C12N 9/14 — гидролазы (3.)

Номер патента: 1307850

Опубликовано: 30.01.1988

Авторы: Аваева, Байков, Кашо, Кулинич

МПК: C12N 9/14

Метки: еsнеriснiа, неорганической, пирофосфатазы

...13,1 1280 7,6 1270 11,8 1330 80 2 62 83 2 88 2 93 2 80 10 45 П р и м е р, Суспензию 2 кг биомассы ЕясЬег 1 с 1 п.а со.1 (нтамм МРЕ) в 6 л 0,05 М буфера трис-НС 1(рН 7,2), содержащего 10 мМ МОСХ они отделяются от 1,6-диаминогексилагарозы при концентрации ИаС 1, не достаточной для элюции неорганической пирофосфатазы. Последняя отделяется при концентрации ИаС 1 около 0,5 М, что редко встречается в ирактиже хроматографирования белков на этом сорбенте.То, что неорганическая пирофосфатаза ЕясЬегс 1 п.а со 11 лучше выдерживает нагревание при повышенной температуре в течение короткого времени чем посторонние белки и имеет высокое сродство к 1,6-диаминогексилагарозе, ранее не было известно и немогло быть предсказано на основании имевшихся...

Номер патента: 1442546

Опубликовано: 07.12.1988

Авторы: Дегтярев, Жилкина, Репин

МПК: C12N 15/00, C12N 9/14

Метки: cgtagn, gcatcn, нуклеотидов, последовательность, расщеплять, рестриктазы, способной, узнавать

...проводят при 4 С, Биомассу ресуспендируют в буфере А (0,05 М трис-НС 1, рН 75; 5,4 10 М ЭДТА, О, 1 М 2-меркаптоэтанол, 0,2 Х ИР) в соотношении 6 г биомассы на 20 мл буфера. Разрушают ультразвуком в ультразвуковом дезинтеграторе МБЕ три раза по 40 с на частоте 20 кГц, амплитуда 12 мкм, Осаждают клеточные остатки при 16 тыс, об/мин в течение 30 мин, Осветленный супернатант наносят на колонку с фосфоцеллюлозой Р, предварительно уравновешенную буфером В (0,02 М КНРО, рН 7,5; 5,4 10 М ЭДТА, 0,1 М 2-меркаптоэтанол), колонку промывают этим же буфером, объем которого равняется двум объемам смолы. Сорбированный на Фосфоцеллюлозе белок смывают 1 М ИаС 1 в буфере, собранный белок диализуют 3 ч против 3 л буфера и.наносят на колонку с...

Номер патента: 1449579

Опубликовано: 07.01.1989

Авторы: Божко, Бойков, Виестуре, Репин, Хейслере

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: luтеus, аrтнrовастеr, выращивания, питательная, продуцента, рестриктазы, среда

...10 мМ 2-меркаптоэтанол, 1 мМ аэид натрия, 1 мМ трилон Б (буфер А) и доводят этим же буфером до объема 150 мл. К суспензии добавляют 1,5 мл 107-ного тритона Хи 150 мг ливоцима. Лизис проводят 1 ч при постоянном перемешивании, Дальнейшее фракционирование лизата проводят в системе двухфазного разделения.Полученный лиэат добавляют к смеси, состоящей из 37,0 мл 152-ного водного раствора декстрана Т, 56 мл ЗОБ-ного ,водного раствора полиэтиленгликоля и 35 мл 4,0 М хлористого натрия (рН смеси 6,5). Тщательно перемешивают в течение 15 мин и центрифугируют на центрифуге "НхдЬ зреес 1" (20000 х я, 20 мин). Верхнюю ПЭГ-фазу объемом 120 мл, содержащую фермент, отбирают, разбавляют двукратным объемом буфера А, добавляют тритон Х(О, 1 Е) и...

