Речкунова

Номер патента: 1806192

Опубликовано: 30.03.1993

Авторы: Воробьева, Дегтярев, Кривопалова, Репин, Речкунова, Фиш

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: viвriо, vна, бактерий, наrvеyi, продуцент, рестриктазы, штамм

...При исследовании разрушенной биомассы в ней обнаружена и выделена эндонуклеазарестрикции ЧЬа 464 , споСобная узнавать и "0расщеплять последовательность нуклеотидо в 5-СТТААО,Определяющими отличиями предлагаемого штамма ЧЬго Ьагчеу являются:штамм содержит одну рестриктаэу ЧЬа 15464вместо трех в прототипе,продуктивность штамма составляет5000 ед/г (более чем в 15 раз выше, чем уштамма-прототипа).На чертеже представлена электрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фагаферментами А 1и ЧЬа 464 .1-ая дорожка - гидролиз Ат2-ая дорожка - совместный гидролиз АЛи ЧЬа 464253-ая дорожка - гидролиз ЧЬа 464 ,П р и м е р 1. Получение биомассы ивыделение фермента.Перед началом работы клетки штаммапродуцента пересевают бактериологической петлей на...

Номер патента: 1806191

Опубликовано: 30.03.1993

Авторы: Андреева, Беличенко, Дегтярев, Зернов, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: micrococcus, species, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...округлые, край ровный.Физиолого-биохимические свойства. Аэроб, отрицателен по оксидазе, амилазе, аргининдегидролазе и реакции с метиловым красным, не выделяет сероводород и индол, каталазоположителен, не утилизирует малонат, цитрат, мочевину, не восстанавливает нитраты,Содержание ГЦ пар в ДНК - 77 мол. ф, Хранение штамма осуществляют под вазелиновым маслом или в 30 глицерине приС,Выходрестриктазы Мзр 201 3000 ед/г сырой биомассы,На чертеже представлена злектрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фага лямбда ферментами Ваи Мзр 201,1-ая дорожка - гидролиз Ва 12-ая дорожка - совместный гидролиз Ва 1 1 и Мзр 20 13-ая дорожка - гидролиз Мзр 201 П р и м е р 1. Получение биомассы и выделение фермента,Перед началом работы клетки штамма...

Номер патента: 1784642

Опубликовано: 30.12.1992

Авторы: Верхозина, Дегтярев, Дедков, Жилкин, Колыхалов, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, sрнаеriсus-продуцент, бактерий, рестриктазы, штамм

...(1 6-18 ч) клетки подвижные, палочковидные, 0,6 мкм в поперечнике и 1,5-3мкм в длину. Располагаются поодиночке,иногда короткими цепочками, Грамположительные. Клетка способна образовыватьсферическую спору, расположенную терминально и раздувающую спорангий,Физиолого-биохимические признаки.Штамм - строгий аэроб. Каталазоположительный. Не образует кислоту, газ и ацетоиниз глюкозы. Кислоту не образует также изарабинозы, сорбита, рамнозы, сахарозы,. мальтозы, лактозы, глицерина, маннита,этанола. Гидролизует желатин, но не крахмал и твин, Не восстанавливает нитрат внитрит, Не образует сероводород и индол.В аэробных условиях растет на среде изгидролизата кильки при температуре от 4 до40 С (оптимум 37 С), концентрации йаС от0 до 3%...

Номер патента: 1703687

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Богданова, Дегтярев, Речкунова, Цаплина

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...также относится крайне низкий выход целевого продукта - около 100 ед,/г биомассы (4000 ед. из 30 г),Целью изобретения является упрощение процесса и повышение выхода целевого п родукта.Способ заключается в том, что используют штамм термофильной бактерии ТЬегацз гцЬег ВКМ В(ВС), продуцирующий единственную рестриктазу Тгц 201 Г с повышенным ее содержанием, Штамм культивируют на питательной среде, клетки разрушают ультразвуком и проводят очистку фермента путем хроматографий на фосфоцеллюлоэе и гепарин-сефарозе.П р и м е р, Культивирование штамма и получение биомассы.Клетки ТЬеггпцв гцЬег ВСвысевают из ампулы на твердую среду, содержащую 207 О картофельного отвара, 0,57 ь пептона и 0,02 дрожжевого экстракта, инкубируют в течение 1 сут при 60...

