Патенты с меткой «эндонуклеазы»

Номер патента: 431214

Опубликовано: 05.06.1974

Авторы: Генетики, Институт, Панфилова

МПК: C12N 1/20, C12N 15/01, C12N 9/16 ...

Метки: bacterium, marcescens, prodigiosum, serratia, в-ю, неспецифической, продуцент, штамм, эндонуклеазы

...серина и лизина. Из глюкозы, сахарозы, мальтозы, маннита образует кислоту, на лактозе кислота не образуется,Нитраты восстанавливает до нитритов.Оптимальный режим роста: температура 28 - 30 С, рН среды 6 - 8. При выращивании на пептонной среде штамм образует до 3600 ед внеклеточной эндонуклеазы на 1 мл культуральной жидкоП р и и е р. Штамм В. ргойроэцгп ВМвыращивают на скошенном мясо-пептонном агаре в течение 24 час, суспендируют в физиологическом растворе до плотности 1 1 Оа клеток/лгл и инокулируют в 20 мл пептонной среды в количестве 1 10 т клеток/мл среды, Инкуоируют в колбах Эрленмейера,на 100 мл в течение 65 - 70 час при 30 С. Через 16, 25, 26 - 29, 39 - 40, 47 и 64 час, отоирают по 0,5 мл культуральной жидкости и определяют...

Номер патента: 735594

Опубликовано: 25.05.1980

Авторы: Сенженко, Старостина

МПК: C07G 7/02

Метки: иммобилизованной, эндонуклеазы

...5-10 С ио рН 7,0. При гидролиэе РНК в проточной колонке в течение 15 дней ферментный препарат полностью сохраняет свою первоначальную активность в при гицролиэе ДЯК в реакторе с перемешиввнием эа это же время активность препарата падает незначительно, на 10%.П р и м е р 1. К 50 г влажной АЭ-целлюлозы добавляют 150 мл 25%-ного глутарового вльдегида и 250 мл дистиллированной воды. Смесь перемешимют лри комнатной температуре в течение 2-х ч. Затем актнвироввнную АЭ-целлюлозу промывают 0,2 М раствором ИаС 9,. К 50 г влажной вктивированной АЭ-целлюлозы добавляют 110 мл водного раствора . эндонуклеазы, содержащего 1740000 ед,акт, (зв единицу эндонуклевзной активности принимают количество фермента, вызывающее увеличение поглощения...

Номер патента: 767197

Опубликовано: 30.09.1980

Авторы: Ванеева, Грубер, Народицкий, Семина, Цветкова

МПК: C12D 13/10

Метки: бактериальной, эндонуклеазы

...с 2 л среды (на 2 л среды - 100 мл посевной культуры). Культуру выращивают трое суток при тех же условияЪ )культивирования, Температура культивирования 27-28 , Отделение биомассы йроводят центрифугированйем. Ко нечный выход биомассы составляет 37-40 г/л. Выращивание в предлатки препарата и отсутствия в немнеспецифических эндонуклеаз и экэонуклеаэной активности. Характерис.тика Фермента ЯаР 1 приведена в табл,1, в табл. 2 приведейа характериСтикаего стабильности, Удельная активностьпрепарата составляет О, 5 мкл/Ц ДЙК,т.е. 1 мл-препарата содержит 2 тыс.условных единиц активности. Иэ 5 гбиомассы получают 25-30 тыс. Условных единиц активности Фермента10 (см. табл,1). Фермент может хранитьсяв течение б месяцев без измененияего удельной...

Номер патента: 908793

Опубликовано: 28.02.1982

Авторы: Баев, Бурьянов, Косых

МПК: C12N 1/02

Метки: 2124, ecor11, в834, еsснеriснiа, несущий, плазмиду, рестрикционной, субстрат, тест, штамм, эндонуклеазы

...так в органической форме в виде пептона, аминокислот, Нитраты восстанавливает донитритов.40Желантину не разжижает.Урсазная активность не обнаруживается.Индол не образует,Проявляет устойчивость к антибиотикам -ампициллину (25 мкг/мл).П р и м е р 1. Выледение плазмидной45ДНК,Клетки, содержащие плазмиду, выращиваютв 500 мл бульона до плотности 0,6 (ФЭК,светофильтр Мф 6, кювета 0,5 см). Затемклетки собирают центрифугированием (600020 мин) суспещируют в 4 мл 25%-нойсахарозы в 50 мм трис-НС 1, РН 3,0,добавляюз 1,2 мл лизоцима (1 О мг/мл) иинкубируют И мин во льду при перемешивании,К смеси добавляют 2,4 мл 0.25 М ЭЛТА55(р Н 8,01, оставляют во льду на 10 мин, аэмем попзяляюг последовательно 2,6 мл 5 МРастдора ЧаС и 1,2 чл А-ного расгвора...