Номер патента: 1449582

Опубликовано: 07.01.1989

Авторы: Божко, Бойков, Дегтярев, Репин, Хейслере

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...1.Выход рестриктазы А 1 ц 1 50000 ед//10 мл активность 5000 ед/мл, выход5000 ед/г биомассы.П р и м е р 5. Суспендированиебиомассы проводят аналогично примеру 1. К 30 мл суспензии добавляют 5 мл 9%-ного раствора яичного масла в толуоле, Отношение яичного маслак толуолу 1,0: 10,0. Дезинтеграцию клеток и последующее выделение рестриктаэы А 1 ц 1 проводят аналогично примеру 1,Выход рестриктаэы А 1 ц 1 55000 ед//10 мл, активность 5500 ед/мл, выход 5500 ед/г биомассы.П р и м е р 6, 10 г .биомассы Ат"спгоЬасйег 1 цецз ВКПМ Вразмораживают и суспендируют в 20 мл ра1449582 5О 15 20 25 30 35 40 45 50 бочего буфера (трис"НС 1 ,0,0 М, рН 7,2-7,6; 2-меркаптоэтанол 0,0 М). К 30 мл суспензии добавляют 5 мл концентрированного толуола, Во...

Номер патента: 1477742

Опубликовано: 07.05.1989

Авторы: Гребеньков, Жбанова, Лещинская, Муравьева, Папукова, Пономарева, Филимонова

МПК: C12N 9/14

Метки: serratia, выделения, жидкости, культуральной, маrсеsсеns, эндонуклеазы

...о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и сокращения длительности процесса, ионообменнрй хроматографии подвергают непосредственно культуральную жидкость, а ионообменную хроматографию проводят на катионообменнике Биокарб Дс сорбцией целевого продукта при рН 5,0-5,5 и десорбцией в буфере при рН 8,0-8,5 в присутствии 0,35- 0,40 М хлористого натрия.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что для десорбции в качестве буфера используют 0,1 М трис-НСТ. Составитель А. СеменовРедактор А. Гунько Техред А.Кравчук Корректор Э.Лончакова Заказ 2316/25 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат...

Номер патента: 1502616

Опубликовано: 23.08.1989

Авторы: Бойков, Репин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: providencia, sтuаrтii, бактерий, культивирования, питательная, продуцента, рестриктазы, рсть, среда

...фермента, которое требуетсядля полного расщепления 1 мкг ДНКо,фагав течение 1 ч при 37 С,Выделение фермента проводят следующим образом,50 г биомассы бактерий суспендируют в 100 мл 10 мМ трис-НС 1, буфера, рН 7,2, содержащем 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 1 мМ азид натрия, 1 мМтрилона Б (буфер А) и доводят этимже буфером до объема 150 мл. К суспензии добавляют 1,5 мл 10%-ного45,0 1,5 тритона Хи 150 мг лизоцима,Лизис проводятч при постоянномперемешивании, Дальнейшее фракционирование лизата проводят в системедвухфазного разделения.Полученный лизат добавляют к смеси, состоящем иэ 37,0 мл 15%-ноговодного раствора декстрана Т,56 мл 30%-ного водного раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ) и 35 мл 4,0 Мхлористого натрия (рН смеси 6,5).Тщательно...

Номер патента: 1518372

Опубликовано: 30.10.1989

Авторы: Дегтярев, Иванова, Рассказов, Репин, Речкунова, Шевченко

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: 21-продуцент, bacillus, rse21, species, бактерий, сайт, специфической, штамм, эндонуклеазы

...маслом,ов растворе глицерина - при -70 Г ив лиофильно высушенном состоянии,Физиологические признаки,Хемоорганотроф. Каталазоположи"тельный, оксидазоотрицательный. утилизирует лактозу, сахарову, мальтоэу,арабинозу, глюкозу, галактозу, маннит. Не утилизирует раннозу, ксилоэу,дульцит сорбит, Реакция Фогео-Проска 35уэра отрицательная, Разжижает желати-.ну и крахмал.Для культивирования Васд 11 цзврес 1 ез 21 Вприменяют питательную среду следующего состава, г/лдистиллированной воды:ГидролизаткилькиИаС 1Вода дистиллированная ОстальноеоКультивирование проводят при 30 Ги интенсивной аэрации до достижениястационарной фазы роста.Выход биомассы: 2,0-3,0 г сыройбиомассы с 1 л питательной среды.Выход целевого фермента: 3000 ед/гбиомассы с...

