Патенты с меткой «рестрикции»

Номер патента: 1108106

Опубликовано: 15.08.1984

Авторы: Ансберга, Ничаев, Хейслере, Чикаев

МПК: C12N 9/16

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...фракционированиеполученного лизата центрифугированием, хроматографию и диализ, разрушение,клеток проводят смесью лизоцимаи тритона Х 100 (10:1), а клеточныекомпоненты фракционируют в двухфазной системе, содержащей 7,0-7,5-ный 45полиэтиленгликоль мол,в, 6000 и 2,02,1-ный декстран Т 500 при рН 6,06,5 в присутствии 0,50-0,52 М МаС 1.Способ осуществляют следующимобразом, 50Биомассу Могахе 11 а ярес 1 ея лизируют с помоцью лизоцима в присутствии тритона Х 100, затем фракционируют в двухфазной системе полиэтиленгликольдекстран (конечная концентрация в смеси полиэтиленгликоля557; декстрана 2," ИаС 1 0,5 М; рН 6,3)После тщательного перемешиваниясмеси и последующего центрифугирования отбирают верхнюю фазу, содержащую целевой продукт, наносят на...

Номер патента: 1114700

Опубликовано: 23.09.1984

Авторы: Беляева, Горовиц, Ежов, Крюкова, Ли, Лузина, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...а со 11, Бггар 1 ту 1 ососсцяацгецв, Ргогецв щ 1 даг 1 в),При исследовании некоторых мутантов Еясйег 1 сЫа со 11, устойчивых к Тр, показано два типа устойчивости, В одном случае устойчивость объясняз 11147ется повьппенным синтезом дигидрофолатредуктаэы мутантом по сравнению сдиким штаммом, в другом случае - несколько измененными свойствами дигидрофолатредуктазы у мутанта. 5В результате клонирования структурного гена, кодирующего дигидрофолатредуктазу фага Т 4 в плаэмидныйвектор рИК 322, получена рекомбинантная плазмидная ДНК рВК 322 Ггд. В 1 Оплазмиду рВК 322 интегрирован Нпд 111фрагмент фага Т 4 размером 1, 1 тыс.пар оснований, содержащий структурныйген дигидрофолатредуктазы. Введениеплазмидной ДНК рВК 322 Ггд в бактери альные клетки...

Номер патента: 1130602

Опубликовано: 23.12.1984

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидная, плазмидной, рекомбинантная, рестрикции, штамм-продуцент, эндонуклеазы

...цитритов. Желатцну не разжижают.Уреаэцая активность не обнаруживается. Ицдол не образуют.Устойчивость к антибиотикам. Проявляет устойчивость к ампициллину.Генетические признаки штамма:1 фЕсо НФ спи Есо цугес ВСэЪсВ,Г , гпу 1, 1 еп 6, рго А 2, Ьз 4,ГМ 1, агд Е, 1 ас 41, да 1 К 2, ага 14ху 1 5, шег, еэх.П р и м е р 1. Конструированиерекомбцнантной плаэмидцой ДНК р 1 ЬНЧ 86.Плазмцдную ДНК рЬКч 8 вьсцеляютиз штамма ВКИ ВД по методу(С 1 еюе 11, Не 1 пе 1 су, 1969, РНАЯ, 62,1159-1163) .2 мкг выделенной ДНК гидролиэуютрестриктазой Нжд 111 в 100 мкл раствора, содержащего 50 мИ трис-НС 1,рН 7,8, 10 мМ МИКСТ , 2 мМ 2-меркаптоэтанола, 20 мИ ИаС 1 при 37 ОС 1 ч.После прогревания реакционной смесипри 65 ОС в течение 10 мин проводятчкольцевание"...