Номер патента: 1025725

Опубликовано: 30.06.1983

Авторы: Соколова, Юсупова

МПК: C12N 9/22

Метки: 24-продуцент, бактерий, штамм, эндонуклеазы

...г/л:Глицерин 5,0Цитрат аммония 5,0 45ДвузамещенныйФосфат калия 10,0Сернокислый магнийХлористый натрий измеряют оптическое поглощение приСернокислое 260 нм на спектрофотометре Сф,железоГидролиэатказеина 1,0Дрожжевойэкстракт 3,0рН среды 7,6.3 10257254пересчете на 1 мл культуральной жид-Сравнительная характеристика акти. кости (, Аоед/мл/ч), вности внеклеточной эндонуклеазыВ качестве субстрата используют штаммов БеггаСа щагсесепя иэвестпрепараты высокойолимерной ДНК, вы- ных и предлагаемого в качестве проду деленной из тимуса теленка .по методу 5 центов нуклеазы на известной питаКэя в модификации Бенинга или коммер- тельной среде для получения нуклеазы ческие препараты высокополимерной ДНК. представлена в таблице. Активность...

Номер патента: 537512

Опубликовано: 30.01.1984

Авторы: Полидорова, Салганик, Сенженко, Старостина

МПК: C12N 9/10

Метки: выделения, эндонуклеазы

...А и концентрированием раствора фермента.С целью повышения выхода целевого продукта и его степени чистотыхроматографию осуществляют на полистирольной анионообменной смолетипа АВ 17.Способ выделения и очистки эндонуклеазы из культуральной жидкостиЯегга 11 а вагсезсепз штамма В 10 М 1и 10 осуществляют следующим образом.Выращивание проводят по известной методике, Для этого 2 лкультуральной жидкости, содержащей300 ед, акт./мл эндонуклеазы (заединицу активности эндонуклеазыпринимают прирост оптической плотности в кислоторастворимой фракциица 1 единицу оптической плотности,измеренной при 260 нм, за 20 мин 30при 37 С), 0,1-0,2 от активностиэндонуклеазы ФМЭ и 1-2. от активности эндонуклеазы ФДЭ, центрифугируют, к супернатанту добавляют(Ю) ЯО до...

Номер патента: 1108106

Опубликовано: 15.08.1984

Авторы: Ансберга, Ничаев, Хейслере, Чикаев

МПК: C12N 9/16

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...фракционированиеполученного лизата центрифугированием, хроматографию и диализ, разрушение,клеток проводят смесью лизоцимаи тритона Х 100 (10:1), а клеточныекомпоненты фракционируют в двухфазной системе, содержащей 7,0-7,5-ный 45полиэтиленгликоль мол,в, 6000 и 2,02,1-ный декстран Т 500 при рН 6,06,5 в присутствии 0,50-0,52 М МаС 1.Способ осуществляют следующимобразом, 50Биомассу Могахе 11 а ярес 1 ея лизируют с помоцью лизоцима в присутствии тритона Х 100, затем фракционируют в двухфазной системе полиэтиленгликольдекстран (конечная концентрация в смеси полиэтиленгликоля557; декстрана 2," ИаС 1 0,5 М; рН 6,3)После тщательного перемешиваниясмеси и последующего центрифугирования отбирают верхнюю фазу, содержащую целевой продукт, наносят на...

Номер патента: 1114700

Опубликовано: 23.09.1984

Авторы: Беляева, Горовиц, Ежов, Крюкова, Ли, Лузина, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...а со 11, Бггар 1 ту 1 ососсцяацгецв, Ргогецв щ 1 даг 1 в),При исследовании некоторых мутантов Еясйег 1 сЫа со 11, устойчивых к Тр, показано два типа устойчивости, В одном случае устойчивость объясняз 11147ется повьппенным синтезом дигидрофолатредуктаэы мутантом по сравнению сдиким штаммом, в другом случае - несколько измененными свойствами дигидрофолатредуктазы у мутанта. 5В результате клонирования структурного гена, кодирующего дигидрофолатредуктазу фага Т 4 в плаэмидныйвектор рИК 322, получена рекомбинантная плазмидная ДНК рВК 322 Ггд. В 1 Оплазмиду рВК 322 интегрирован Нпд 111фрагмент фага Т 4 размером 1, 1 тыс.пар оснований, содержащий структурныйген дигидрофолатредуктазы. Введениеплазмидной ДНК рВК 322 Ггд в бактери альные клетки...

