C12N 9/22 — рибонуклеазы

Номер патента: 162485

Опубликовано: 01.01.1964

МПК: C12N 9/22

Метки: 162485

...от мицеллия, например Ас(1 поп 1 усез ацгеочег 11 с 111 а 1 цз Кгаз, е 1 Р 1 511 еп, штамм 1306. Обычно мицеллий этого актиномицета используют в качестве биостимулятора роста, а культуральная жидкость при этом является отхоФермент гуанил-рибонуклеазы можно получить из предлагаемого сырья одним из известных способов.Так, например, для выделения ферментного препарата из культуральной жидкости последовательно производят высолаживание ферментов сульфатом аммония, отделение осадка центрифугированием, перевод осадка в водный раствор с последующим удалением соли сульфата аммония диализом, нейтрализацию раствора до рН 6, кратковременную выдержку очищенного раствора при температуре 80=С, с целью инактивации примесей фосфодиэстераз и...

Номер патента: 259790

Опубликовано: 01.01.1970

МПК: C12N 9/22

Метки: рибонуклеазы

...и 2-го имы в воде 3 г осадка из при раза 15 мл воды.и лиофильно суш оответственно: 2 г 0,5 г (18%), акти астворимая часть %. Лиофилизаты ь хорошо раствор и рибонуклеаз мл воды. До перемешиваю рхний слой эк фенола. Объе нтр ифугируют, ий осаждают ок промывают каторе. Выход ,бги 032 г,с исходного, т. П р и м е р 4, 2 г лиофичизата (экстракт 1 примера 3) растворяют в 20 лтл 0,2 М уксусноп кислоты и наносят на колонку 4 Х 110 см, наполненную сефадексом 6-25. Первые 40 мл элюата отбрасывают, следующие 100 лтл со,держат 1 г высокоочищенной рибонуклеазы в виде ацетата,П р и м е р 5. 2 г лиофилизата растворяют в 0,1 М растворе пиридина или 0,05 растворе аммиака. Первые элюаты отбрасывают (400 мл), а рибонуклеаза выходит в виде свободного...

Номер патента: 302367

Опубликовано: 01.01.1971

Авторы: Бел, Гарейшина, Казанский

МПК: C12N 1/20, C12N 9/22

Метки: дезоксирибонуклеазы, продуцент

...9986,Предлагаемый штамм был получен при ес тественном рассеве этого вида бактерий и характеризуется следующими свойствами.Морфология. Клетки палочковидные, размером 1,5 - 0,2 К 0,8 - 1,0 мк, одиночные или соединены в цепочку по 3 - 6 в каждой. Под вижные, Перитрих. Грамотрицательные. льтуральные своиства. Агаровая среда-пептонный агар) и желатиновая. Колонебольшие, гладкие или зернистые. Беснтные. На картофельных пластинах пиготсутствует, Оптимальная температуратия 25 - 30 С. Питательная среда. Мясонный бульон,охимические свойства. Нитраты восстаивает до нитритов. Желатину разжижает,Молоко свертывает, но не пептонпзпрует. Отношение к углеводам. Маннпт глюкозу, саха- розу, мальтозу, пнозит, маннозу сбраживает. Лактозу, рамиозу,...

Номер патента: 396014

Опубликовано: 01.01.1973

Авторы: Джон, Иностра, Стюарт

МПК: C12N 11/12, C12N 9/22

Метки: 396014

...в течение 20 лгин, центрифугируют при 23000 о 30 чин и осадок удаляют.К гга 1 досадочггой жидкости в объеме 140 лг,г медлеггно добавляют при перемешиваьгии 75 лгл ВВА этаггола, доводя его концентрацию до 35%, в результате чего проис. солит осаждецие ПНФазы, Послученную водно-этанольную смесь перехгешивают при 0 - 5 С в течение 20 лгигг, а затем центрифугируют при 23000 д 35 лгин, в результате чегго происходит отделение осажденной ПНФазы, надосадочную жидкость отбрасывают.Осажденную ПНФазу растирают в небольшом объеме (5 - 20 лгл) охлаяденного (5 С) ПНФазного буфера, имеющето следующий состав: 10 лгл 1 М трис-гидроксиметил/-аминометан НС раствора, 1 лгл 1 М распвора уксуснокислого магния, 0,07 лгл тиоэтанола, дистиллированную...