Номер патента: 1701745

Опубликовано: 30.12.1991

Авторы: Дегтярев, Малуп, Николаенкова, Репин, Речкунова, Свиридов

МПК: C12N 9/14

Метки: sтrертомyсеs, биомассы, обогащенной, рестрикции, эндонуклеазой

...со скоростью 200 - 220 об/мин, а начиная со вторых суток (с 25 ч) - со скоростью 50 об/мин, что позволяет повысить выход биомасы и целевого фермента.В табл.4 - 5 приведены зависимости выхода биомассы и фермента от времени культивирования и скорости перемешивания гомогенной биомассы.Из табл,4 и 5 видно, что увеличение урожая клеток в первой фазе культивирования(24 ч) происходит при перемешивании со скоростью 200 - 220 об/мин, что связано с эффективным разрушением клеточных ассоциаций, а уменьшение скорости перемешивания до 150 об/мин во второй фазе роста (после 24 ч) способствует увеличению гомогенной биомассы, обогащенной рестриктазой,На чертеже представлены электрофореграммы продуктов гидролиза линеаризованной по Чзр - сайту плазмиды...

Номер патента: 1694647

Опубликовано: 30.11.1991

Авторы: Африкян, Дегтярев, Репин, Речкунова, Хачатурян, Читчян

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, бактерий, вrеvis, продуцент, рестриктазы, штамм

...качалках при 30 С.Недостатками данного штамма (по литературным данным) являются низкий выход фермента, составляющий 3000 ед/г сырой биомассы, а также требовательность к богатым и дорогостоящим питательным средам (выход биомассы не указан). Цель изобретения - выявление штамма ВасИоз Ьгечз - продуцента, синтезирующего рестриктаэу ВЬч 121, способную узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 56(А/Т)6 С(А/Т)Сс более высоким выходом фермента.Штамм выделен из бурой окультуренной почвы в результате систематического поиска штаммов - продуцентов эндонуклеаз рестрикции в роде ВэсИоз и хранится в ВКПМ под регистрационным номером В,Рестриктаза иэ ВасИоз Ьгечз Вследующими признаками.Кул ьтурал ьно-морфологические и ризнаки. На МПА...

Номер патента: 1689400

Опубликовано: 07.11.1991

Авторы: Дегтярев, Пучкова, Речкунова, Серов, Терещенко

МПК: C12N 9/14

Метки: flаvовастеriuм, бактерий, ваlusтinuм, продуцент, рестриктазы, штамм

...неутилизирует. Лизин, аргинин, орнитин и фенилаланин не ферментирует,Отношение к антибиотикам.Культура устойчива к пенициллину, ампициллину,мономицину, неомицину, канамицину, оксациллину, чувствительна ктетрацикливу, стрептомицину, олеандомицину, левомицетину, эритромицину, карбенициллину, линкомицину, гентамицину,.рифампицину.Штамм хранят в лиофильно-высушенном состоянии и на питательном агаре подваэелиновым маслом,Для культивирования Е.Ьацзтпцпч 324применяют питательную среду следующегосостава, дистиллированная вода 1000,0; сухой дрожжевой экстракт 20,0; уксуснокислый натрий 2,0, сернокислый магний 0,2,фосфор н окисл ый калий 2,0. Готовая средаимеет рН 7 Культивирование проводят при 30 С со скоростью вращения качалки 200 об/мин до...

Номер патента: 1687614

Опубликовано: 30.10.1991

Авторы: Богданова, Дегтярев, Каравайко, Приходько, Речкунова, Цаплина

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: ruвеr-продуцент, бактерий, рестриктазы, тнеrмus, штамм

...молоко, разбавленное в 5 раэ, свертывают и пептонизируют, гидролизуют желатин в концентрации 10 и 50%, сероводород, индол и ацетоин не образуют, серу и тиосульфат не окисляют, Бактерии чувствительны к ИаС в среде (1% йаС в среде ингибирует рост бактерий), образуют каталаэу, антибиотики не образуют. Культура способна растворять клеточные стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Минимальная температура роста на агариэованной картофельной среде 40 С, оптимальная 60 С, максимальная 70 С.Культуру хранят в лиофильно высушенном состоянии,Для культивирования Т,гцЬег 9 применяют питательную среду следующего состава, %:Картофельный отвар 20Пептон 0,5Дрожжевой экстракт 0,02рН 7,8 - 8,2, Культивирование проводят при 60 С в течение...

