Способ выделения эндонуклеазы из культуральной жидкости sеrrатiа маrсеsсеns

рф фф СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК(51) гг олы. и рН 5 0 5 5 и 0-8,5 в присутристого натрия. окарб Д800 вновешивают щ буфером рН 5, диаметром 25- альной жидкости продукта пр при рН 8-0,40 М хло е р 1. Гл целевого цесорбци ствии О,П р и (по сухо О, 10 М нат пере 30 с з касаетс астности эндонукл получения фермен неклеточной бакт ологииов, в зь риальноиЦельюние и усСпосокультураоснован ия является упро ч весу) ура ий-ацетатньв колонкул культур концентрир орН 5,2 и коростью 60 зобретрение м роцесса.ия эндонуккости Б.гпа еазы из сеясеп выделеьной жи мещают м, 100 исляют ованной уксусной наносят на сормл/см" ч (около бменну атионо то катио а том, афию пБиок водят наб Дс кислотои бент со роматобменни орбцией ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР(71) Казанский государственный университет им.В.И.Ульянова-Ленина, Вышневолоцкий завод ферментных препа ратов и Институт высокомолекулярных соединений АН СССР(56) Уопешцга К., Магяцшосо К., Маес 1 а Н. 1 яо 1 аг 1 оп апй СЬагасе а 1 оп оЕ Ицс 1 еаяе алгол С 11 пьса 1 1 яо 1 аге ог Бегга 11 а шагсеясепя. .1, В 1 осЬещ., 1983, . 93, Р 5, р. 1287.Авторское свидетельство СССР Р 537512, кл. С 12 И 9/10, 1972. тение относится к биотех(54) СПОСОБ ВЬГЕЛЕПИЯ ЭНДОНУКЛЕАЗЫИЗ КУЛЬТУРАЛЪНОЙ ЖИДКОСТИ БЕККАТ 1 АМАКСЕБСЕМБ(57) Изобретение предназначено длялечения и профилактики вирусногопаралича пчел, для изучения структурыхроматина, может служить моделью дляисследования влияния одновременногоналичия сульфгидрильных и дисульфидных групп на конформационные переходымолекул, Цель изобретения - упрощение и ускорение процесса. Способ выделения эндонуклеазы из культуральнойжидкости Б.шагсеясепя включает катионообменную хроматографию на биокарбес сорбцией фермента при рН 5,0-5,5и десорбцией при рН 8,0-8,5 в присутствии 0,35-0,40 М хлористогонатрия. Способ. позволяет за 40-45 чиз 100 л культуральной жидкости выделить 70 в 1 г препарата, содержащего 7-14 г белка, без уменьшениястепени чистоты препарата с сокращением времени выделения фермента в8-10 раз и упрощением процесса исравнению с известным. 1 з.п. ф1477742 Формула изобретения 1,. Способ выделения эндонуклеазы из культуральной жидкости Беггаха шагсезсепз, включающий очистку методом ионообменной хроматографии, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и сокращения длительности процесса, ионообменнрй хроматографии подвергают непосредственно культуральную жидкость, а ионообменную хроматографию проводят на катионообменнике Биокарб Дс сорбцией целевого продукта при рН 5,0-5,5 и десорбцией в буфере при рН 8,0-8,5 в присутствии 0,35- 0,40 М хлористого натрия.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что для десорбции в качестве буфера используют 0,1 М трис-НСТ. Составитель А. СеменовРедактор А. Гунько Техред А.Кравчук Корректор Э.Лончакова Заказ 2316/25 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 30 л/ч) при соотношении белок:сорбентне более 700 ед. АО . 1 см бискарба, По завершении сорбции колонкупромывают 25,5 л (15-кратный объем)0,05 М трис-НС 1 буфера, рН 8,5. За 5тем элюируют фермент 8,5 л (5-кратныйобъем) О, 10 М трис-НС 1 буфера рН 8,5,содержащего 0,40 М хлористого натрия.Полученный элюат высушивают при дроб Оном режиме. При этом выход ферментасоставляет 65-703, активность неменее 30000 ед,акт./мг белка. Из100 л культуральной жидкости удаетсявыделить более 100 г препарата, содержащего более 10% белка.П р и м е р 2. Биокарб Д:уравновешивают 0,10 М натрий-ацетат-ным буфером, рН 5,0 и помещают вколонку как в примере 1. Культуральную жидкость подкисляют концентрированной уксусной кислотой до рН 5,0и помещают на колонку как в примере 1. Сорбция эндонуклеазы составляет90-95 Х, Промывку колонки и элюцию 25фермента проводят как в примере 1.При этом выход фермента составляет60-652, активность около 25000 ед.акт.//мг белка,П р и м е р 3. Биокарб Дуравновешивают О, 10 М натрий-ацетатнымбуфером, рН 5,5 и помещают в колонкукак в примере 1, Культуральную жидкость подкисляют концентрированнойуксусной кислотой до рН 5,5 и помещают на колонку как в примере 1. Сорбция эндонуклеазы составляет 40-87",.Промывку колонки и элюцию Ферментапроводят как в примере 1. При этомвыход фермента составляет 35-657, ак 4 Отивность около 30000 ед.акт./мгбелка,П р и м е р 4. Биокарб Дуранновешивают и помещают в колонку какв примере 1. Культуральную жидкостьнаносят на колонку как в примере 1. Промывку колонки проводят как в примере 1. Фермент элюируют 0,1 Мтрис-НС 1 буфером, рН 8,0, содержащим0,35 М хлористого натрия. При этомвыход фермента составляет 60-657.,активность, более 30000 ед,акт,/мгбелка,П р и м е р 5. Биокарб Д уравновешивают и помещают а колонкукак в примере 1. Культуральную жидкость наносят на колонку как в примере 1, Промывку колонки проводят какв примере 1. Фермент элюируют 0,1 Мтрис-НСТ буфером рН 8, 5, содержашим0,35 М хлористого натрия. При этомвыход фермента составляет 65-707,.активность более 30000 ед.акт./мгбелка,При осуществлении способа в условиях, отличающихся от описанных, выход целевого продукта снижается,Реализация способа обеспечиваетупрощение и ускорение процесса,