Номер патента: 1074139

Опубликовано: 30.12.1984

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рекомбинатной, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...1159-1166).Рестрикционный анализ выделеннойплазмиды р 1 ЬКЧ 7 проводят. с помощьюэндонуклеаз Р 11,ВфИ,Есор .На втором этапе в полученную плазмиду Р 1 йЧ 74 вводят область иммуни-,тета фагас промотором ранних генов Рг и термочувствительным репрессором. Для этого выделяют ДНК фагас 1857 по методу (А,Р. Ка 1 яег,Нояпея 0.8. 1960, /, Мо 1 В 1 о 1392-415),мкг ДНК плазмиды р 1 ЬКЧ 7 и4 мкг ДНК фага 3 с 1 857 инкубируют вбуфере А (2 О мМ Трис-НС 0 рН 7,6,10 мМ МС 12,10 мМ дитиотреитола) сэндонуклеазной рестрикции Вд 1 11Гидролиз проводят в течение часапри 37 С, после чего гидролизат проверяют электрофорезом в О,97 агарозе в ацетатном буфере. ФрагментыДНК фага Л с 1857 (2 мкг) смешивают с линейной ДНК плазмидыр 1 РЧ 7 й (О, 2 мкг), добавляют...

Номер патента: 1040791

Опубликовано: 07.02.1985

Авторы: Баев, Глатман, Кравец, Кузьмин, Мороз, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, конструирования, плазмидной, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Физической структурыплазмидную ДНК выделяют ускореннымметодом (К 1 е 1 п Р,1 ейа 1, 1980,Р 1 азтпЫ, 8, 88-93) .Рестрикционный анализ проводят спомощью эндонуклеаз Р-1, Вя 1 11,11, Отобранные. клоны проверяютна присутствие системы рестрикциимодификации Есо 87. Для этого сравнивают эффективность посева (э.п.)фага; 0 на клетках, содержащихрекомбинантные плазмиды, а такжештаммах С 5183 (гь. -где ) и ) С 5183( г т+ ) с плазмидой рЬ 13. Наличие в клетках модификации устанавливают при снижении э.п. методом(Т. Ага, А.Ао 1 с 1, 3.Васй. 5, 18,1962) . Полученные данные представлены в табл. 2,Как видно из табл. 2, штамм3 С 5183/С 113 на четыре порядка ограничивает размножение фага Ъ0по сравнению со штаммом 1 С 5183( ГО ), не несущем плазмидуу...

Номер патента: 1095645

Опубликовано: 07.09.1985

Авторы: Вайткявичюс, Пунтежис, Янулайтис, Яскелявичене

МПК: C12N 15/00, C12N 9/14

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...инкубации 2 Ов термостатепри 37 С образует круглые с ровными краями колонии 1,5 ммв диаметре, Колонии гладкие, с агаром не срастаются, желтоватогоцвета, В мясо-пептонном бульоне образует мутность. Оптимальная температура роста 37 С. При 45 С обычноВне растет. Грамположительные, каталазоположительные, Строгий аэроб.Желатину гидролизирует, Глюкозу иксилозу окисляет. Нитраты восстанавливают в нитриты, Резистентный к новобиоцину )2,0 мг/мл, Клетки неподвергаются лизису с лизоцимом приконцентрации его 100 мг/мп. Культурахранится в пробирках на среде МПА подовазелиновым маслом при +4 С,Полученная эндонуклеаза Мча 1 характеризуется следующими свойствами:узнает и специфически расщепляетпоследовательность 5 СС(А/Т)СС в молекуле ДНК;оптимальное...

Номер патента: 1406160

Опубликовано: 30.06.1988

Авторы: Белавин, Дегтярев, Малыгин, Репин

МПК: C12N 9/16

Метки: flаvовастеriuм, fок1, океаnокоiтеs, рестрикции, эндонуклеазы

...1 гВода 10 млВсе растворы стерилизуют в автоклаве при 121 С 40 мин, затем сливаютов стерильных условиях непосредственно перед приготовлением питательной среды.Клетки бактерий подращивают на твердой питательной среде при 28 С в течение суток, затем готовят инокулят для засева ферментера. Объем инокулята 1/10 часть от объема Ферментера. Культивирование проводят в феро ментере (объем 20 л) при 28 С и аэрации 20 л/ч. Величина рН в процессе роста поддерживается автоматически на уровне 7,2 добавлением 0,2 н, ИаОН.Клетки выращивают до стационарной .фазы (оптическая плотность 2,5 при =550 нм). Клетки собирают центрифугированием при 5000 х 8 в течение 10 мин. Выход биомассы 3,5 г/л.Выделение и очистка рестриктазы.Все процедуры по выделению...