Номер патента: 1528790

Опубликовано: 15.12.1989

Авторы: Агафонов, Коровкин, Корякина, Огорельцев, Рябова, Симонова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, suвтilis, бактерий, культивирования

...двузамещенный 0,8Калий хлористый 0,1Гидрат окиси аммония 0,8Кислота ортофосфорная 0,130Пеногаситель синтетическийАмилаэа бактериальная (60 ед/г) 0,05Вода ОстальноеВ колбы емкостью 750 мл вносят по 50 мл среды, засевают штаммом Бас 111 цв виЬТ 11 в ВКПМ Ви инкубируют в течение 72 ч при 37+1 С.ослеч культивирования протео литическая активность культуральной жидкости составляет 7,2 ед/мл.Параллельно культивируют тот же штамм на среде того же состава, но не сОдержащей измельченных куриных 45 эмбрионов, После завершения культивирования протеолитическая активность составляет 5,3 ед/мл.П р и м е р 2. Готовят питательную сРеду следующего состава, мас.4:Крахмал картофельный 22,0Экстракт кукурузный 0,78Измельченные куриныеэмбрионы -...

Номер патента: 1532583

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Галимбаева, Дегтярев, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/14

Метки: dеniтrifiсаns-продуцент, paracoccus, бактерий, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...узнает и специфическ расщепляет последовательность нукле 0тидов ССМСС; оптимальное значение рНя действия рестриктазы 7,5-9,0;птимальная температура действия 37 С;я активности рестриктазы требуютсяОны МО Оптимальная концентрация-15 мМ.Для культивирования Раг.реп В рименяют питательную среду следуюего состава, г/л дистиллированной воы; триптон 10, дрожжевой экстракт 40соКультивирование проводят при 30 С( хорошей аэрацией в течение 2 сут.1 ыход биомассы 2-3 г/л культуральнойжидкости. Выход рестриктазы Рйе 12 1: 45:000 ед/г биомассы. П р и м е р , Клетки Раг. Йеп., :ранящиеся в 50 .-ном глицерине в Ь- бульоне при-20 С высевают на чаш- У с 1. А. После 2 сут инкубирования50 1 ри 30 С клетки собирают петлей и носят в 100 мл В и выращивают до...

Номер патента: 1532584

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Галимбаева, Дегтярев, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/14

Метки: iммотuм, бактерий, вrеviвастеriuм, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Натана и Смита,Штамм также содержит рестриктазу ш 11, которая является изошизомеом Взр В. Т.Ферменты Вып 1 и Впп 11 хорошо тделяются друг от друга при хроатографии на фосфоцеллюлозе Р, то позволяет получить препараты бонх ферментов без взаимных примеей.Сравнение электрофоретической одвижности фрагментов, получаемых ри гидролизе ДНК фага Ь рестриктазой 40 ып 1 с электрофоретической подвижностью фрагментов известной длины ,(Игц 1 гидролизат ДНК фага ) позволяет определить длину фрагментов Мв 1 гидролизата. Получаемый набор врагментов совпадает с набором фрагМентов, соответствующим гидролизу ДНК фагапо последовательности ТТССАА.Таким образом, фермент Вш 1 , узнает и гидролизует пбследователь,ность нуклеотидов ТТССАА и являетсяизошизомером...

Номер патента: 1544802

Опубликовано: 23.02.1990

Авторы: Азизбекян, Нетыкса, Ребентиш

МПК: C12N 9/14, C12N 9/22

Метки: bacillus, бактерий, изошизомера, продуцент, рестриктазы, тнuringiеnsis, штамм

...действия рестриктазыо37-40 С, для активности фермента требуются ионы Мр (5-10 мМ). Ферментактивизируется небольшими концентрациями ИаС 1 (25-50 мМ), За единицу ак.;ивности принимается количество Фермента, вызывающее полное расщепление1 мкг ДНК бага лямбда за 1 ч инкубации при 37 дС. Состав буфера: 1 О мМ трис-НС 1, 50 мМ ИаС 1, 10 мМ МЕС 1 10 мМ 2-МЭ, рН 7,5. Для определения последовательности нуклеотидов, узнаваемых рестриктазой Вц, проводили гидролиз ею ДНК различного происхождения, для которой известна нуклеотидная последовательность: бактериофага лямбда ( Ъ ), ф Х 174 РФ, М 13, вируса БЧ 40, плазмиды РВР 322., Расщепление ДНК проводят в реакционной среде следующего состава: 10 мМ трисНС 1 (рН 7,5) б мМ 2-мерпатоэтанола, 6...