Номер патента: 412249

Опубликовано: 25.01.1974

МПК: C12N 9/22

Метки: 412249

...СССРпо делам изобретенийи открытий УДК 663.1(088 8) Авторыизобретения Г. А. Пензикова и М, Г. Орешина Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиковЗаявитель ПРОДУЦЕНТ РИБОНУКЛЕАЗЫ Изобретение относится к производству ферментных препаратов.Известно применение Ас 11 погпусез г 1 тпозцз в качестве продуцента окситетрациклина и протеолитических ферментов.Предложено применение культуры АсИпогпусез гйгпозцз в качестве продуцента рибонуклеазы.П р и м е р. Культуру Ас 11 погпусез пгпозцз штамм 171, выращивают в 15-литровых фер, ментерах при 27+2 С при непрерывном перемешивании при 500 об(мин, подаче 1 объема воздуха на 1 объем среды в минуту и избыточном давлении 0,5 ати на среде, содержащей 7,5% крахмала, 2,3% соевой муки, 1,4%...

Номер патента: 767120

Опубликовано: 30.09.1980

Авторы: Калачева, Куриненко

МПК: A61K 38/43, C12N 9/00, C12N 9/22 ...

Метки: модифицированных, ферментов

...обычно исполь-ЗОаминов. зуют рибонуклеаз Асс,газу сс,г 1 воьцв. Условиязуют 4 -В-оксиэтилсульфониланизолосвязывания и соотношеения реактивоввый или 4-В-оксиэтилсульфонилаиилиноте же, что и в и иримере 1. Выход конечного продукта 68.вйй спирт, или их эфиры с дектраном,или М - аминобензилсульфонилоксиметилВ качестве конт оля ир роводят модекстран.дификацию рибонуклеазы Асс.г 1 аоцяДля модификации фермейтов исполь 5 Яс- аминобензилоксимети екстлд кстраном,зуют, например 4-В-оксиэтилсульфонилне содержащим заместителей.е . ВыходанизОлдекстран который обрабат, У авляет 28.конечного прод кта состраствором МаМО и НС и и 0 - 2П р и м е р 3. Получение химотрипК полученной таким образо2при - С, сина, мо ифи ид Ф ц рованного 4-В-оксиа м соли...

Номер патента: 943279

Опубликовано: 15.07.1982

Авторы: Малей, Фридман, Хагендорф, Хомякова, Шахова

МПК: C12N 9/22

Метки: комплекса, ферментного

...накопления ферментов, чтоупрощает процесс получения ферментного комплекса за счет сокращениядлительности культивирования на 812 ч. Соотношение пшеничной муки::крахмала:калия хлористого 1:(0,60,7):(О, 07-0, 08) приводит к обогащению питательной среды аминокислотами и катионами калия, Это увели- )О чивает количество биомассы и активирует продуцирование ферментов5 -экзонуклеазы и щелочной фосфатазы.Осаждение ферментного комплек са этиловым спиртом при соотношениикультуральной жидкости к спирту1:(3,5 4,5) приводит к более полному осаждению щелочной фосфатазы изкультуральной жидкости и обогащению 20 Ферментного комплекса Фосфатазой.П .р и м е р 1. 15 кг пшеничноймуки, разведенной в воде, заливаютв ферментер, включают мешалку, доводят объем до...

Номер патента: 948999

Опубликовано: 07.08.1982

Авторы: Виестуре, Квеситадзе, Лидере, Шкинке

МПК: C12N 9/22

Метки: 3-9-15, cryzae, амилазы, аспергиллус, культивирования, продуцента, среда

...обеспечивается 20 полноценный обмен веществ, присутствие ионов цинка положительно влияет также нв образование Й-вмилазы. Соотношение в среде источников углерода, азота и фос-, фора обеспечивает оптимальное развитие 25 культуры и биосинтез с-амилазы а нуилеазы б., Максимум биосинтеза о-амилвзы и нуклеазыЗдостигается к 72 ч культи вирования при 30 оС в аэробных условиях.,30Результаты культивирования:Активность, ед/мл фильтрата с -амилаэы25-30, нуклеазы В 80- 100. П р и м е р 1. Культура ЛВрегсрИОЬ Огу Хсе 3-9-15 поддерживается на сусло-агаре, пересевается 1 раз за три месяца.1. Инокуляция посевного материала. Для подмолаживания культуры готовят косяки, которые выращивают в термостате40 при 30 оС 7 сут, после чего выдерживают при...

