Штамм бактерий bacillus liснеnifоrмis-продуцент рестриктазы в 49 i

(46) 30.06.91. Бюл. М ьскийи ИнсАН нинов, езник з апс ч. 16,зовании не раздувалетки при спорооются. кте прямые льтуры одиночспоры нально. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Всесоюзный научно-исследователинститут прикладной микробиологиититут микробиологии и вирусологииУССР(56) 8.1. ЯоЬеггз. Везтг 1 с 11 оп ещувеЙег 1 зозЫзовегз."йос 1. Ас 1 бз Йеч"зецоепсе корр р 271-313, 1988,Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной биологии и может быть использовано как инструмент для получения фрагментов ДНК, картирования молекул ДНК и конструирования векторных . молекул ДНК.Цель изобретения - выявление штамма Вас 1 оз с)еп 11 огв 1 з ВКПМ В(49) продуцирующего рестриктазу В 11 491, способную узнавать на двухнитевой ДНК последовательность нуклеотидов 5 66 ТСТСЗ. Штамм выделен из почвы и хазуется следующими признаками.(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ВАС 11 ОЯ . СНЕИ 1 РОЯМ 13 - ПРОДУЦЕНТ РЕСТРИКТАЗЫ В 1149.(57) Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной биологии и может быть использовано как инструмент для получения фрагментов ДНК: картирования молекул ДНК и конструирования векторных молекул ДНК. Цель изобретения - выявление штамма ВасПоз 11 сЬепНогв 1 з ВКПМ В (49), продуцирующего рестриктазу ВИ 49 1, способную узнавать на двухнитевой ДНК последовательность нуклеотидов 566 ТС ТС 3 . Штамм выделен из почвы, Выход фермента 1000 ед/г биомассы."Культуральные признаки - на твердом Фмясо-пептонном агаре через 18 ч роста при О 37 С образуются колонии с матовой шероховатой поверхностью серовато-белого цвета, врастающие в агар, Образование спор начинается через 48-72 ч при выращивании на мясо-пептонном агаре при 37 С,4После роста на глюкозном агаре в про- О топлазме не обнаруживаются глобулы. Рост на жидкой питательной среде характеризуется равномерным помутнением.Физиолого-биологические признаки - грамположительные аэробные спорообразующие палочки. Продуцируют каталазу. Культура ферментирует глюкозу, арабинозу, маннит с образованием кислоты, ксилозу не использует, Утилизирует цитрат и пропионат, гидролизует крахмал, редуцирует нит1659479 Составитель И, ПриваловаРедактор Л, Герасимова Техред М.Моргентал Корректор Т.Колб. Заказ 1821 Тираж 378 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 раты, в аэробных условиях из нитратов образует газ, дает положительную реакциюФогес-Проскацэра. Растет в анаэробных условиях, не продуцирует аргинигидролазу,не гидролизует мочевину.П р и м е р, Штамм В, ПсйепИогв 1 з 49хранится в пробирках на агаризованнойсреде под вазелиновым маслом. Для ожив ления культуру пересевают на скошенныймясо-пептонный агар и инкубируют в термостате при 37 С в течение 30 ч, Для полуиения биомассы культуру засевают в колбуобъемом 3 л, содержащую 700 мл среды,содержащую, г/л; дрожжевой экстракт Б;триптон 5; натрий хлористый 5, и инкубируют в условиях качалки до средней логариф мической фазы,затем. клетки отделяютцентрифугированием при 10000 д. Выходсырой биомассы 5 г/л,0,5 г клеток суспендируют в 0,5 мл буфера А (0,2 М МаС 1,0,01 М К-фасфат, рН7,0 2 мМ дитиотрейтол, 0,1 мМ ЭДТА) разрушают ультразвуком при охлаждении льдом,, клеточные стенки осаждают при 40000 9.Надосадочную жидкость хроматографуютна колонке 1,5 хЗО см с Тоуореаг 1 НЯ,уравновешенной в том же буфере со скоростью 20 мл/ч, фракции 0,8 мл, Активностьрестриктазы определяют по гидролизу ДНКфага И продукты реакции анализируют5 электрофорезом в геле 0,8 ф 6 агарозы, Фракции, содержащие рестриктазу, объединяют,диализуют против буфера А, содержащего50/о глицерин и хранят при -20 С, Выходфермента 1 тыс. ед/г биомассы.10 Специфичность рестриктазы В 11491 определяли по гидролиэу ею различных ДН К сизвестной первичной структурой (ДНК фагов А, М 13 фХ 174, плазмиды рВВ 322),Установлено физическим картировани 15 ем, что рестриктаза ВП 49узнает и гидролизует ДН К р В,Й 322 в точках скоординатами 3435 п,о., ДНК фага Л в точках с координатами 11424, 42715 п,о, ДНКфХ 174 и М 13 не гидролиэуются. Анализ этих20 данных приводит к заключению, что рестриктаза В 1 491 узнает последовательность нуклеотидов 66 ТСТС,Формула изобретения25 Штамм бактерий Вас 111 цзсЬеп 11 огглз ВКПМ В- продуцент рестриктазы ВИ 491,