Номер патента: 1546485

Опубликовано: 28.02.1990

Автор: Лебенка

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...для электрофореза, источник питания УИП, ультрафиолетовый осветитель.ДНК рВВ 322 выделена по известнойметодике.ФФормула и з о б р е т е н и яСпссоб получения рестриктазы СГц 1, предусматривающий культивирование продуцирующего микроорганизмаСаы 1 оЬасгег ГцзЫогппз ВКПМ Вна пи" тательной среде, содержащей пептон, дрожжевой экстракт, воду и сульфат магния, с последующим разрушением клеток ультразвуком и очисткой Фермента путем хроматографии, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения процесса очистки и повышения выхода целевого продукта, хроматографию ведут на колонке фосфоцеллюлозы с элюцией градиентом хлористого натрия от 0,1 до 1,0 М и затем на системе колонок ДЭАЭ-сефацел-гепарин-сефарозы с нанесением образца при...

Номер патента: 1576563

Опубликовано: 07.07.1990

Авторы: Дайлиденайте, Лакачаускене, Марцишаускас, Песлякас, Суджювене

МПК: C12N 9/14

Метки: фосфатазы, щелочной

...буфером.При этом фосфатаза не сорбируется и выходит острым пиком, а нуклеазные примеси сорбируются и могут быть элюированы при повышении ионной силы до 1 М КС 1. Фракции щелочной фосАатазы объединяют и концентрируют. Концентрирование конечного препа-. рата.Объединенные Фракции диализуют против 1 л 0,01 М трис-НС 1 буфера рН 7,5, содержащего 0,001 М МРС 1 , 005 М ИаС 1 и 50% глицерина (по обьему). Диализ продолжают в течение 12 ч, Препарат помещают в предварительно охо лажденную емкость и хранят при -20 С, Выход щелочной АосАатазы Е, со 11 составляет ЗЗЕ с удельной активностью 30 ед/мг белка. Ферментный препарат не содержит нуклеазных примесей и пригоден для использования в генноинженерных экспериментах и молекулярной биологии....

Номер патента: 1585327

Опубликовано: 15.08.1990

Авторы: Гимадутдинов, Порфирьева, Юсупова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: serratia, ампициллину, бактерий, геном, днк, используемый, маrсеsсеns, трансформации, устойчивости, штамм

...был отобран мутант, неспособный продуцировать неспецифическую внеклеточнуюэндонуклеазу.1Полученный мутанг засевают в колбы с мясопептонным бульоном до оптической плотности 0,05 при 650 нм,Культуру выращивают на качалке дооптической плотности 0,5, осаждаютклетки центрифугированием, промывают 0,1 М цитратным буфером, рН 5,5в 20 раз измеряли оптическое поглоще ние при 260 нм на спектрофотометре Сф, За единицу активности принимали количество фермента, которое дает увеличение оптической плотности в опытных образцах, по сравнению с контрольными (реакционная смесь без фермента) на одну оптическую единицу за 1 ч инкубации в пересчете на 1 мл культуральной жидкости (опт, ед. мл ч 9 . В качестве субстрата использовали препараты...

Номер патента: 1618760

Опубликовано: 07.01.1991

Авторы: Буткус, Вайткявичюс, Кундротене, Кюдулене, Науряцкене, Падягимене, Янулайтис

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: coli-продуцент, бактерий, еsснеriснiа, рестриктазы, со130, штамм

...волны540 нм составляет 6,0 о,е. Полученныйинокулят засевают в лабораторныйферментер "Биолайит", содержащий 10 лсреды Р 2,Культуру ЕзсЬег 1 сЬ 1 а со 11 КР 1, 130выращивают при 37 С, рН 7,0, со ско-ростью перемешивания в первый часкультивирования 200 об/мин и далеедо 400 об/мин, а также подачей стериального воздуха 4 л/мин в первыйчас роста с постепенным увеличениемдо 7 л/мин на третьем часу роста .Заданный рН во время Аерментацииподдерживают добавлением в среду 1 МортоАосАорной кислоты, Во.время культивирования периодически отбираютпробы и измеряют оптическую плотностьсуспензии клеток, Культивирование штамма проводят до поздней логариАмической Фазы роста - оптическая плотность суспензии клеток составляет3,7 о.е. (длина волны 540 нм,...