Номер патента: 1449583

Опубликовано: 07.01.1989

Авторы: Бендукидзе, Вайткявичус, Дегтярев, Петров, Приходько, Репин, Фодор

МПК: C12N 9/16

Метки: bacillus, suвfilis, бактерий, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...расщеплять послед вательность нуклеотидов 5 ССАТ. Глубинное культивировао ние проводят при 30 С и аэрации -объема в минуту на питательной ср е, содержащей, г/л воды гидроли ат кильки 40, ИаС 1 20 до достиже я форы замедления роста. ВМход ре триктазы 300000 единиц на грамм би массы, 25Используемый штамм В. вцЫ 1 Ы (15) ВК 1 М Вполучен в результате целенаправленного поиска штаммов - продуйентов рестриктаз,;Штамм ВасП 1 цв вцЬ 11 ь.в (15",П р и м е р 1. Получение рестриктазы Ввц 15 1.Штамм В. вцЬСх 1 ьв (15) поддерживают в пробирках на агаризованной среде под вазелиновым маслом. Для оживления штамм пересевают на чашки Петри с агаризованной средой; содержащей, г/л: гидроливат кильки 40, БаС 1 20 (среда 1), агар 15, и инкубируют при 37 С в...

Номер патента: 1532583

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Галимбаева, Дегтярев, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/14

Метки: dеniтrifiсаns-продуцент, paracoccus, бактерий, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...узнает и специфическ расщепляет последовательность нукле 0тидов ССМСС; оптимальное значение рНя действия рестриктазы 7,5-9,0;птимальная температура действия 37 С;я активности рестриктазы требуютсяОны МО Оптимальная концентрация-15 мМ.Для культивирования Раг.реп В рименяют питательную среду следуюего состава, г/л дистиллированной воы; триптон 10, дрожжевой экстракт 40соКультивирование проводят при 30 С( хорошей аэрацией в течение 2 сут.1 ыход биомассы 2-3 г/л культуральнойжидкости. Выход рестриктазы Рйе 12 1: 45:000 ед/г биомассы. П р и м е р , Клетки Раг. Йеп., :ранящиеся в 50 .-ном глицерине в Ь- бульоне при-20 С высевают на чаш- У с 1. А. После 2 сут инкубирования50 1 ри 30 С клетки собирают петлей и носят в 100 мл В и выращивают до...

Номер патента: 1532584

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Галимбаева, Дегтярев, Новожилова, Речкунова, Семенченко

МПК: C12N 9/14

Метки: iммотuм, бактерий, вrеviвастеriuм, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

...Натана и Смита,Штамм также содержит рестриктазу ш 11, которая является изошизомеом Взр В. Т.Ферменты Вып 1 и Впп 11 хорошо тделяются друг от друга при хроатографии на фосфоцеллюлозе Р, то позволяет получить препараты бонх ферментов без взаимных примеей.Сравнение электрофоретической одвижности фрагментов, получаемых ри гидролизе ДНК фага Ь рестриктазой 40 ып 1 с электрофоретической подвижностью фрагментов известной длины ,(Игц 1 гидролизат ДНК фага ) позволяет определить длину фрагментов Мв 1 гидролизата. Получаемый набор врагментов совпадает с набором фрагМентов, соответствующим гидролизу ДНК фагапо последовательности ТТССАА.Таким образом, фермент Вш 1 , узнает и гидролизует пбследователь,ность нуклеотидов ТТССАА и являетсяизошизомером...

Номер патента: 1573026

Опубликовано: 23.06.1990

Авторы: Васюренко, Глатман, Кравец, Кузьмин, Солонин, Тарутина, Фролов

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, определяющая, плазмидная, рекомбинантная, рестрикции, синтез, эндонуклеазы

...штамма Е. со 11К 802, трансформанты подращивают 2 чв бульоне 1,В инфицируют фагом р 801 г9с множественностью заражения 10 ивысевают на агаризованную среду, содержащую 50 мкг/мл ампициллина, Изклонов, резистентных к ампициллину,выделяют плазмидную ДНК рВС МЗ известными способами,Проведен анализ наличия рестриктазы сГгВ 1 в клетках Е, со 1 ь.Для этого клетки Е. со 11 К 802//рВС МЗ выращивают в 10 мМ 1,В бульона до поздней логарифмической стадиироста, собирают центрифугированием,ресуспендируют в 5 мл буфера В, (10 мМтрис НС 1, рН 7,5, 50 мМ НаС 1, 10 мМЭДТА 10 мМ 2-меркгптоэтанола), раз-.рушают ультразвуком, центрифугируютпри 6000 об/мин 1 ч для освобожденияот клеточных обломков,Для определения активности готовятразведения экстракта в...