Номер патента: 1120019

Опубликовано: 23.10.1984

Авторы: Дебов, Карташова, Никольская-Санович, Сучков, Упорова

МПК: C12N 15/00

Метки: сайт-специфической, эндонуклеазы

...интерферирующих ферментов - неспецифических эндо- и экзонуклеаз. Изоэлектрофокусирование проводится в градиенте плотности,глицерина,.что позволяет опустить обычнуюпри выделении рестриктаз заключительную 19 4стадию стабилизирующего диализа с сохранением активности рестриктазы ЕсоВ в течение года.Целью изобретения является повышение чистоты зцдоцуклеазы ЕсоВ 1,Цель достигается тем, что согласно способу получения сайт-специфической эндонуклеазы ЕсоВ 1, включающему культивирование штамма Е.СоВ У 13, разрушение клеток, очистку фермента, очистку фсрмецта ведут путем хроматографии субстрата на голубой сефарозе с последующим изоэлектрофокусированием при рН 3,510 в градиенте плотности глицерина О, - 60% и отбором фракций прир 1 7,7-8,0.П р и м...

Номер патента: 1130602

Опубликовано: 23.12.1984

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидная, плазмидной, рекомбинантная, рестрикции, штамм-продуцент, эндонуклеазы

...цитритов. Желатцну не разжижают.Уреаэцая активность не обнаруживается. Ицдол не образуют.Устойчивость к антибиотикам. Проявляет устойчивость к ампициллину.Генетические признаки штамма:1 фЕсо НФ спи Есо цугес ВСэЪсВ,Г , гпу 1, 1 еп 6, рго А 2, Ьз 4,ГМ 1, агд Е, 1 ас 41, да 1 К 2, ага 14ху 1 5, шег, еэх.П р и м е р 1. Конструированиерекомбцнантной плаэмидцой ДНК р 1 ЬНЧ 86.Плазмцдную ДНК рЬКч 8 вьсцеляютиз штамма ВКИ ВД по методу(С 1 еюе 11, Не 1 пе 1 су, 1969, РНАЯ, 62,1159-1163) .2 мкг выделенной ДНК гидролиэуютрестриктазой Нжд 111 в 100 мкл раствора, содержащего 50 мИ трис-НС 1,рН 7,8, 10 мМ МИКСТ , 2 мМ 2-меркаптоэтанола, 20 мИ ИаС 1 при 37 ОС 1 ч.После прогревания реакционной смесипри 65 ОС в течение 10 мин проводятчкольцевание"...

Номер патента: 1074139

Опубликовано: 30.12.1984

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рекомбинатной, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...1159-1166).Рестрикционный анализ выделеннойплазмиды р 1 ЬКЧ 7 проводят. с помощьюэндонуклеаз Р 11,ВфИ,Есор .На втором этапе в полученную плазмиду Р 1 йЧ 74 вводят область иммуни-,тета фагас промотором ранних генов Рг и термочувствительным репрессором. Для этого выделяют ДНК фагас 1857 по методу (А,Р. Ка 1 яег,Нояпея 0.8. 1960, /, Мо 1 В 1 о 1392-415),мкг ДНК плазмиды р 1 ЬКЧ 7 и4 мкг ДНК фага 3 с 1 857 инкубируют вбуфере А (2 О мМ Трис-НС 0 рН 7,6,10 мМ МС 12,10 мМ дитиотреитола) сэндонуклеазной рестрикции Вд 1 11Гидролиз проводят в течение часапри 37 С, после чего гидролизат проверяют электрофорезом в О,97 агарозе в ацетатном буфере. ФрагментыДНК фага Л с 1857 (2 мкг) смешивают с линейной ДНК плазмидыр 1 РЧ 7 й (О, 2 мкг), добавляют...