Номер патента: 1622393

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Баронайте, Вайткявичене, Гаврюченкова, Громова, Марцишаускас, Песлякас, Суджювене

МПК: C12N 9/14

Метки: днк-полимеразы, еsснеriснiа

...баню и перемеаиваютстеклянной палочкой до получениягомогенной суспенэии, Суспеиэии кле"ток обрабатывают экструзиоииьи деэинтеграторои. Обломки клеток осаждают центрифугироваиием при 10000 В 2393 Ьв течение 1 ч. Выпавщий осдлок отбрасывают, центрифугят (560 мл) используют для выделения Фермента.б) фракционнрование ферментногоэкстракта полимином 11 и сульфатомаммония. К центрифугату (1560 ил),полученному нд предьдущей стадии,при постояннои перемещивянии в течение 30 мин добавляют 203-ный растворполимина 11 (48 ил) ло конечной концентрации 0,6 г После добавления всего объема полимина 11 переиещиваниепродолжают еще 30 мин, Экстракт цент Рифугируют в течение 10 иин при5000 е. Супернатант сливают, я полученный осадок суспенлируют в 780...

Номер патента: 1631080

Опубликовано: 28.02.1991

Авторы: Андреева, Лебедев, Пустошилова, Серов

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, бактерий, вме, меgатеriuм, продуцент, рестриктазы, штамм

...нуклеотидов ВЕССС;оптимальное значение рН дпя действиярестриктазы 75-9,0; оптимальная температура действия 37 оС; для активности рестриктазы требуются ионы М 8+Фс оптимальной концентрацией 5-10 мМ;оптимальная концентрация ИаС 1 0"50 мМ.Для культивирования В.ше 8 аСегхцш35361 применяют питательную среду следующего состава, г/л дистиллированной воды;Пептон 10Дрожжев ойэкстракт 5БаС 1 10 ры В.шеяагегцш в 10 раз выше, чем с 1 л культуры В.враегсцвП р и м е р. Клетки В,шеаегдцш 36 1, хранящиеся в 15 Х-ном глицерине в Ь-бульоне при минус 60 оС, размораживают и высевают для оживления в Ь-бульон, инкубируют 24 ч при 30 оС. Полученную жидкую культуру высевают на чашки РПА для получения отдельных колоний, инкубируют 24 ч при 30 С,...

Номер патента: 1631081

Опубликовано: 28.02.1991

Авторы: Буткус, Кюдулене, Манелене, Пятрушите, Степонавичене, Янулайтис

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: бактерий, еsснеriснiа, продуцент, рестриктазы, штамм

...мМ КаС 1 5 мМ МяС 1., 10 мМ 2-меркаптоэтанол, 100 мкг/мл альбуминабычьей сыворотки, 2 мкг ДНК фага 9в 40 мкл смеси и 1 мкл фермента, Реакцию проводят при 37 С 10 мин, Электорофорез проводят в 0,1 М натрийборатном буфере (рН 8,2) 2 мМ трилон Б,в течение 1,5 ч при напряжении 100 Ви силе тока 100 мА. Окрашенные этидийбромидом (1 мкг/мл) гели просматривают в УФ-свете,За условную единицу принимаетсято количество фермента, которое воптимальных условиях за 1 ч полностьюрасщепляют 1 мкг ДНК фага Я Все операции по выделению и очистке фермента проводят при +4 С.10 г влажной биомассы суспендируют в 20 мл буфера А (10 мМ трис-НС 1-буфер, рН 7,8, содержащий 10 мМ 2-меркаптоэтанола), озвучивают на дезинтеграторе, В полученный бесклеточный...