Номер патента: 1686000

Опубликовано: 23.10.1991

Авторы: Дегтярев, Пучкова, Речкунова, Серов, Терещенко

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, sтеаrотнеrморнilus, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...Выход фермента Взз Т не менее 10000 ед, акт,/г влажной биомассы.Полученная рестриктаза Взз Т характеризуется следующими свойствами; узнает и специфически расщепляет последовательность нуклеотидов СС(А/Т)(А/Т)86, оптимальное значение рН для действия рестриктазы 7,5 - 8,0, оптимальная температура действия 50-55 С, оптимальная концентрация МаС 50 мМ.Определяющие отличия предлагаемого штамма В. зееагойегаорЫцз (360) В: высокое содержание рестриктазы Взз Т 1, составляющей 10000 ед.акт./г влажной биомассы (в 5 раз выше), отсутствие патогенности штамма, использование для культивирования микроорганизмов простой дешевой среды.П р и м е р 1. Получение биомассы.Клетки В. з 1 еагойепворЫЬз (360), хранящиеся под слоем вазелинового масла при 40 С,...

Номер патента: 1661213

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Верхозина, Виноградова, Дегтярев, Дедков, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: flаvовастеriuм, аquатilе, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...нить. ОбнаруживаЬтся рост при 15 - 30 С, Оптимальной дляЬоста является 25-30 С. Наблюдается ростпри концентрациях КаС 0 - 1,5 О/ оптимальные значения 0-0,7 О. Оптимальными являются нейтральные значения рН. При рН 5 и9 роста не обнаруживается.Дает активный рост на бульоне Хоттинегра. Требователен к аэрации.Хранение штамма осуществляют подваэелиновым маслом в ЗОО-ном глицеринепри -70 С,Штамм Е,ароайе Всодержит уникальную рестриктазу с ранее неизвестнойспецифичностьо5 -ССС 6 С 3 -666 С 6-5Изобретение иллюстрируется следующими примерами,П р и м е р, Получение биомассы и выделение фермента,Ночную культура Е,/азиате засевают всвежую питательную среду МПБ. Культивируют при 25 С с аэрацией два объема вминуту при 2000 об/мин мешалки до...

Номер патента: 1661212

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Верхозина, Виноградова, Дегтярев, Дедков, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: асinетовастеr, аса, бактерий, продуцент, рестриктазы, саlсоасетiсus, штамм

...6 С вДН К% (по плавучей плотности).Культуральные признаки. 10Дает рост на МПА, при температурномдиапазоне от 5 до 30 С. Оптимальнаятемпература 25 С. Оптимальный рН 7. Растет при 0,5 - 30 йаС. Оптимальная для роста О,б 1 чаС 1. Требователен к аэрации. 15Хранение осуществляют под вазелиновыммаслом в 30%-ном глицерине при 70 С.П р и м е р 1. Получение биомассы ивыделение рестриктазы,Ночную культуру штамма 20А.са 1 соасебсоз засевают в свежую питательную среду, состоящую из 10 г/л триптона ("ОИсо"); 5 г/л дрожжевого экстракта1,"Зегча"); 6 г/л йаС 1; остальное вода. Культивируют при 25 С в термостатированной 25качалке в двухлитровых колбах с 200 млпитательной среды при 200 об/мин до достижения логарифмической фазы роста,Клетки осаждают...

Номер патента: 1650697

Опубликовано: 23.05.1991

Авторы: Дегтярев, Дедков, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, fоrмis, liснеni, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...е ./г биомассы1000 5000 Составитель И,ПриваловаТехред М.Моргентал Корректор М,Демчик Редактор Н,Гунько Заказ 1583 Тираж 374 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж. Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина, 101 глюкозы образуют кислоту, Гидролиэует крахмал, казеин, желатин, твин, Дезаминирует аргинин. Сероводород и индол не образует. Восстанавливает нитрат в нитрит, Чувствителен к ампилициллину, хрорамфениколу, канамицину, стрептомицину, тетрациклину (100 мкг/мл среды 1), Используют глюкозу в качестве единственного источника углерода и энергии для роста, Растет при 10 - 55 С, оптимум 37 С, рН среды 6 - 8, оптимум рН...

