант 5 ной плаэмиды со встроенным по ЕсоВ 1 сайтуфрагментом ДНК, длина которого не кратнатрем, вследствие сдвига рамки считывания,В-галактозидаэы. Клоны с такими рекомбинантными плазмидами, не обладающие /310 галактозидаэной активностью, могут бытьотобраны на индикаторной среде с хромогенным субстратом Х-ца по отсутствию голубой окраски,Клетки культуры Е,со 11 М 103, транс 15 формированные лигазной смесью, высеивают на чашки с...

Номер патента: 1678837

Опубликовано: 23.09.1991

Авторы: Злобин, Плетнев, Шаманин

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: выделения, зонд, идентификации, кислот, нуклеиновых, флавивирусов, фрагмент

...6000 об/мин, Осадок растворяют вбуфере 7,5 Ф формальдегид - 1 О мй натрий фосфат, рН 7,0, и определяютконцентрацию РНК спектрофотометрически, принимая 1 о.е. Аь= 40 мкг РНК,Иммобилизация РНК на нитроцеллюлозных фильтрах. РНК денатурируютпрогревом в 7,5 ь-ном растворе формальдегида 15 мин при 56 фС, затемдобавляют раствор 20ЯЯС (3,0 Инатрий хлорид - 0,3 М натрий цитрат,рН 7,0) го концентрации 1 ОЯЯС и образцы РНК наносят на нитроцеллюлозные Фильтры. Фильтры сушат при комнатнсй температуре 15-30 мин, а затем в вакуумном сушильном шкафу 2 чпри 80 фС.Мечение олигонуклеотидов. Олигонуклеотиды метят с помощью полинуклеотидкиназы Т 4 (13) в присутствии= зР-АТР (1000 Ки/ммоль) до удельной активности 500-1000...

Номер патента: 1678838

Опубликовано: 23.09.1991

Авторы: Домарадский, Дроздов, Мельников

МПК: C12Q 1/68

Метки: выявления, нуклеотидных, последовательностей

...на носителе составляет 5,5 - 15,5 чПо 0,2 мл растворов овальбумина с концентрацией 1 мг/мл в ТЭН-буфере и ДНК тимуса теленка с концентрацией 1 мг/мл вГЭН-буфере подвергают такой же физико- химической обработке предлагаемым способом, как и бактериальные клетки.Полученные препараты используют в качестае контрольных.На нитроцеллюлозный фильтр наносят в виде отдельных точек по 0,01 мл растворов сульфированных нуклеотидных последовательностей из бактериальных клеток и контрольных препаратов ДН К тимуса теленка и овальбумина, Фильтр высушивают на воздухе в течение 30 мин,Для выявления маркированного исследуемого материала и контрольных препаратов используют иммуноферментный метод, Фильтр помещают в 10 мл раствора для блокировки, содержащего...

Номер патента: 1700004

Опубликовано: 23.12.1991

Авторы: Ажикина, Бородин, Данилкович, Ростапшов, Чернов

МПК: C07H 21/04, C12Q 1/68

Метки: днк, качестве, методу, олигодезоксирибонуклеотид, первичной, праймера, сенгера, структуры, универсального

...ч/ч, 0,5 мл, 0,5 мин); окисление - 1 о -ный раствор йода в смеси уксусной кислоты с пиридином (1/9, ч/ч, 0,7 мл, 0,5 мин). После окончания синтеза проводят удаление защитных групп. Сначала удаляется диметокситритильная группа обработкой 0,2 М раствором трифтороуксусной кислоты в дихлорэтане непосредственно в реакционной колонке. Затем полимер обрабатывают смесью тиофе 5 -б(6 Т А А А А С 0 А С 0 О С С А 6 Т)-3 (2) 40проводят в растворе общим объемом 5 мкл, содзержащем 2 - 3 пМ праймера, 3 пМ(а- Р-АТР (уд, активность 3000Ки/мМ), 50 мМ трис-НС (рН 8,3), 35 мМ МдС 2 и 0,1 - 1 ед, активности полинуклеотидкиназы (37 С, 30 ми н.), После добавления 7 мкл (2 мкг) фага М 13 гпр 10 с клонированным фрагментом - интерферона быка и 1 мкл...