Номер патента: 1632974

Опубликовано: 07.03.1991

Авторы: Дегтярев, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: vulgaris-продуцент, бактерий, рrотеus, рестриктазы, штамм

...р 1. Клетки Ргогеця чц 1 вагя 84 бактериологической петлейпересевают на чашки Петри с агаризованной средой (на основе 3,5%-ногорыбного гидролизата), содержащей1% ную Донорскую кровь Чашки с за 40сеянной культурой инкубируют в термостате при 30 С 16 ч. Подросшую культуру переносят в жидкую питательнуюсреду следующего состава: рыбный гидролизат 3,5%, вода дистиллированная 45остальное, рН 7; 2. Культивированиеосуществляют в термостатированныхкачалках при 30 С; .200 об./мин, достационарной фазы роста,Глубинное культивирование проводят вферментере "МсгоГегш" в анаологичной среде при 30 С, аэрации 1объем в минуту, 200 об./мин мешалки.В течение культивирования следят заподдержанием рН и оптической плотностью, При достижении ранней стацио...

Номер патента: 1632975

Опубликовано: 07.03.1991

Авторы: Манувахова, Несмеянова, Федотикова, Цфасман

МПК: C12N 1/20, C12N 15/55, C12N 9/14 ...

Метки: бактерий, внеклеточной, еsснеriснiа, предшественника, продуцент, фосфатазы, штамм, щелочной

...и культивирование продолжают еще 15 ч, Через ч 4 инку бации достигается максимальная активность внутриклеточной щелочной Фосфатазы 0,07 Е/мп, удельная активностьм 0,5 Е/мг белка.При последующем культивировании начинается секреция щелочной фосфата 50 зы в культуральную среду. Максимальное содержание фермента в среде достигается через 15 ч, когда он составляет 847. от всего синтезированного Фермента и является преобладающим белком культуральной жидкости. Максимальная активность щелочной Фосфатазы в среде составляет 0,16 Е/мп,внутриклеточной 0,03 Е/мп. Удельнаяактивность 4 Е/мг белка. В то же время клетки содержат значительное количество предшественника, который локализован в мембранах. Его содержаниев этом компартменте не меняется в...

Номер патента: 1634713

Опубликовано: 15.03.1991

Автор: Михайлова

МПК: C12N 9/14

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...в 0,8 -ном агарозном геле. За единицу активности принимали минимальное количество фермента, необходимое для постоянного специфического гидролиза 1 мкг ДНК фага Т 7 втечение 1 ч 37 +.1 ОС.10 г замороженной биомассы Х.Ьас 1 гП ВКПМ Всуспендируют в 20 мл 10 мМ трис-НО, рН 7,9, содержащего 1 мМ ЭДТА и 0,01 М 2-меркаптоэтанола, добавляют тритон Хдо конечной концентрации 0,1% и обрабатывают ультразвуком при частоте 20 кГц и амплитуде 17+ 2 мкм нескол ько раэ до исчезновения вязкости в биомассе, периодически охлаждая смесь для предотвращения нагревания смеси и инэктивации фермента. К клеточному гомогенату при постоянном перемешивании приливают 30 мл смеси, содержащей 21 полиэтиленгликоля и 6% декстрана, 7,88 мл 4 М раствора йаС (до...

Номер патента: 1634714

Опубликовано: 15.03.1991

Авторы: Кривопалова, Пучкова, Серов

МПК: C12N 9/14

Метки: sтrертомyсеs, микроорганизмов, рестриктаз, рода, тестирования

...и Яы 11 является обработка клеточного экстракта при1634714 Активность рестриктазы Яас И в грубо очищенном экстракте клеток составила 6000 ед. в 1 г влажной биомассы или 90900 ед. в 1 г сухого мицелия. Яз 11+ Яы И); (+) - наличие одной рестриктазы (Яас И или Яы И);(О) - инактивация обеих рестриктаз. Составитель В.ВарламовРедактор М.Недолуженко Техред М.Моргентал Корректор И.Эрдейи Заказ 733 Тираж 362 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский кбмбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 50-55 С. При температуре ниже 50 С сохраняется картина рестрикции, характерная для двух эндонуклеаэ рестрикции (Яас 1 + Яас И или Язс - Язт И),...