Номер патента: 1645300

Опубликовано: 30.04.1991

Авторы: Андреева, Дегтярев, Кривопалова, Пучкова, Речкунова, Селина, Серов

МПК: C12N 1/14, C12N 9/14

Метки: fradiae, sтrертомyсеs, продуцент, рестриктазы, штамм

...нуклеотидов ССССО;оптимальное значение рН для действиярестриктазы 7,5-8,0; оптимальная температура действия 37 С, активностьо сохраняется также при 50 С; оптимальоная концентрацияионов Ия ф 5-15 мИ.БаС 1 50 мИ.Электрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фага Ф С 1 857 рестриктазамиБЕг 1 и Бас 11 и Бас 11 показывает,что картина гидролиэа полностью совпадает как при параллельном, так исовместном гидролизе. Следовательно,рестриктаэа Бйг 1 является изошиэоме,ром рестриктаэы Бас 11, узнает и расцепляет последовательность нуклеотидов СССССС,П р и м е р 1. Получение биомассыБ. йгаЫае 303, Клетки Б. йгайае 303,храняциеся в ЗОХ-ном растворе глицерина в, питательной среде при -20 С,овысевают на чашку с плотной питательной...

Номер патента: 1645293

Опубликовано: 30.04.1991

Авторы: Дегтярев, Корсун, Пучкова, Речкунова, Серов

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: faecalis, sтrертососсus, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...при температуре 30 С с хорошей аэрацией допоздней логарифмической фазы роста.Выход влажных клеток составляет 2,43,0 г/л питательной среды,Выход фермента составляет 2000 ед.акт./г сырой биомассы, что более чемв 3 раза выше, чем известногоПолученная рестриктаза Бйа Б 1характеризуется следуккнми свойствами,"узнает и специфически расщепляет 45последовательность нуклеотидов ССАТС%/ 9 фоптимальное значение рН для действия рестриктазы 7,2;оптимальная температура действия37 С;оптимальная концентрация ионовИаС 1 - 150 шИ, М 8 С 1 - 5-15 шИ.Фермент стабилен в течение не менее 6 мес,. при температуре -20 С, своо55боден от примесей неспецифическихэкэо- и эидонуклеаз, фосфатаз.Изобретение иллюстрируется следующими примерами. П р и м е р 1....

Номер патента: 1632974

Опубликовано: 07.03.1991

Авторы: Дегтярев, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: vulgaris-продуцент, бактерий, рrотеus, рестриктазы, штамм

...р 1. Клетки Ргогеця чц 1 вагя 84 бактериологической петлейпересевают на чашки Петри с агаризованной средой (на основе 3,5%-ногорыбного гидролизата), содержащей1% ную Донорскую кровь Чашки с за 40сеянной культурой инкубируют в термостате при 30 С 16 ч. Подросшую культуру переносят в жидкую питательнуюсреду следующего состава: рыбный гидролизат 3,5%, вода дистиллированная 45остальное, рН 7; 2. Культивированиеосуществляют в термостатированныхкачалках при 30 С; .200 об./мин, достационарной фазы роста,Глубинное культивирование проводят вферментере "МсгоГегш" в анаологичной среде при 30 С, аэрации 1объем в минуту, 200 об./мин мешалки.В течение культивирования следят заподдержанием рН и оптической плотностью, При достижении ранней стацио...