Номер патента: 1040791

Опубликовано: 07.02.1985

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Физической структурыплазмидную ДНК выделяют ускореннымметодом (К 1 е 1 п Р,1 ейа 1, 1980,Р 1 азтпЫ, 8, 88-93) .Рестрикционный анализ проводят спомощью эндонуклеаз Р-1, Вя 1 11,11, Отобранные. клоны проверяютна присутствие системы рестрикциимодификации Есо 87. Для этого сравнивают эффективность посева (э.п.)фага; 0 на клетках, содержащихрекомбинантные плазмиды, а такжештаммах С 5183 (гь. -где ) и ) С 5183( г т+ ) с плазмидой рЬ 13. Наличие в клетках модификации устанавливают при снижении э.п. методом(Т. Ага, А.Ао 1 с 1, 3.Васй. 5, 18,1962) . Полученные данные представлены в табл. 2,Как видно из табл. 2, штамм3 С 5183/С 113 на четыре порядка ограничивает размножение фага Ъ0по сравнению со штаммом 1 С 5183( ГО ), не несущем плазмидуу...

Номер патента: 1040794

Опубликовано: 30.05.1985

Авторы: Золотова, Калинин, Лапаева, Лунин, Тихоненко

МПК: C12N 15/00, C12N 9/22

Метки: 4994-продуцент, сайт-специфической, штамм, эндонуклеазы

...(картофельно- глицериновый агар) . Колонии серого цвета, блестящие, с гладкими краями, через 24 ч достигают 1,0 мм в диа метре. Гемолиз не выявлен.Среда КУА (казеиново-угольный агар), Колонии серовато-креиового , цвета, вязкой консистенции, с гладкими краяии, через 24 ч достигают 50 1,0 им в диаметре, Пигмент не выявлен.Пептонный агар "Мясо". Колонии кремового цвета, вязкой консистенции, через 24 ч достигают 1,5-2,0 мм в диаметре. 55Жидкая питательная среда типа Коен-Уилер. Аэробные условия выращивания, Растет при покачивании, Среда 794 гне окрашивается. Микробная взвесь серовато-белого цвета.Физиолого-биохимические признаки. Усваивает .органические соединения. Оптимальная температура роста 33-36 С. В качестве источников азота,...

Номер патента: 1095645

Опубликовано: 07.09.1985

Авторы: Вайткявичюс, Пунтежис, Янулайтис, Яскелявичене

МПК: C12N 15/00, C12N 9/14

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...инкубации 2 Ов термостатепри 37 С образует круглые с ровными краями колонии 1,5 ммв диаметре, Колонии гладкие, с агаром не срастаются, желтоватогоцвета, В мясо-пептонном бульоне образует мутность. Оптимальная температура роста 37 С. При 45 С обычноВне растет. Грамположительные, каталазоположительные, Строгий аэроб.Желатину гидролизирует, Глюкозу иксилозу окисляет. Нитраты восстанавливают в нитриты, Резистентный к новобиоцину )2,0 мг/мл, Клетки неподвергаются лизису с лизоцимом приконцентрации его 100 мг/мп. Культурахранится в пробирках на среде МПА подовазелиновым маслом при +4 С,Полученная эндонуклеаза Мча 1 характеризуется следующими свойствами:узнает и специфически расщепляетпоследовательность 5 СС(А/Т)СС в молекуле ДНК;оптимальное...

Номер патента: 1190642

Опубликовано: 30.12.1986

Авторы: Бунина, Крамаров, Мазанов, Матвиенко, Пачкунов, Смольянинов

МПК: C12N 15/00, C12N 9/00

Метки: используемый, качестве, продуцента, сайт, специфической, штамм, эндонуклеазы

...в термостате при 32 С образуются круглые колооиии 0,5-1,5 мм в диаметре, блестящиес ровными краями, гладкие, влажные,выпуклые, пастообразные, бесцветные,легко снимаются и размазываются потвердой поверхности. Рост на жидкойпитательной среде характеризуетсяравномерным помутнением. Хорошорастет на минеральной среде. Оптиомальная температура роста 30-37 С.При 3, 5, 10, 20 и 65 С культуране растет. При 25 и 50 С рост слабый.Физиолого-биохимические признаАэроб. Желатину разжижает,индол не образует, при росте вьщеляет сероводород. Хорошо усваивает глюкозу и ксилозу с образованием кислоты, Усваивает инозит, лактозу, фукозу, сорбит, мальтозу, дульфит, маннозу, маннит, рибозу Не усваивает саха- . розу и арабинозу, Минимальный рН 5,2,...