Номер патента: 1645293

Опубликовано: 30.04.1991

Авторы: Дегтярев, Корсун, Пучкова, Речкунова, Серов

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: faecalis, sтrертососсus, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...при температуре 30 С с хорошей аэрацией допоздней логарифмической фазы роста.Выход влажных клеток составляет 2,43,0 г/л питательной среды,Выход фермента составляет 2000 ед.акт./г сырой биомассы, что более чемв 3 раза выше, чем известногоПолученная рестриктаза Бйа Б 1характеризуется следуккнми свойствами,"узнает и специфически расщепляет 45последовательность нуклеотидов ССАТС%/ 9 фоптимальное значение рН для действия рестриктазы 7,2;оптимальная температура действия37 С;оптимальная концентрация ионовИаС 1 - 150 шИ, М 8 С 1 - 5-15 шИ.Фермент стабилен в течение не менее 6 мес,. при температуре -20 С, своо55боден от примесей неспецифическихэкэо- и эидонуклеаз, фосфатаз.Изобретение иллюстрируется следующими примерами. П р и м е р 1....

Номер патента: 1645300

Опубликовано: 30.04.1991

Авторы: Андреева, Дегтярев, Кривопалова, Пучкова, Речкунова, Селина, Серов

МПК: C12N 1/14, C12N 9/14

Метки: fradiae, sтrертомyсеs, продуцент, рестриктазы, штамм

...нуклеотидов ССССО;оптимальное значение рН для действиярестриктазы 7,5-8,0; оптимальная температура действия 37 С, активностьо сохраняется также при 50 С; оптимальоная концентрацияионов Ия ф 5-15 мИ.БаС 1 50 мИ.Электрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фага Ф С 1 857 рестриктазамиБЕг 1 и Бас 11 и Бас 11 показывает,что картина гидролиэа полностью совпадает как при параллельном, так исовместном гидролизе. Следовательно,рестриктаэа Бйг 1 является изошиэоме,ром рестриктаэы Бас 11, узнает и расцепляет последовательность нуклеотидов СССССС,П р и м е р 1. Получение биомассыБ. йгаЫае 303, Клетки Б. йгайае 303,храняциеся в ЗОХ-ном растворе глицерина в, питательной среде при -20 С,овысевают на чашку с плотной питательной...

Номер патента: 1648976

Опубликовано: 15.05.1991

Авторы: Аникейчева, Калугин, Самко, Соколов, Фицнер, Фодор, Хорошутина, Эльдаров

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: agile, аснrомовастеr, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...с мясопептонным агаром мелкие, блестящие, края ровные. На мясопептонном бульоне на дне пробирки осадок, среда прозрачная.Отношение к кислороду: строгий аэроб.Желатина уколом - очень медленное разжижение.Чувствительность к антибиотикам: культура чувствительности ко многим антибиотикам, резистентна к пенициллину, стрептомицину, полимиксину,Условия выращивания и хранения Культура хорошо растет на твердых и жидких полноценных питательных средах: бульоне Хоттингера, среде 1 В. При культивировании на среде 1 В наблюдается продолжительная лаг-фазаОптимум роста при,37 С. Зона рН роста культуры лежит впределах 4,6-9;5. Оптимум роста культурыи образования фермента при рН среды7,2 - 7,4, При рН 10,0 культура не растет,адИе.Наибольший выход...

Номер патента: 1650697

Опубликовано: 23.05.1991

Авторы: Дегтярев, Дедков, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, fоrмis, liснеni, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...е ./г биомассы1000 5000 Составитель И,ПриваловаТехред М.Моргентал Корректор М,Демчик Редактор Н,Гунько Заказ 1583 Тираж 374 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж. Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина, 101 глюкозы образуют кислоту, Гидролиэует крахмал, казеин, желатин, твин, Дезаминирует аргинин. Сероводород и индол не образует. Восстанавливает нитрат в нитрит, Чувствителен к ампилициллину, хрорамфениколу, канамицину, стрептомицину, тетрациклину (100 мкг/мл среды 1), Используют глюкозу в качестве единственного источника углерода и энергии для роста, Растет при 10 - 55 С, оптимум 37 С, рН среды 6 - 8, оптимум рН...