Номер патента: 992568

Опубликовано: 30.01.1983

Авторы: Виестуре, Соколова, Юсупова

МПК: C12N 9/22

Метки: serratia, выращивания, маrсеsсеns, нуклеазы, питательная, продуцента, среда

...ОстальноерН. равняется 7,6,11 осевной материал смывают 0,5%физиологическим раствором и засевают вдве колбы, содержвщие.по 200 мл жидкой среды того же состава (исключаяагар),из расчета 1 мл инокулята на100 мл сроды. 10,0 20,0 Пита . Сре звестная 25000 2700013000 15200 25 2568 фЧерез 12 ч выращивания на качалке, колб переносят в ферментер РЕМ 30с 18 л среды. Процесс культивированияЯосуществляют 36 ч при аэрации л воздуха/л среды (минимум 3.:1),Нуклеазную активность определяю гвысокоэиметрическим методом в модификации Бенинга и по продуктам гидролиза вискополимерной ДНК, растворимымв 2%-ной НС 1 О: и определяемым попоглощению при 260 нм. Реакционнаясмесь объемом 1 мл содержит: 1 мгДНК, 0,07 М тряс-НСР буфера (рН 8,5),0,007 М( 50...

Номер патента: 998502

Опубликовано: 23.02.1983

Авторы: Вина, Зейдака, Миериня, Орна

МПК: C12N 9/22

Метки: нуклеазы

...18125 ед/мг белка, выход.30, степень очистки 10000 раз Г 2 . 10Однако известный способ имеет сравнительно низкое качество полученного препарата (имеются примеси рибонуклеаз Т и Т 2 , фосфодиэстераз, ферментов, расщепляющих нативную дезоксири бонуклеиновую,кислоту). Сложность процесса -.повторная очистка препарата .гельхроматографией на сефадексе 6-75.Целью изобретения является повышение активности и качества нуклеазы 20 5 (под повышением качества понимают отсутствие примесей сопутствующих Ферментов).Поставленная цель достигается способом получения нуклеазы 51 на осно ве продуцента Азрес 9111 цз огугае, включающим фракционированное осаждение белков сульфатом аммония и выделение нуклеазыхроматографией на диэтиламиноэтил-целлюлозе, причем З...

Номер патента: 1010125

Опубликовано: 07.04.1983

Авторы: Знаменская, Клейнер, Лещинская, Михлин, Паэгле

МПК: C12N 9/22

Метки: внеклеточной, рибонуклеазы, щелочной

...который являетсякомплексным источником органическогоазота, витаминов, минеральных элементов15тов и пр, и широко используется дляинтенсификации процессов в кимробиологической промышленности, а также тунгопеп тона - пеп тона растительного и роисхождения - приводит к увеличениюурожая биомассы более чем в два раза,20но резко снижает количество РНКазы вкультуральной жидкости, И тоьлко введение дрожжевого экстракта и кислотногоэкс тракта ви тами на В кормового (ГОСТ18666-73) в указанных концентрациях25(0,05 и 0,3 вес,% соответственно) приводит к увеличению количества РНКазыв культуральной жидкости на 33-44%,П р и м е р 1, В 150-литровыйферментер загружают 100 л среды сле- Зодующего состава, %: глюкоза 1,0; пептон 2,0; СаСР 2 0,01; И...

Номер патента: 1025725

Опубликовано: 30.06.1983

Авторы: Соколова, Юсупова

МПК: C12N 9/22

Метки: 24-продуцент, бактерий, штамм, эндонуклеазы

...г/л:Глицерин 5,0Цитрат аммония 5,0 45ДвузамещенныйФосфат калия 10,0Сернокислый магнийХлористый натрий измеряют оптическое поглощение приСернокислое 260 нм на спектрофотометре Сф,железоГидролиэатказеина 1,0Дрожжевойэкстракт 3,0рН среды 7,6.3 10257254пересчете на 1 мл культуральной жид-Сравнительная характеристика акти. кости (, Аоед/мл/ч), вности внеклеточной эндонуклеазыВ качестве субстрата используют штаммов БеггаСа щагсесепя иэвестпрепараты высокойолимерной ДНК, вы- ных и предлагаемого в качестве проду деленной из тимуса теленка .по методу 5 центов нуклеазы на известной питаКэя в модификации Бенинга или коммер- тельной среде для получения нуклеазы ческие препараты высокополимерной ДНК. представлена в таблице. Активность...