Номер патента: 1294824

Опубликовано: 07.03.1987

Авторы: Крамаров, Прохорова, Смольянинов

МПК: C12N 15/00

Метки: конструирования, плазмида, продуцент, рекомбинантная, сайт-специфической, штамм, эндонуклеазы

...роторе 50,2 Тх. Зону, соответствующую сверхспиральной ДНК, отбирали, бромистый.этидий экстрагировалиизопропанолом, плазмидную ДНК осаждали этанолом, осадок растворяли в0,5 М ИаС 1 и дополнительно очищалиДНК-хроматографией на колонке с Биогелем А, Фракции, содержащиеДНК, объединяли, ДНК осаждали добавлением 2 объемов этанола, осадок отделяли центрифугированием, растворяли в НО и в таком виде использовалив дальнейшем. ДНК Р. стц 1 яаг 3.з выделяли после лизиса клеток лизоцимом,. как описано вьппе, с последующей фенольной деротеинизацией. После обработки фенолом водную фазу, содержащую ДНК, диализовали против 0,01 Инатрий-цитратного буфера (рН 7,5)инкубировали 5 ч при 25 С 50 мкгпанкреатической РНК-азы, затем вновьобрабатывали равным...

Номер патента: 1306127

Опубликовано: 30.01.1988

Авторы: Крамаров, Мочалов, Смольянинов

МПК: C12N 9/00

Метки: выделения, сайт-специфической, эндонуклеазы

...дана в таблице. Изобретение относится к областибиотехнологии, в частности к получению сайт-специфических зндонуклеаз,предназначенных для создания реком 5бинантных молекул ДНК, анализа первичной структуры ДНК, создания банков генов.Целью изобретения является увеличение выхода сайт-специфической эндонуклеазы С 1 а, 1 и повышение степениочистки ее от примесей,Способ осуществляют следующим образом.Приготовление носителя с иммобилизованным цибакроновым синим УЗСА.20 мл сефарозы С 1 4 В суспендируют в30 мл НО, добавляют 110 мг красителя УЗЛА, затем раствор 4 М 11 аСХ доконечной концентрации 0,4 М, объемпри этом доводят до 45 мл, После20 мин механического перемешиваниясмеси добавляют 0,2 мл 5 М ИаОН иинкубируют при 62 С. Проверяют количество...

Номер патента: 1406160

Опубликовано: 30.06.1988

Авторы: Белавин, Дегтярев, Малыгин, Репин

МПК: C12N 9/16

Метки: flаvовастеriuм, fок1, океаnокоiтеs, рестрикции, эндонуклеазы

...1 гВода 10 млВсе растворы стерилизуют в автоклаве при 121 С 40 мин, затем сливаютов стерильных условиях непосредственно перед приготовлением питательной среды.Клетки бактерий подращивают на твердой питательной среде при 28 С в течение суток, затем готовят инокулят для засева ферментера. Объем инокулята 1/10 часть от объема Ферментера. Культивирование проводят в феро ментере (объем 20 л) при 28 С и аэрации 20 л/ч. Величина рН в процессе роста поддерживается автоматически на уровне 7,2 добавлением 0,2 н, ИаОН.Клетки выращивают до стационарной .фазы (оптическая плотность 2,5 при =550 нм). Клетки собирают центрифугированием при 5000 х 8 в течение 10 мин. Выход биомассы 3,5 г/л.Выделение и очистка рестриктазы.Все процедуры по выделению...

Номер патента: 1440919

Опубликовано: 30.11.1988

Авторы: Дегтярев, Жилкина, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/16

Метки: zopfii-продуцент, бактерий, кurтнiа, кzо, рестрикционной, штамм, эндонуклеазы

...последовательность нуклеотидов САТС; оптимальное значение рНдля действия рестриктаэы 7,5-90;оптимальная температура действия37 С; для активности рестриктазы требуются ионы Мя , оптимальная концен 2трация 5-15 мМ,П р и м е р, Получение рестриктазыКго 91 иэ Кцг 1 Ь 1 а горГ:( 9. Клетки Кцг 1,111 а гор 11 9, хранящиеся в 503-ном глицерине в Ь-бульоне (ЬВ) состава, г: триптон 10, дрожжевой экстракт 5, ИаС 1 10, вода до 1 л прио20 С, высевают на чашку с Ь-агаром, После 2 сут инкубирования при 30 С клетки собирают петлей и вносят в 100 мп ЬВ и выращивают до плотности 1,5 при 30 С.Затем культуру вносят в 2 л ЬВ ивыращивают до плотности 2,5 при 30 С.После охлаждения клетки собираютцентрифугированием, Выход биомассы2 г...