Номер патента: 1712419

Опубликовано: 15.02.1992

Авторы: Калиновский, Леванова, Новиков, Федоров, Хансон, Яцук

МПК: C12Q 1/68

Метки: генетической, дактилоскопии

...260 нм.ность ЦЦГГ и не расщепляет ее, если 30 Венозную кровь(20 - 30 мл) больных нанаружный цитозин метилирован. Метилиро- сыщают гепарином (20 ед/мл), разбавляют вание цитозиновых оснований (Ц) на 5 -м 1/10 объема физиологическим раствором ио фланке протоонкогена НА-ВАЯ 1 имеет при- центрифугируют при 10009 10 мин при 4 С, , знаки индивидуальной специфичности и не Плазму удаляют, а лейкоцитарную пленкузависит от тканевой принадлежности кле используют для выделения ДНК по описанток. Кроме того, метильные группы у наруж- ной методике.ного цитозина в последовательностях ЦЦГГ К 10 мкгДНКприбавляют 50 едэндонукпротоонкогена НА-ВАЯ 1, которая сохраня- леазы рестрикции Мзр 1 и рестрикционный ется даже в ДНК злокачественных опухолей "...

Номер патента: 1738856

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Артюшин, Бортюк, Коромыслов, Косенко, Овдиенко, Фомин

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: видов, воvis, дифференциации, днк, других, зонд, мuсовастеriuм, микобактерий, плазмидная, рекомбинантная, рмб-01, тuвеrсulоsis

...как описано в примере 1,Результаты исследований приведенына фиг, 2. Кэк видно из представленных данных, положительные сигналы, свидетельствующие о гибридизации клонированкойпоследовательности с ДНК микобактерий,отмечены в местах нанесения М. Ьочз (точки А 1 и А 2), М, Ьоч 1 з ВСО (точки С 1-С 4). Приэтом не отмечалось положительных сигналов в точках нанесения ДНК микобактерийдругих видов.Полученные данные свидетельствуют, оспецифичности используемого зонда по отношению к ДНК М. Ьог 1 з.П р и м е р 3. Использование выделенного фрагмента ДНК М. Ьоч 1 з ВСО для дифференциации культур М. Ьоч 1 з, М. 1 цЬегсц 1 оз 1 з от культур микобактерий других видов,Для приготовления препаратов культурмикобактерий культуры микобактерий (39 .5...

Номер патента: 1752773

Опубликовано: 07.08.1992

Авторы: Веньяминова, Зарытова, Иванова, Репкова

МПК: C07H 21/04, C12Q 1/68

Метки: кислот, расщепления, рибонуклеиновых

...является повышение специфичности за счет обеспечения единичного разрыва РН К в заданном месте.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу расщепления рибонуклеиновых кислот путем инкубации рибонуклеиновой кислоты с основным пептидом в качестве основного пептида используют пептид (Ееи - Аг 9)з - 61 у (й), ковалентно связанный с 5-концом олигонуклеотида или его1производного, комплементарного участку(54) СПОСОБ РАСЩЕЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ(57) Использование: для изучения функций РНК, создания противовирусных препаратов, Сущность изобретения: гидролиз РНКс помощью пептида - (Ееа - Аг 9)з - (3 у (Й), ковалентно связанного с олигонуклеотидом, комплементарным участку РНК, прилежащему к сайту расщепления В = -ЙН 2 или...

Номер патента: 1761808

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Абрамов, Галев, Гузаев, Завьялов, Смирнов, Чернов

МПК: C12N 15/48, C12P 19/34, C12Q 1/68 ...