Номер патента: 1100309

Опубликовано: 30.06.1984

Авторы: Безбородова, Виестуре, Ежов, Орна, Санцевич, Шкинке, Шпрунка

МПК: C12N 9/22

Метки: 2464, продуцент, рибонуклеаз, штамм

...быстро 60приобретают тускло-зеленую окраску,близкую к светло-серым или желтоватосеро-зеленым тонам, в конидиальнойзоне приближающимся к серовато-оливковым при старении. На обратной сто роне тускло-оливково-зеленые дотемно-коричневых, Иногда образуютбесцветную зону (1-2 см). Эксудатобильный, бесцветный или кремовый.Среда 2; Сусло-агар ( нейтральный ).Рост культуры на сусло-агаре оченьхороший. Отличается от роста на средеЧапека отсутствием эксудата. Колонииокрашены в серо-зеленый цвет, плоские. Обратная сторона цвета среды.Среда 3. Среда Чапека-Докса, г/л:глюкоза 20,0 КВОз 2,0 КН РО 4 1,0 ФИ 5047 Н О 0,5 КС 1 0,5; РЕ 504 7 НО0,01; агар-агар 20,0.Рост очень скудный, колония растет концентрическими кругами. Цветзеро-зеленый. Обратная...

Номер патента: 1138411

Опубликовано: 07.02.1985

Авторы: Знаменская, Клейнер, Лещинская, Ромахина

МПК: C12N 9/22

Метки: внеклеточной, рибонуклеазы, щелочной

...при внесении его на более ранние или более поздние сроки стимулирующий эффект снижается.На чертеже представлен график показателей роста и накопления рибонуклеазной активности на контрольной среде аНа графике обозначено биомасса - 1, активность рибонуклеазы в культу- ральной жидкости 2, удельная скорость роста бактерий 3, удельная скорость накопления фермента 4.На чертеже приведены показатели роста Вас 111 ця дпгегшейшя 7 р и накопления рибонуклеазной активности в культуральной жидкости на контрольной среде (не содержащей дактиномицина), а также кривые удельной скорости роста культуры ( р.) и удельной скорости накопления фермента(Г ).Для уточнения координат оптимальной (наиболее эффективной) зоны действия дактиномицина (т,е. концентрации...

Номер патента: 1040794

Опубликовано: 30.05.1985

Авторы: Золотова, Калинин, Лапаева, Лунин, Тихоненко

МПК: C12N 15/00, C12N 9/22

Метки: 4994-продуцент, сайт-специфической, штамм, эндонуклеазы

...(картофельно- глицериновый агар) . Колонии серого цвета, блестящие, с гладкими краями, через 24 ч достигают 1,0 мм в диа метре. Гемолиз не выявлен.Среда КУА (казеиново-угольный агар), Колонии серовато-креиового , цвета, вязкой консистенции, с гладкими краяии, через 24 ч достигают 50 1,0 им в диаметре, Пигмент не выявлен.Пептонный агар "Мясо". Колонии кремового цвета, вязкой консистенции, через 24 ч достигают 1,5-2,0 мм в диаметре. 55Жидкая питательная среда типа Коен-Уилер. Аэробные условия выращивания, Растет при покачивании, Среда 794 гне окрашивается. Микробная взвесь серовато-белого цвета.Физиолого-биохимические признаки. Усваивает .органические соединения. Оптимальная температура роста 33-36 С. В качестве источников азота,...

Номер патента: 1161550

Опубликовано: 15.06.1985

Авторы: Зейдака, Миериня, Неймане, Орна, Полякова, Тарасевич, Шпрунка

МПК: C12N 9/22

Метки: нуклеазы

...на ДЭ-целлюлозы концентрировани ем на ультрафильтрах и диализом против глицерина, а также исключение хроматографии на сульфо-сефадексе , позволяет сократить число стадий с 16 до 14. В результате получают пре- ЗО парат с удельной активностью 20,000- 70.0 дО ед/мг белка, выход 173, практически не содержащий примеси нееспецифических фосфатаз, Фосфодиэстераз и экзонуклеаз. П р и м е р 1. 160 г амилоризина экстрагируют 1,6 л 0,02 М буфера ацетата натрия, содержащим 0;05 М ЮаС 1 и 0,1 мМ Е и+ . Осадок отделяют центрифугированием. Экстракт подвер б гают термообработке, постепенно повышая температуру раствора до 70 С в водяной бане с температурой 75 ОС. К раствору добавляют сульфат аммония до насыщения 0,7 (800 г),перемеши вают и осадок...