Номер патента: 1449583

Опубликовано: 07.01.1989

Авторы: Бендукидзе, Вайткявичус, Дегтярев, Петров, Приходько, Репин, Фодор

МПК: C12N 9/16

Метки: bacillus, suвfilis, бактерий, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...расщеплять послед вательность нуклеотидов 5 ССАТ. Глубинное культивировао ние проводят при 30 С и аэрации -объема в минуту на питательной ср е, содержащей, г/л воды гидроли ат кильки 40, ИаС 1 20 до достиже я форы замедления роста. ВМход ре триктазы 300000 единиц на грамм би массы, 25Используемый штамм В. вцЫ 1 Ы (15) ВК 1 М Вполучен в результате целенаправленного поиска штаммов - продуйентов рестриктаз,;Штамм ВасП 1 цв вцЬ 11 ь.в (15",П р и м е р 1. Получение рестриктазы Ввц 15 1.Штамм В. вцЬСх 1 ьв (15) поддерживают в пробирках на агаризованной среде под вазелиновым маслом. Для оживления штамм пересевают на чашки Петри с агаризованной средой; содержащей, г/л: гидроливат кильки 40, БаС 1 20 (среда 1), агар 15, и инкубируют при 37 С в...

Номер патента: 1477742

Опубликовано: 07.05.1989

Авторы: Гребеньков, Жбанова, Лещинская, Муравьева, Папукова, Пономарева, Филимонова

МПК: C12N 9/14

Метки: serratia, выделения, жидкости, культуральной, маrсеsсеns, эндонуклеазы

...о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и сокращения длительности процесса, ионообменнрй хроматографии подвергают непосредственно культуральную жидкость, а ионообменную хроматографию проводят на катионообменнике Биокарб Дс сорбцией целевого продукта при рН 5,0-5,5 и десорбцией в буфере при рН 8,0-8,5 в присутствии 0,35- 0,40 М хлористого натрия.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что для десорбции в качестве буфера используют 0,1 М трис-НСТ. Составитель А. СеменовРедактор А. Гунько Техред А.Кравчук Корректор Э.Лончакова Заказ 2316/25 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат...

Номер патента: 1518372

Опубликовано: 30.10.1989

Авторы: Дегтярев, Иванова, Рассказов, Репин, Речкунова, Шевченко

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: 21-продуцент, bacillus, rse21, species, бактерий, сайт, специфической, штамм, эндонуклеазы

...маслом,ов растворе глицерина - при -70 Г ив лиофильно высушенном состоянии,Физиологические признаки,Хемоорганотроф. Каталазоположи"тельный, оксидазоотрицательный. утилизирует лактозу, сахарову, мальтоэу,арабинозу, глюкозу, галактозу, маннит. Не утилизирует раннозу, ксилоэу,дульцит сорбит, Реакция Фогео-Проска 35уэра отрицательная, Разжижает желати-.ну и крахмал.Для культивирования Васд 11 цзврес 1 ез 21 Вприменяют питательную среду следующего состава, г/лдистиллированной воды:ГидролизаткилькиИаС 1Вода дистиллированная ОстальноеоКультивирование проводят при 30 Ги интенсивной аэрации до достижениястационарной фазы роста.Выход биомассы: 2,0-3,0 г сыройбиомассы с 1 л питательной среды.Выход целевого фермента: 3000 ед/гбиомассы с...

Номер патента: 1532583

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Галимбаева, Дегтярев, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/14

Метки: dеniтrifiсаns-продуцент, paracoccus, бактерий, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...узнает и специфическ расщепляет последовательность нукле 0тидов ССМСС; оптимальное значение рНя действия рестриктазы 7,5-9,0;птимальная температура действия 37 С;я активности рестриктазы требуютсяОны МО Оптимальная концентрация-15 мМ.Для культивирования Раг.реп В рименяют питательную среду следуюего состава, г/л дистиллированной воы; триптон 10, дрожжевой экстракт 40соКультивирование проводят при 30 С( хорошей аэрацией в течение 2 сут.1 ыход биомассы 2-3 г/л культуральнойжидкости. Выход рестриктазы Рйе 12 1: 45:000 ед/г биомассы. П р и м е р , Клетки Раг. Йеп., :ранящиеся в 50 .-ном глицерине в Ь- бульоне при-20 С высевают на чаш- У с 1. А. После 2 сут инкубирования50 1 ри 30 С клетки собирают петлей и носят в 100 мл В и выращивают до...