Номер патента: 1613490

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Пустошилова, Шингарева

МПК: C12N 9/22

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...приливают 30 мл смеси,содержащей 212 полиэтиленгликоля и6 Х декстран, 3,45 мл 1 м раствора 40ИаС 1 (до конечной концентрации 38 мМ)и 26,55 мл деионизованной воды, Смесьпродолжают перемешивать в течение15 мин, затем центрифугируют при5000 об/иин в течение 20 мин. Верхнюю Фазу отбирают, разбавляют в 2,5раза буфером А и наносят на колонкус Фосфоцеллюлозой Р 11 (1,5 к 30) см,уравновешенную буфером А. Колонкупромывают 50 мл 0,2 М ИаС 1 в буфере50А, Фермент элюируют линейным градиентом концентрации ИаС 1 от 0,2 до1,0 М в буфере А. Общий объем градиента 200 ил. Скорость нанесения наколонку, промывки и элюции 20 мл/ч.Собирают фракции по 5 ил и анализируют на активность рестриктазы НЬа 1,отбирают аликвоты для испытанияобъемом 5 мкл, Фракции,...

Номер патента: 1634713

Опубликовано: 15.03.1991

Автор: Михайлова

МПК: C12N 9/14

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...в 0,8 -ном агарозном геле. За единицу активности принимали минимальное количество фермента, необходимое для постоянного специфического гидролиза 1 мкг ДНК фага Т 7 втечение 1 ч 37 +.1 ОС.10 г замороженной биомассы Х.Ьас 1 гП ВКПМ Всуспендируют в 20 мл 10 мМ трис-НО, рН 7,9, содержащего 1 мМ ЭДТА и 0,01 М 2-меркаптоэтанола, добавляют тритон Хдо конечной концентрации 0,1% и обрабатывают ультразвуком при частоте 20 кГц и амплитуде 17+ 2 мкм нескол ько раэ до исчезновения вязкости в биомассе, периодически охлаждая смесь для предотвращения нагревания смеси и инэктивации фермента. К клеточному гомогенату при постоянном перемешивании приливают 30 мл смеси, содержащей 21 полиэтиленгликоля и 6% декстрана, 7,88 мл 4 М раствора йаС (до...

Номер патента: 1655986

Опубликовано: 15.06.1991

Авторы: Гладченко, Зернов

МПК: C12N 9/14

Метки: ара, выделения, рестрикции, эндонуклеазы

...форез). Для разделения Ара 1 рестриктов ДНК фага Л и нативной ДН К фаза Л используется пульсирующее поле с периодом 1, 2 с в прямом и 0,6 с в обратном направлениях. Реакционная смесь для гидролиза содержит 10 ММ трис-НС 1 рН 7,9; 6 мМ М 9 С 12; б мМ КС 1;10 мМ 2-меркаптоэтанол; 1 мкг ДНК фага Л и 1 мкл фермента. Реакцию проводят при 37 С 10 мин. Электрофорез проводят в 0,06 М трис-ацетатном буфере, рН 7,9, 2 мМ ЭДТА в течение 5 ч при напряжении 100 В, Окрашенные этидий-бромидом (1 мкгlмл) гели просматривают в Уф-свете.За единицу активности принимают количество фермента, которое в оптимальных условиях за 1 ч полностью расщепляет 1 мкг ДНК фага Л, 2 г биомассы АсетоЬассег раз 1 ецг 1 апцз суспендируют в 4 мл буфера экстракции,...

Номер патента: 1701745

Опубликовано: 30.12.1991

Авторы: Дегтярев, Малуп, Николаенкова, Репин, Речкунова, Свиридов

МПК: C12N 9/14

Метки: sтrертомyсеs, биомассы, обогащенной, рестрикции, эндонуклеазой

...со скоростью 200 - 220 об/мин, а начиная со вторых суток (с 25 ч) - со скоростью 50 об/мин, что позволяет повысить выход биомасы и целевого фермента.В табл.4 - 5 приведены зависимости выхода биомассы и фермента от времени культивирования и скорости перемешивания гомогенной биомассы.Из табл,4 и 5 видно, что увеличение урожая клеток в первой фазе культивирования(24 ч) происходит при перемешивании со скоростью 200 - 220 об/мин, что связано с эффективным разрушением клеточных ассоциаций, а уменьшение скорости перемешивания до 150 об/мин во второй фазе роста (после 24 ч) способствует увеличению гомогенной биомассы, обогащенной рестриктазой,На чертеже представлены электрофореграммы продуктов гидролиза линеаризованной по Чзр - сайту плазмиды...