Номер патента: 1392093

Опубликовано: 30.04.1988

Авторы: Безбородов, Безбородова, Василева-Тонкова

МПК: C12N 9/22

Метки: внеклеточной, выделения, гуанилрибонуклеазы, наrziаnuм, тriсноdеrма

...фракции концентрируют ультрафильтрацией через мембрану УМи диализуют против 0,01 М трис-НС 1 буфера рН 7,7, Затем раствор фермента вносят в колонку с ДЭАЗ- целлюлозой (4 х 16 см), уравновешенную тем же буфером, со скоростью 100 мп/ч и промывают 100 мл исходного буфера, Вся активность фермента находится во фракциях, выходящих из колонки. После подкисления до рН 5,0 0,5 М уксусной кислотой раствор фермента, вносят со скоростью 60 мл/ч в колонку с КМ-целлюлозой (2 х 7 см), уравновешенной 0,01 М ацетатно-аммиачным буфером, рН 5,4. Фермент элюируют 0,5 М ацетатно-аммиачным буфером того же рН, Получают 7 мл раствора фермента с удельной активностью 2860 ед/А ь =1 и степенью очистки в 6000 раз с выходом по активности 50%.П р и м е р 2. 27 л...

Номер патента: 1458388

Опубликовано: 15.02.1989

Авторы: Битинайте, Буткус, Горбачев, Грубер, Кюдулене, Лазарявичюте, Лаучис, Манялене, Поляченко, Янулайтис

МПК: C12N 9/22

Метки: catg-3, gpucgpyc-3, нуклеотидов, обладающих, последовательности, расщеплять, способностью, узнавать, эндонуклеаз-рестриктаз

...буфером В, содержащим 0,1 М ИаС 1. Колонку промывают 150 мл того же буфераи элюируют линейным градиентом ИаС 1 от 0,1 до 1,0 М в 500 мл буфера В. Отдельно собирают фракции, элюируемые при 0,25-0,36 М НаС 1, содержащиеосновную часть активности рестриктазы Нхп 1 1, и фракции, элюируемыепри 0,58-0,7 М, содержащие активностьрестриктазы Н 1.п 1 11. Далее очисткурестриктаз Нп 1 1 и Нп 1 11 провоАктивность рестриктаз тестируют методом гидролиза ДНК фага лямбда с последующим . разделением полученных фрагментов электрофорезом в агарозном геле. Реакционная смесь для гидролиза ДНК фага лямбда рестриктазой Ндп 1 1 содержит 10 мМ трис-НС 1 рН 8,5, 25 мМ НаС 1, 5 мМ МяС 1 100 мкг/мл альбумина бычьей сыворотки, 2 мкг ДНК фага лямбда в 40 мкл...

Номер патента: 1495377

Опубликовано: 23.07.1989

Авторы: Залите, Пейсениекс, Чичкова

МПК: C12N 9/22

Метки: еsснеriснiасоli, рибонуклеазы

...600 суспендируют в ровном объеме буфера А и разрушают в дезинтеграторе Мантона-Гаулина 15 М-БТА при давлении 500-600 атмсуспензию разбавляют буферным раствором до 15 л,добавляют 0,2 мг ДНКазы(свободной от рибонуклеаз) и перемешивают 30 мин.Клеточные осколки удаляют центрифугированием на центрифуге в ротореяБА 30 мин при 12000 об/мин.Рибосомы удаляют ультрацентрифуги рованием на центрифуге "ВесКшап 1550" в зональном роторе Тч при28000 об/мин.К супернатанту (1500 мл) добавля"ют сухой аммоний сернокислый из расчета 22 г на каждые 100 мл суперна 50танта. При этом добавляют сухой(трис)-оксиметиламинометан, поддерживая рН 7,8, Образовавшийся осадокудаляют центрифугированием на центри55Фуге в роторе КБЗ 30 мин, при7000 об/мин. К прозрачному...