Метки: белка, вируса, днк, др120, иммунодефицита, кодирующий, лимфоцитов, ответственную, поверхностного, протеином, связывание, сд4т, фрагмент, часть, человека

...65 с. В качестве мономеров используют ч-ацил-О-диметокситритип-О-цианоэтил)- й,ч-диизопропиламидофосфит)-2 -дезокси 1761808рибонуклеозиды. причем если рибонуклеозид = аденозин или цитидин, то ацил = бензоил, если рибонуклеозид = гуанозин, то ацил = изобутирил, если рибонуклеозид = тимидин, то ацил отсутствует, В качестве активатора межнуклеотидной концентрации используют тетразол, детритилирующего агента 20 -ный раствор трихлоруксусной кислоты в дихлорметане, окислителя 0,1 М раствор иода в смеси пиридин-вода-тетрагидрофуран 2:20:75, кэпирующих реагентов: равные обьемы реагента И (уксусный ангидрид,6-лутидин-тет рагидрофуран 10:10;80) и реагента В (1-метилимидазол-тетрагидрофуран 16:84), растворителя для промывки и конденсации -...

Номер патента: 1771485

Опубликовано: 23.10.1992

Авторы: Даниляк, Решетников, Федоров

МПК: C12Q 1/02, C12Q 1/06, C12Q 1/34 ...

Метки: гомобазидиальных, грибов, идентификации, штаммов

...спорой в чашку Петри со свежей сусло-агаровой средой. На одну чашку помещают около десяти выделенных спор. Выросшие колонии микроскопируют и те, которые не имеют пряжек, отсевают на скошенный агар в пробирки. Отбор комплементарных гаплонтов проводят на сусло-агаровой среде в чашках Петри, размещал тестируемые пары гаплонтов на расстоянии 2 см друг от друга, В случае мицелиального контакта двух колоний через 7 - 10 сут микроскопируют мицелий, образующийся в зоне контакта, и при наличии пряжек отмечают такие кроссы как положительные (табл, 1).Выявленные группы гаплонтов противоположного типа спаривания маркируют (произвольно) как группу с А 1 и А 2 фактором тест-культурой для сконструированного дикариона. Например, для дикариона,...

Номер патента: 1788970

Опубликовано: 15.01.1993

Автор: Алек

МПК: C12Q 1/68

Метки: генетических, использования, исследованиях, полинуклеотида

...повторяющихся блоков в предпочтительном варианте должно быть не ме-нее 5, в еще более предпочтйтельномварианте неменее 10, В общем случае, изменяется в области от 10 до 40, но, в прин-ципе, может быть" произвольным чйслом,"даже в области 1 - 10000.В предпочтительномварианте полинуклеотиды и полйнуклеотидные зонды содержат любую последовательность, выбраннуюиз формул с 3 по 9, приведенных выше.Изобретение позволяет идентифицировать информатйвную генетическую областьв человеческомгеноме и йриэтом" позволяетполучить зонды, специфические относительно ой ределенн ых областей, причемкаждый зонд, специфичный, относительно определенной информативной геномной 5 области. Была осуществлена, в частности,идентификация шести различных...

Номер патента: 1792429

Опубликовано: 30.01.1993

Авторы: Ворсанова, Юров, Яковлев

МПК: C12Q 1/68

Метки: 1-ой, ri-7, альфа, днк, маркирования, плазмидная, предназначенная, рекомбинантная, хромосомы, человека

...инкубацию 5 минут. Клизатудобавляют 1,5 мл 3 М ацетата натрия,осторожно перемешивают раствор и оставляют на час при 0 С. Образующийся осадок 55удаляют центрифугирова нием(1200 об/мин,),нуклеиновые кислоты из супернатантаосаждают 2,5 объемами этилового спирта(.18 С, 30 мин.), Осадок растворяют а 1 мл50 мМ трис-НО (рН 8,0) + ),1 М ацетата натрия и переосаждают этанолом. Процедуру переосаждения повторяют дважды, конечный осадок после аысушивания растворяют в 100 мкл ТЕ,Эндонуклеазную обработку ДНК человека и бактериальных плазмид проводят в буфере ВЕВ, содержащем 10 мМ трис-НС рН,4), 10 мМ М 9 О, 10 мМ йаС и 1 мМ дитиотреитола (РТТ). Полный эндонуклеазный гидролиз ДНК получается при относительной концентрации рестриктаз 5 - 8 ед/мкг ДНК...