Номер патента: 1724689

Опубликовано: 07.04.1992

Авторы: Андреева, Репин, Сизов, Хомов

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: tgatca-3, нуклеотидов, последовательность, расщепляющей, рестрикции, узнающей, эндонуклеазы

...прозрачные, блестящие, с ровным краем. Оптимальная температура роста 65 С, рН 7,0-1,2. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Культуру поддерживают пересевом на плотных средах, хранят в растворе глицерина при -70 С или в лиофильно-высушенном состоянии,Физиологические признаки,Не восстанавливает нитраты, отрицателен по лецитиназе, в реакции с метиловым красным и Фогес-Проскауера; не гидролизует крахмал, казеин, желатин, эскулин; не использует малонат, цитрат, не растет при концентрации МаС 1 5 ои 0,001 лизоцима; энергично образует кислоту иэ глюкозы, очень слабо - из арабинозы, ксилозы и маннита; не дезаминирует фенилаланин, не выделяет индол и сероводород.Штамм высокочувствителен к антибиотикам: пенициллину, карбенициллину, ампициллину,...

Номер патента: 1249935

Опубликовано: 30.05.1994

Авторы: Аникейчева, Вотрин, Колоша, Соколов, Фицнер, Фодор, Хорошутина

МПК: C12N 9/22

Метки: gcatg, нуклеотидную, последовательность, расщепляющей, рестрикции, узнающей, эндонуклеазы

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ, УЗНАЮЩЕЙ И РАСЩЕПЛЯЮЩЕЙ НУКЛЕОТИДНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ - GCATG - C, включающий культивирование продуцирующего микроорганизма на питательной среде, содержащей источник азота, углерода, минеральные соли и воду, в условиях аэрации с последующим выделением из биомассы целевого продукта, отличающийся тем, что с целью повышения выхода биомассы продуцента и активности эндонуклеазы рестрикции Рае 1, в качестве продуцирующего микроорганизма используют штамм Pseudomonas aeruginosa BU 278.

Номер патента: 1152252

Опубликовано: 09.02.1995

Авторы: Мазина, Пустошилова, Селина, Серов, Фодор, Шулюпин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: malvacearum, xanthomonas, xmabi, в-2710, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

ШТАММ XANTHOMONAS MALVACEARUM В-2710 - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ XMABI.Штамм Xanthomonas malvacearum В-2710 (коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика", коллекционный номер ЦМПМ В-2710) - продуцент эндонуклеазы рестрикции Xma BI.

Номер патента: 1218678

Опубликовано: 10.04.1995

Авторы: Баев, Кузьмин, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00, C12N 9/16

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ ECO RV из клеток продуцента Escherichia coli, содержащих рекомбинантную ДНК, несущую гены рестрикции - модификации Eco RV, предусматривающий разрушение клеток и последующую хроматографию экстракта белков клеток на фосфоцеллюлозе PII и гидроксипатите, отличающийся тем, что, с целью обеспечения электрофоретической гомогенности препарата, не содержащего интерферирующих примесей ферментов нуклеинового обмена, разрушение клеток ведут в присутствии 5-15%-ного раствора глицерина, хроматографию на фосфоцеллюлозе PII проводят, используя для элюции фермента раствор хлористого натрия с линейным градиентом концентрации от 200 до 800 мМ, а перед очисткой на гидроксилапатите фракции, содержащие фермент с...

Номер патента: 980433

Опубликовано: 27.07.2000

Авторы: Ежов, Кузьмина, Фодор

МПК: C12Q 1/68

Метки: активности, рестрикции, эндонуклеаз

Способ определения активности эндонуклеаз рестрикции, включающий гидролиз ДНК бактериофага с помощью эндонуклеазы, разделение полученных фрагментов ДНК с последующим качественным анализом, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, а также повышения его надежности и точности, в качестве ДНК бактериофага используют ДНК бактериофага 80.