Номер патента: 1652341

Опубликовано: 30.05.1991

Авторы: Бойков, Виестуре, Дегтярев, Репин

МПК: C12N 9/14

Метки: sтuтzеri, бактерий, продуцент, рsеudомоnаs, рестриктазы, штамм

...растет на жидкой питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролиэата и до 1,0 л воды, рН 7,2-7,4. Нв такой питательной среде штамм растет при температуре 25-27 ОС, аэрации 2 обьемв воздуха на 1 обьем питательной среды в течение 5 - 6 ч. При выращивании штамма на питательной среде данного состава происходит помутнение среды, что свидетельствует о сильном росте культуры. Рост глубинный и пленки на поверхности не образуется, Осадок, состоящий из клеток Рзецбоеопаз з 1 ц 1 аег 131, тягучий, при воздействии нв него лиэоцимом быстро происходит лиэис клеток, Количество осадка обильное, цвет осадка светло-серый.Штамм фагоустойчив, Не лиэируется в присутствии фагов СЬ 4 А,А, МЗ 2, 0 Р.Штамм чувствителен к ампициллину в концентрации...

Номер патента: 1655986

Опубликовано: 15.06.1991

Авторы: Гладченко, Зернов

МПК: C12N 9/14

Метки: ара, выделения, рестрикции, эндонуклеазы

...форез). Для разделения Ара 1 рестриктов ДНК фага Л и нативной ДН К фаза Л используется пульсирующее поле с периодом 1, 2 с в прямом и 0,6 с в обратном направлениях. Реакционная смесь для гидролиза содержит 10 ММ трис-НС 1 рН 7,9; 6 мМ М 9 С 12; б мМ КС 1;10 мМ 2-меркаптоэтанол; 1 мкг ДНК фага Л и 1 мкл фермента. Реакцию проводят при 37 С 10 мин. Электрофорез проводят в 0,06 М трис-ацетатном буфере, рН 7,9, 2 мМ ЭДТА в течение 5 ч при напряжении 100 В, Окрашенные этидий-бромидом (1 мкгlмл) гели просматривают в Уф-свете.За единицу активности принимают количество фермента, которое в оптимальных условиях за 1 ч полностью расщепляет 1 мкг ДНК фага Л, 2 г биомассы АсетоЬассег раз 1 ецг 1 апцз суспендируют в 4 мл буфера экстракции,...

Номер патента: 1659479

Опубликовано: 30.06.1991

Авторы: Крамаров, Матвиенко, Резник, Смирнов, Смольянинов, Сорокулова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, liснеnifоrмis-продуцент, бактерий, рестриктазы, штамм

...среде характеризуется равномерным помутнением.Физиолого-биологические признаки - грамположительные аэробные спорообразующие палочки. Продуцируют каталазу. Культура ферментирует глюкозу, арабинозу, маннит с образованием кислоты, ксилозу не использует, Утилизирует цитрат и пропионат, гидролизует крахмал, редуцирует нит1659479 Составитель И, ПриваловаРедактор Л, Герасимова Техред М.Моргентал Корректор Т.Колб. Заказ 1821 Тираж 378 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 раты, в аэробных условиях из нитратов образует газ, дает положительную реакциюФогес-Проскацэра. Растет в анаэробных...

Номер патента: 1659480

Опубликовано: 30.06.1991

Авторы: Андреева, Афиногенова, Зернов, Лебедев, Пустошилова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: бактерий, кlевsiеllа, рnеuмоniае-продуцент, рестриктазы, штамм

...жидкости,Выходрестриктазы Крп 3781:40000 ед,акт/г биомассы,П р и м е р, Культивирование штамма иполучение биомассы,Клетки КеЬзеа рпеипопае 378 размораживают при 37 С и высевают в жид 5 кую питательную среду, содержащуюпептон (10 г), экстракт (5 г), йаС (5 г) идистиллированную воду до 1 л. Глюкозу добавляют перед засевом до 1 , После 24 чинкубирования в термостате при 30 С10 штамм высевают на плотную среду с РПАдля получения отдельных колоний, Выращивают при тех же условиях. Выросшие клеткипереносят петлей с агара в колбы с 50 млжидкой питательной среды для получения15 инокулята, Инкубируют на качалке (200 -220 об/мин) 24 ч при 30 С.Полученным инокулятом засевают объем среды (качалочные колбы по 250 мл среды), предназначенный...