Номер патента: 1532584

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Галимбаева, Дегтярев, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/14

Метки: iммотuм, бактерий, вrеviвастеriuм, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Натана и Смита,Штамм также содержит рестриктазу ш 11, которая является изошизомеом Взр В. Т.Ферменты Вып 1 и Впп 11 хорошо тделяются друг от друга при хроатографии на фосфоцеллюлозе Р, то позволяет получить препараты бонх ферментов без взаимных примеей.Сравнение электрофоретической одвижности фрагментов, получаемых ри гидролизе ДНК фага Ь рестриктазой 40 ып 1 с электрофоретической подвижностью фрагментов известной длины ,(Игц 1 гидролизат ДНК фага ) позволяет определить длину фрагментов Мв 1 гидролизата. Получаемый набор врагментов совпадает с набором фрагМентов, соответствующим гидролизу ДНК фагапо последовательности ТТССАА.Таким образом, фермент Вш 1 , узнает и гидролизует пбследователь,ность нуклеотидов ТТССАА и являетсяизошизомером...

Номер патента: 1541514

Опубликовано: 07.02.1990

Авторы: Александрова, Вотрин, Газдаров, Коромыслов, Ходарев, Чупырина

МПК: G01N 33/48

Метки: активности, зависимой, лимфоцитов, эндонуклеазы

...3 ммольМрСЭ.; 1,2 моль сахарозы) в соотноше -нии 1:3 и центрифугируют 1 О мин,1500-2000 р, при 4 Г,Осадки ядер суспендируют в минимальном объеме ТМС,9 беэ тритонаХ, затем доводят объем ТМС,9до 10-12 мл и суспенэию центрифугируют 1500-2000 я при 4 С 10 мин. Осадки поданным световоймикроскопии представляют собои интактные клеточныеядра, свободные от цитоплаэматических загрязнений, Выход ядер 0,3 мгДНК/10 лимфоцитов,8Для определения активности Са/Мрзависимой зндонуклеазы клеточные ядра суспендируют в инкубационной средеТМСС (50 ммоль трис-НС 1, рН 8,3;10 ммоль МрС:.2, 1 ммоль СаС 1;0,25 моль сахарозы) до концентрации1 мг/мл по ДНК, В инкубационные пробирки (.Эппендорф) вносят 10-50 мклсуспензии ядер в ТМСС. Инкубацию проводят при 37 С в...

Номер патента: 1392902

Опубликовано: 07.05.1990

Авторы: Банникова, Варламов, Рогожин

МПК: C12N 9/22

Метки: serratia, бактериальной, выделения, жидкости, культуральной, маrсеsсеus, эндонуклеазы

...сервируется преимущественно эндонуклеаэа, а прочие белки остаются в растворе. Поэто" му при выделении фермента рН культу- ральной жидкости доводят до 6,5-6,6.Сорбцию эндонуклеаэы на хелатном сорбенте проводят на колонке с соотношением белок:сорбент 6 ед.А :1 см при скорости 15-20 мл/ч илн в объеме с соотношением белок:сорбент 0-12 ед,йА, :1 см , После промывки хелатного сорбента исходным буфером 0,1 М Яаацетатным с рН 6,5-6,6, содержащим 0,3-0,5 М ОаС 1, эндонуклеаэу десорбируют с выходом 65-953 тем же буфе" ром, но с рН 4,7-5,0. Наличие в используемых буферах 0,3-0,5 М ЮаС 1 обеспечивает подавление ионообменных взаимодействий. Использование более высоких концентраций МаС 1 нецелесообразно.П р и м е р 1. К 3 мл ИДК-агароэы (29...