Номер патента: 1518367

Опубликовано: 30.10.1989

Авторы: Бойков, Репин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/22

Метки: providencia, sтuаrтii, бактерий, биомассы, обогащенной, рестриктазой

...диализом против буфера"Б", содержащего 552 глицерина.Получают очищенный фермент Рвг 1в виде прозрачной бесцвегной жидкости.Рестриктаэа Рвс 1 расщепляет ДНКфага Л на 18 сайгов,Содержание нуклеаз - после выделения отсутствуют. 35Хранят рестриктазу Рвг 1 при -10 Св течение 1 г. П р и м е р 2. Оживление культурыи выращивание посевного материалапроводят подобно примеру 1.Ферментацию культуры проводят вферментере "Е 1 есгго 1 цх" рабочей емкостью 50 л на питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролизатаи до 1,0 л воды, при:рн7,2-7,4 ,подаче воздуха 100 л/мин,перемешивании 300 об/мин,добавлении лактоэы (в виде 402-ного раствора) при достижении оптическойплотности бактериальной суспенэии1,5 опт. ед. (ФЭК, фкпьтр Р 6, кювета0,5 см) в...

Номер патента: 1544801

Опубликовано: 23.02.1990

Авторы: Аавиксаар, Тара

МПК: C12N 9/22

Метки: выделения, кобры, нуклеотидазы, яда

...основного белка 0,35-0,45 М раствором серно 55 кислого аммония(рН 6,5-7,5), Полученный йермент концентрируется при помощи ультрайильтрации.Характеристика препарата: выход 90%, степень очистки -в 25 раз Содержание фосфодиэ.теразы и неспецифической и Ьосйомоноэстеразы ниже 0,05 от активности 5 -нуклеотидазы,П р и м е р 1. К, 0,5 г яда кобрыдобавляют 4 мп раствора 0,35 М сернокислого аммония (рН 6,5), смесь медленно перемешивают в течение 4 чопри 4 С. Растворенный яд центрифугируют при 5000 об/мин при 4 С в течение 30 мин. Осадок выбрасывают, надосадочную жидкость используют для хроматографии, На уравновешенную 0,35 Мраствором сернокислого аммония (рН6,5), колонку с гептил-агарозой (размеры колонки 2,1 ю 2,6 см) наносят раствор яда,...

Номер патента: 1544802

Опубликовано: 23.02.1990

Авторы: Азизбекян, Нетыкса, Ребентиш

МПК: C12N 9/14, C12N 9/22

Метки: bacillus, бактерий, изошизомера, продуцент, рестриктазы, тнuringiеnsis, штамм

...действия рестриктазыо37-40 С, для активности фермента требуются ионы Мр (5-10 мМ). Ферментактивизируется небольшими концентрациями ИаС 1 (25-50 мМ), За единицу ак.;ивности принимается количество Фермента, вызывающее полное расщепление1 мкг ДНК бага лямбда за 1 ч инкубации при 37 дС. Состав буфера: 1 О мМ трис-НС 1, 50 мМ ИаС 1, 10 мМ МЕС 1 10 мМ 2-МЭ, рН 7,5. Для определения последовательности нуклеотидов, узнаваемых рестриктазой Вц, проводили гидролиз ею ДНК различного происхождения, для которой известна нуклеотидная последовательность: бактериофага лямбда ( Ъ ), ф Х 174 РФ, М 13, вируса БЧ 40, плазмиды РВР 322., Расщепление ДНК проводят в реакционной среде следующего состава: 10 мМ трисНС 1 (рН 7,5) б мМ 2-мерпатоэтанола, 6...