Номер патента: 1792972

Опубликовано: 07.02.1993

Авторы: Евграфов, Поляков

МПК: C12Q 1/68

Метки: амплификации, днк, известной, неизвестной, некотором, последовательности, расположенного, расстоянии, фрагмента

...полимеразнойреакции, является значительно более деше-вым, простым и не требует дорогостоящегсоборудования,П р и м е р. Для проверки заявленного30 способа мы применили его к 5 концевойобласти гена дистрофина человека, последовательность которой была известна (рис.3).Были синтезированы олигонуклеиодит 35 ные праймеры следующей последовательности ДНК;первый 5 АТАТААО ОТТО ТО СТТССАС САТААСААО,второй - 5- 40 ОТО СО САООТССТООААТТТОАААТАТССОПри этом первый праймер мог гибридизоваться с участком ДНК между сдйтом рестрикции В 2 рестриктазы Мсо(сайт 749) и сайтом рестрикции Я 1 рестриктазы ЕсоВ45 (сайт 701) в нативной ДНК до обработкирестриктазами, и мог обеспечивать синтез ДНК в йаправлении сайтов рестрикции В 1 рестриктазы ЕсоВ (сайты 701 и...

Номер патента: 1794088

Опубликовано: 07.02.1993

Авторы: Ершов, Иванов, Лысов, Мирзабеков, Флорентьев, Хорлин, Храпко

МПК: C12N 15/00, C12Q 1/68

Метки: днк, нуклеотидной, последовательности

...ССАОТ)5 -б(ОТААААСОАСО ОО ССАОТ)с иммобилизованными в геле олигонуклео 55 тидами (длиной 7, 8, 9, 12 и 15 мономерныхзвеньев), полностью или частично комплементарными различным участкам гептадекамеров,Меченный фрагмент ДНК (0,1 мкКи, 30фмоль).в 1 мкл буфера гибридизации (1 Мчисло 7-, 8-, 9-, 12- и 15-членников, полностью или частично комплементарных праймеру М 13. а также дуплексов, содержащих другие типы мисматчей. Даннце по отмывкедуплексов гептадекадезоксинуклеотидов с иммобилизовэнными октадезоксинуклеотидами приведены в таблице.Как видно из фиг.З и таблицы, почтивсегда существует такая температура, прикоторой отношение гибридизационных сигналов полностью комплементарного и соответствующего дефектного дуплексадостаточно...

Номер патента: 1797625

Опубликовано: 23.02.1993

Авторы: Сиволап, Спозито

МПК: C12Q 1/68

Метки: annuus, клетках, неliаnтнus, обнаружения, ретiоlаris, цитоплазмы

...5 г БСА, 500 мл Н 20) в течение 1-6часов при 640 С. Для гибридизации фильтринкубировали в минимальном объеме тогоже раствора с 3-5 х 10 имп/мин зонда в6течение ночи при 64 С. Отмывку после гибридизации проводили в 4-5.сменах0,2 хЯЯС, 0,5 ЯОЗ с последующим экспонированием фильтра на рентгеновской пленкев течение 16-72 часов и проявлением. Исходным материалом для получения зонда послужила плазмидоподобная ДНК названная Р 1 Т-плазмидой, выделенная из митохондрий, Н.аппцоз, линия Од, Плазмиду разрезали по сайту Зао ЗА и лигировали по Вагп Н 1 сайту с плаэмидой рцС 18.Клетки культуры ИМтрансформировали продуктами рестрикции лигирования. Селекцию клонов вели на 1 В-среде с ампициллином в присутствии ха и рай. Рекомбинатнуа плазмиду...