Номер патента: 1532584

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Галимбаева, Дегтярев, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/14

Метки: iммотuм, бактерий, вrеviвастеriuм, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Натана и Смита,Штамм также содержит рестриктазу ш 11, которая является изошизомеом Взр В. Т.Ферменты Вып 1 и Впп 11 хорошо тделяются друг от друга при хроатографии на фосфоцеллюлозе Р, то позволяет получить препараты бонх ферментов без взаимных примеей.Сравнение электрофоретической одвижности фрагментов, получаемых ри гидролизе ДНК фага Ь рестриктазой 40 ып 1 с электрофоретической подвижностью фрагментов известной длины ,(Игц 1 гидролизат ДНК фага ) позволяет определить длину фрагментов Мв 1 гидролизата. Получаемый набор врагментов совпадает с набором фрагМентов, соответствующим гидролизу ДНК фагапо последовательности ТТССАА.Таким образом, фермент Вш 1 , узнает и гидролизует пбследователь,ность нуклеотидов ТТССАА и являетсяизошизомером...

Номер патента: 1532583

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Галимбаева, Дегтярев, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/14

Метки: dеniтrifiсаns-продуцент, paracoccus, бактерий, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...узнает и специфическ расщепляет последовательность нукле 0тидов ССМСС; оптимальное значение рНя действия рестриктазы 7,5-9,0;птимальная температура действия 37 С;я активности рестриктазы требуютсяОны МО Оптимальная концентрация-15 мМ.Для культивирования Раг.реп В рименяют питательную среду следуюего состава, г/л дистиллированной воы; триптон 10, дрожжевой экстракт 40соКультивирование проводят при 30 С( хорошей аэрацией в течение 2 сут.1 ыход биомассы 2-3 г/л культуральнойжидкости. Выход рестриктазы Рйе 12 1: 45:000 ед/г биомассы. П р и м е р , Клетки Раг. Йеп., :ранящиеся в 50 .-ном глицерине в Ь- бульоне при-20 С высевают на чаш- У с 1. А. После 2 сут инкубирования50 1 ри 30 С клетки собирают петлей и носят в 100 мл В и выращивают до...

Номер патента: 1518372

Опубликовано: 30.10.1989

Авторы: Дегтярев, Иванова, Рассказов, Репин, Речкунова, Шевченко

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: 21-продуцент, bacillus, rse21, species, бактерий, сайт, специфической, штамм, эндонуклеазы

...маслом,ов растворе глицерина - при -70 Г ив лиофильно высушенном состоянии,Физиологические признаки,Хемоорганотроф. Каталазоположи"тельный, оксидазоотрицательный. утилизирует лактозу, сахарову, мальтоэу,арабинозу, глюкозу, галактозу, маннит. Не утилизирует раннозу, ксилоэу,дульцит сорбит, Реакция Фогео-Проска 35уэра отрицательная, Разжижает желати-.ну и крахмал.Для культивирования Васд 11 цзврес 1 ез 21 Вприменяют питательную среду следующего состава, г/лдистиллированной воды:ГидролизаткилькиИаС 1Вода дистиллированная ОстальноеоКультивирование проводят при 30 Ги интенсивной аэрации до достижениястационарной фазы роста.Выход биомассы: 2,0-3,0 г сыройбиомассы с 1 л питательной среды.Выход целевого фермента: 3000 ед/гбиомассы с...

Номер патента: 1440919

Опубликовано: 30.11.1988

Авторы: Дегтярев, Жилкина, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/16

Метки: zopfii-продуцент, бактерий, кurтнiа, кzо, рестрикционной, штамм, эндонуклеазы

...последовательность нуклеотидов САТС; оптимальное значение рНдля действия рестриктаэы 7,5-90;оптимальная температура действия37 С; для активности рестриктазы требуются ионы Мя , оптимальная концен 2трация 5-15 мМ,П р и м е р, Получение рестриктазыКго 91 иэ Кцг 1 Ь 1 а горГ:( 9. Клетки Кцг 1,111 а гор 11 9, хранящиеся в 503-ном глицерине в Ь-бульоне (ЬВ) состава, г: триптон 10, дрожжевой экстракт 5, ИаС 1 10, вода до 1 л прио20 С, высевают на чашку с Ь-агаром, После 2 сут инкубирования при 30 С клетки собирают петлей и вносят в 100 мп ЬВ и выращивают до плотности 1,5 при 30 С.Затем культуру вносят в 2 л ЬВ ивыращивают до плотности 2,5 при 30 С.После охлаждения клетки собираютцентрифугированием, Выход биомассы2 г...