Номер патента: 1392902

Опубликовано: 07.05.1990

Авторы: Банникова, Варламов, Рогожин

МПК: C12N 9/22

Метки: serratia, бактериальной, выделения, жидкости, культуральной, маrсеsсеus, эндонуклеазы

...сервируется преимущественно эндонуклеаэа, а прочие белки остаются в растворе. Поэто" му при выделении фермента рН культу- ральной жидкости доводят до 6,5-6,6.Сорбцию эндонуклеаэы на хелатном сорбенте проводят на колонке с соотношением белок:сорбент 6 ед.А :1 см при скорости 15-20 мл/ч илн в объеме с соотношением белок:сорбент 0-12 ед,йА, :1 см , После промывки хелатного сорбента исходным буфером 0,1 М Яаацетатным с рН 6,5-6,6, содержащим 0,3-0,5 М ОаС 1, эндонуклеаэу десорбируют с выходом 65-953 тем же буфе" ром, но с рН 4,7-5,0. Наличие в используемых буферах 0,3-0,5 М ЮаС 1 обеспечивает подавление ионообменных взаимодействий. Использование более высоких концентраций МаС 1 нецелесообразно.П р и м е р 1. К 3 мл ИДК-агароэы (29...

Номер патента: 1576565

Опубликовано: 07.07.1990

Авторы: Битинайте, Буткус, Горбачев, Грубер, Кюдулене, Лазарявичюте, Лаучис, Падегимене, Поляченко, Янулайтис

МПК: C12N 9/22

Метки: cgc=3, нуклеотидов, последовательность, расщепляющей, эндонуклеазы-рестриктазы

...150 об/мин и далее до 250 об/мин, а также подачей стерильного воздуха 3 л/мин в первый, час роста культуры, с постепенным увеличением до 5 л/мин на 6-м часу1576565 25 роста. Заданный рН во время выращивания культуры поддерживают добавлением насыщенного раствора бикарбонатанатрия,Во время культивирования периоди 5чески отбирают пробы и измеряют оптическую плотность суспензии клеток,Культивирование штамма проводят допоздней логарифмической фазы ростаоптическая плотность суспензии клетоксоставляет 2,2-2,5 о.е. (длина волны540 нм).Культуральную жидкость охлаждаютдо 4"С и центрифугируют на проточнойцентрифуге типа ЦЕПА при 2,5 10 об/минПолученную биомассу хранят при -20 С,Выход сырой биомассы 2,5-3,0 г/л культуральной жидкости.При...

Номер патента: 1405310

Опубликовано: 30.08.1990

Авторы: Безбородов, Безбородова, Вайнерман, Лозинский, Манолов, Рогожин, Тавобилов

МПК: C12N 1/14, C12N 9/22

Метки: грибов, культивирования, мицелиальных, продуцентов, рибонуклеаз

...раствора полимера-гелеобраэователя, объема замораживаемых порций и имеющегося холодильного оборудования. В предлагаемом изобретении режимы данной стадии выбраны на основании экспериментов и составляют по температурео оот -10 до -40 , по времени - от 8 до 24 ч.Пленки поливинилового спирта не обеспечивают необходимой для прорастания мицелия макропористости; Сшитый посредством УФ-облучения гель ПВС также непригоден для выращивания микромицетов, т.к, при облучении устрачивалась способность конидий к прорастанию или наблюдалось снижение активности РНК-азы.Таким образом, криогель ЛВС по сравнению с другими способами иммобилизации обеспечивал оптимальные условия для жизнедеятельности мицелиальных грибов - продуцентов РНК-аэ.Состав...

Номер патента: 1203902

Опубликовано: 30.11.1990

Авторы: Аавиксаар, Сийгур, Таре, Ярве

МПК: A61K 35/58, C12N 9/22

Метки: выделения, кобры, эндонуклеазы, яда

...,ки 111110 см наносят раствор ядра.Колонку элюируют 0,19 М раствором уксуснокислого аммония с удельной электропроводностью 14,5 10 8 см, рН 64 со скоростью 180 мп/ч и соби рают фракции по 30 мп, Оптическую ппотность.элюата регистрируют непрерывно с помощью "Увикорд. Получают 5 белковых пиков. В 1 дике фракции, которые имеют активность энда нуклеазы, объединяют (объем 930 мп),Раствор эндонукпеазы,.при рН 7,7 наносят на кананку ДНК"агарозы, уравновеаениую 0,19 М раствором уксусно-"кислого аммония с удельной электропроводностью 4,5-108 см , рН:7,7. Че-рез колонку пропускают 1,0 л раствора0,19 М уксуснокислого аммония с рН7,7 (удельная электропроводность раствора 14,510 8 см ). Скорость элюций10 мп/ч, собирают фракции по 15 мп,Оптическую...