Номер патента: 1807081

Опубликовано: 07.04.1993

Авторы: Власов, Вуцан, Монахова, Седых

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: pes78vcs, pes78vcs-источник, бактерий, вибрионов, днк, еsснеriснiа, зонда, идентификации, плазмидная, плазмидной, продуцент, рекомбинантная, рекомбинантной, холерных, штамм

...отбирали по признакуАр Тес,Из 12 различных по размерам встроенных фрагментов ДНК вибриона рекомби 40 нантных плазмид (случайная выборка) спомощью эндонуклеазы Нпб В были получены соответствующие фрагменты и испытаны на видоспецифичность в качествемолекулярных зондов, Радиоактивную мет 45 ку (32 Р-АТР или 32 Р-СТРг. Ташкент, межреспубликанское объединение В/О"Изотоп") вводили с помощью ник-трансляции,Гибридизацию проводили на нитроцел 50 люлозных фильтрах после получения на нихотпечатков колоний Ч.стоегае 01 ине 01(150 штаммов), и 12 других видов рода Ч 1 Ьг 1 о(всего 37 штаммов), а также шигелл, сальмонелл, аэромонад, алломонад, псевдомонэд55 и Е,соИ (всего 25 штаммов) и их соответствующей обработки с использованием модифицированного...

Номер патента: 1838419

Опубликовано: 30.08.1993

Автор: Вилльям

МПК: C12Q 1/68

Метки: биохимических, вирусных, заболеваниях, нарушений, онкологических, рнк-азе

...у которых водородные связи между нитями являются относительно интактными, т.е, прерываются в среднем не менее чем на одной паре оснований в каждых 29 последовательных остатках оснований, Термин "неспаренная сз РНК" следует понимать соответственно. бз РНК могут быть комплексом полиинозинэта и полицитидилата, содержащим некоторое количество оснований урацила или гуанидина, например, от 1-5 до 1 в 30 таких оснований (поли 1 поли (С 4-29 хИ или 6), АльтЕрнативнО, СООтвЕтетвующие олигонуклеотиды (маленькие фрагменты нуклеотида) могут быть комплексно связаны с соответствующими комплементарными полинуклеотидами или олигонуклеотидами в определенных условиях,с 1 з РНК могут быть поли 1 поли С, О, в которых отношение С к О составляет примерно...

Номер патента: 2000331

Опубликовано: 07.09.1993

Авторы: Алимов, Фаизов, Хазипов, Шилова

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: выявления, микобактерий

..."Регк 1 пЕп 1 ег" определяли концентрацию выделенных ДНК,2. Фрагментация видов микобактерий рестриктазой Есо 91,1, дающей широкий спектр гибридиэирующих полос, электрофорез и блоттинг.Очищенный от белков ДНК микобактерий в количестве 5 мкг переносили в пробирки эпиндофора. Туда же добавляли до 18 мкл бидистиллированной воды, 2 мкл 10 х буфера рестрикции (50 мМ йаС 1, 10 мМ трисНС 1, рН 7,5, 10 мМ МоС 2, 5 мМ 2-меркаптоэтанол) и осторожно перемешивали. Затем вносили 3 мкл рестриктаэы Есо 91 1, перемешивали и помещали на 3 ч в термостат при температуре 37 С. Реакцию останавли 2000331вали добавлением ЭДТА до конечной концентрации 10 мМ.Полученные Фрагменты ДНК подвергали электрофорезу в горизонтальном блоке0,8-ного агарозного...

Номер патента: 1640995

Опубликовано: 30.12.1993

Авторы: Адаричев, Дымшиц, Калачиков, Салганик

МПК: C07H 21/00, C12Q 1/68

Метки: гибридизации, дезоксирибонуклеиновых, кислот

...и сравнивают соптической плотностью калибровочного авторадиографа, по которому определяют количество сгибридиэовавшейся15 радиоактивно меченной ДНК.Чувствительность способа, т,е. минимальное количество специфической ДНК,определяемой в образце данным способом,составляет 0,1 - 0.5 пг ДНК мишени при ис 20 пользовании ДНК зондов, меченых до удельной активности 5 х 10 - 10 имп/мкг мин,9Таким образом, данное изобретение позволяет повысить эффективность .способагибридизации деэоксирибонуклеиновых25 кислот, а кроме того, использование в качестве гибридизационных фильтров микропористых капроновых мембран производствазавода "Химфил" р/к "Хийу Калур" позволяет расширить ассортимент микропористых30 мембран, которые могут быть...