Номер патента: 1573026

Опубликовано: 23.06.1990

Авторы: Васюренко, Глатман, Кравец, Кузьмин, Солонин, Тарутина, Фролов

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, определяющая, плазмидная, рекомбинантная, рестрикции, синтез, эндонуклеазы

...штамма Е. со 11К 802, трансформанты подращивают 2 чв бульоне 1,В инфицируют фагом р 801 г9с множественностью заражения 10 ивысевают на агаризованную среду, содержащую 50 мкг/мл ампициллина, Изклонов, резистентных к ампициллину,выделяют плазмидную ДНК рВС МЗ известными способами,Проведен анализ наличия рестриктазы сГгВ 1 в клетках Е, со 1 ь.Для этого клетки Е. со 11 К 802//рВС МЗ выращивают в 10 мМ 1,В бульона до поздней логарифмической стадиироста, собирают центрифугированием,ресуспендируют в 5 мл буфера В, (10 мМтрис НС 1, рН 7,5, 50 мМ НаС 1, 10 мМЭДТА 10 мМ 2-меркгптоэтанола), раз-.рушают ультразвуком, центрифугируютпри 6000 об/мин 1 ч для освобожденияот клеточных обломков,Для определения активности готовятразведения экстракта в...

Номер патента: 1203902

Опубликовано: 30.11.1990

Авторы: Аавиксаар, Сийгур, Таре, Ярве

МПК: A61K 35/58, C12N 9/22

Метки: выделения, кобры, эндонуклеазы, яда

...,ки 111110 см наносят раствор ядра.Колонку элюируют 0,19 М раствором уксуснокислого аммония с удельной электропроводностью 14,5 10 8 см, рН 64 со скоростью 180 мп/ч и соби рают фракции по 30 мп, Оптическую ппотность.элюата регистрируют непрерывно с помощью "Увикорд. Получают 5 белковых пиков. В 1 дике фракции, которые имеют активность энда нуклеазы, объединяют (объем 930 мп),Раствор эндонукпеазы,.при рН 7,7 наносят на кананку ДНК"агарозы, уравновеаениую 0,19 М раствором уксусно-"кислого аммония с удельной электропроводностью 4,5-108 см , рН:7,7. Че-рез колонку пропускают 1,0 л раствора0,19 М уксуснокислого аммония с рН7,7 (удельная электропроводность раствора 14,510 8 см ). Скорость элюций10 мп/ч, собирают фракции по 15 мп,Оптическую...

Номер патента: 1613490

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Пустошилова, Шингарева

МПК: C12N 9/22

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...приливают 30 мл смеси,содержащей 212 полиэтиленгликоля и6 Х декстран, 3,45 мл 1 м раствора 40ИаС 1 (до конечной концентрации 38 мМ)и 26,55 мл деионизованной воды, Смесьпродолжают перемешивать в течение15 мин, затем центрифугируют при5000 об/иин в течение 20 мин. Верхнюю Фазу отбирают, разбавляют в 2,5раза буфером А и наносят на колонкус Фосфоцеллюлозой Р 11 (1,5 к 30) см,уравновешенную буфером А. Колонкупромывают 50 мл 0,2 М ИаС 1 в буфере50А, Фермент элюируют линейным градиентом концентрации ИаС 1 от 0,2 до1,0 М в буфере А. Общий объем градиента 200 ил. Скорость нанесения наколонку, промывки и элюции 20 мл/ч.Собирают фракции по 5 ил и анализируют на активность рестриктазы НЬа 1,отбирают аликвоты для испытанияобъемом 5 мкл, Фракции,...

Номер патента: 1634713

Опубликовано: 15.03.1991

Автор: Михайлова

МПК: C12N 9/14

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...в 0,8 -ном агарозном геле. За единицу активности принимали минимальное количество фермента, необходимое для постоянного специфического гидролиза 1 мкг ДНК фага Т 7 втечение 1 ч 37 +.1 ОС.10 г замороженной биомассы Х.Ьас 1 гП ВКПМ Всуспендируют в 20 мл 10 мМ трис-НО, рН 7,9, содержащего 1 мМ ЭДТА и 0,01 М 2-меркаптоэтанола, добавляют тритон Хдо конечной концентрации 0,1% и обрабатывают ультразвуком при частоте 20 кГц и амплитуде 17+ 2 мкм нескол ько раэ до исчезновения вязкости в биомассе, периодически охлаждая смесь для предотвращения нагревания смеси и инэктивации фермента. К клеточному гомогенату при постоянном перемешивании приливают 30 мл смеси, содержащей 21 полиэтиленгликоля и 6% декстрана, 7,88 мл 4 М раствора йаС (до...