Номер патента: 1613490

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Пустошилова, Шингарева

МПК: C12N 9/22

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...приливают 30 мл смеси,содержащей 212 полиэтиленгликоля и6 Х декстран, 3,45 мл 1 м раствора 40ИаС 1 (до конечной концентрации 38 мМ)и 26,55 мл деионизованной воды, Смесьпродолжают перемешивать в течение15 мин, затем центрифугируют при5000 об/иин в течение 20 мин. Верхнюю Фазу отбирают, разбавляют в 2,5раза буфером А и наносят на колонкус Фосфоцеллюлозой Р 11 (1,5 к 30) см,уравновешенную буфером А. Колонкупромывают 50 мл 0,2 М ИаС 1 в буфере50А, Фермент элюируют линейным градиентом концентрации ИаС 1 от 0,2 до1,0 М в буфере А. Общий объем градиента 200 ил. Скорость нанесения наколонку, промывки и элюции 20 мл/ч.Собирают фракции по 5 ил и анализируют на активность рестриктазы НЬа 1,отбирают аликвоты для испытанияобъемом 5 мкл, Фракции,...

Номер патента: 1645299

Опубликовано: 30.04.1991

Авторы: Крамаров, Матвиенко, Резник, Смирнов, Смольянинов, Сорокулова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/22

Метки: bacillus, cereus, бактерий, продуцент, штамм, эндонуклеазы

...краем, Образование спор начинается через 48-72 ч при вырацивании на1645299 Формула изобретенияПтамм бактерий Вас 111 цз сегеозВКПИ В- продуцент эндонуклеазыВсе 751 1,1Составитель И. ПриваловаТехред М.Дндык Корректор М. Шарошн Редактор С. Лисина Заказ 1.322 Тираж 377 ПодписноеВНИИЛИ Государственного комитета по нзоьретениям н открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина, 101 мясопептонном агаре при 37 С. После роста на глюкозном агаре в протоплазме обнаруживаются глобулы. Рост на жидкой питательной среде характеризуется равномерньв помутнением.физиолого-биохимические признаки. Грамположительные аэробные спорообразуюцие палочки. Продуцируют...

Номер патента: 1661214

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Гимадутдинов, Ожерельев, Перфирьева, Синявина, Тюлина, Шарапов, Юсупова

МПК: C12N 9/14, C12N 9/22

Метки: serratia, бактерий, маrсеsсеns, продуцент, штамм, эндонуклеазы

...(реакционная смесь без Фермента), наодну оптическую единицу за час инкубациив пересчете на 1 мл культуральной жидкости(А 26 о ед/мл/ч).В качестве субстрата используют препараты высокополимерной ДНК из тимуса 5теленка, выделенной по методу Кэя в модификации Бенинга, или коммерческие препараты высокополимерной ДНК,Сравнительная характеристика активности внеклеточной эндонуклеазы штаммов Я,щагсезсепз известных и предлагаемого в качестве продуцента эндонуклеазы на питательной среде следующего состава:Глицерин 5Цитрэт аммония 5Двузамещенный фосфаткалия 10Сернокислый магний 0,5Хлористый натрий 0,5Сернокислое железо 0,025Гидролизат казеина 1Дрожжевой экстракт 3рН среды 7,6для получения эндонуклеазы представленав таблице.П р и м е р 1, Получение...

Номер патента: 1693041

Опубликовано: 23.11.1991

Авторы: Бунина, Смольянинов

МПК: C12N 1/20, C12N 9/22

Метки: luтеus, micrococcus, в-2836, вкпм, культивирования, питательная, продуцента, сайт-специфической, среда, эндонуклеазы

...максимальным концентрациям компонентов. Условия культивирования, как в примере 1. На фиг, 1 рост представлен кривой 2. Как видно по кривым 1 и 2 минимальные и максимальные значения содержания компонентов среды показывают идентичные результаты.П р и м е р 3, Среда с концентрацией компонейтов меньше предлагаемой, мас.ф. гидролизат казеина 1,5; дрожжевой экстракт 2,5; хлористый натрий 0,1; дистиллированная вода остальное, Условия культивирования, как в примере 1. На фиг.1 рост клеток представлен кривой 3. Как видно по характеру кривой 3, в сравнении с кривыми 1 и 2, снижение концентраций компонентов приводит к уменьшению плотности клеток в конце роста.П р и м е р 4. Среда с концентрацией компонентов выше предлагаемой, мас.:...