Пустошилова

Номер патента: 1152252

Опубликовано: 09.02.1995

Авторы: Мазина, Пустошилова, Селина, Серов, Фодор, Шулюпин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: malvacearum, xanthomonas, xmabi, в-2710, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

ШТАММ XANTHOMONAS MALVACEARUM В-2710 - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ XMABI.Штамм Xanthomonas malvacearum В-2710 (коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика", коллекционный номер ЦМПМ В-2710) - продуцент эндонуклеазы рестрикции Xma BI.

Номер патента: 2001952

Опубликовано: 30.10.1993

Авторы: Андреева, Гордиенко, Лебедев, Майстренко, Пустошилова, Репин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: leguminosarum-продуцент, rhizobium, бактерий, рестриктазы, штамм

...Мц ц В 1 е 69 1, дорожки: А - совместный гидролиз Мц + йе 69 1, Б - гидролиз Й 1 е 69 1, В - гидролиз М 1 ц 1; на фиг, 3 - построение рестрикционной карты ДНК фага А с использованием ферментов Н 1 пб 111, М 1 ц 1 ц Й 1 е 69 1; на фиг, 4 - электрофореграммэ гидролизэДНК плаэмиды рВВ 322 рестриктазами Вва 1, В(е 69 1 о Нпб, дорожки: А - обработка Вза 1, Б - обработка Ве 69 1, В - совместный гидролиз Ве 69 1 о Нпб , цифрами указано количество пар нуклеотидов в ферментах ДНК,П р и м е р 1. Культивирование штамма и получение биомассы.Культуру В.едогппозагогп выращивают на питательном бульоне следующего состава, г/л: пептон 10; дрожжевой экстракт 5; хлористый натрий 5; глюкоза 10 ( -бульон),Для получения инокулята суточную культуру...

Номер патента: 1752769

Опубликовано: 07.08.1992

Авторы: Андреева, Афиногенова, Гордиенко, Лебедев, Майстренко, Пустошилова

МПК: C12N 9/14

Метки: gtcgac, нуклеотидов, последовательность, расщеплять, рестриктазы, способной, узнавать

...в 6 - 8 раз больше, чем в известном способе, Полученная рестриктаза характеризуется следующими свойствами;узнает и гидролизует последовательностьнуклеотидов 6 ТС 6 АС, оптимальное значе 10 ние рН для действия рестриктазы 8,0; оптимальная температура 37 С; для проявленияактивности рестриктазы требуются ионыМц (оптимальная концентрация Мц 1015 мМ); оптимальная концентрация йаС в15 реакционной смеси 100-120 мМ.Полученный ферментный препарат свободен от значительных количеств неспеци-фицеских нуклеаз и фосфатаз, Приинкубации 200 ед,акт. фермента с 1 мкг ДНК20 фага в течение 2 ч при 37 С наблюдаетсястандартный набор фрагментов ДНК, Фрагменты ДК, полученные при инкубации 10ед.акт, фермента с 1 мкг ДНК фага в течение2 ч при 37 С, сшиваются...

Номер патента: 1659480

Опубликовано: 30.06.1991

Авторы: Андреева, Афиногенова, Зернов, Лебедев, Пустошилова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: бактерий, кlевsiеllа, рnеuмоniае-продуцент, рестриктазы, штамм

...жидкости,Выходрестриктазы Крп 3781:40000 ед,акт/г биомассы,П р и м е р, Культивирование штамма иполучение биомассы,Клетки КеЬзеа рпеипопае 378 размораживают при 37 С и высевают в жид 5 кую питательную среду, содержащуюпептон (10 г), экстракт (5 г), йаС (5 г) идистиллированную воду до 1 л. Глюкозу добавляют перед засевом до 1 , После 24 чинкубирования в термостате при 30 С10 штамм высевают на плотную среду с РПАдля получения отдельных колоний, Выращивают при тех же условиях. Выросшие клеткипереносят петлей с агара в колбы с 50 млжидкой питательной среды для получения15 инокулята, Инкубируют на качалке (200 -220 об/мин) 24 ч при 30 С.Полученным инокулятом засевают объем среды (качалочные колбы по 250 мл среды), предназначенный...

Номер патента: 1631080

Опубликовано: 28.02.1991

Авторы: Андреева, Лебедев, Пустошилова, Серов

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, бактерий, вме, меgатеriuм, продуцент, рестриктазы, штамм

...нуклеотидов ВЕССС;оптимальное значение рН дпя действиярестриктазы 75-9,0; оптимальная температура действия 37 оС; для активности рестриктазы требуются ионы М 8+Фс оптимальной концентрацией 5-10 мМ;оптимальная концентрация ИаС 1 0"50 мМ.Для культивирования В.ше 8 аСегхцш35361 применяют питательную среду следующего состава, г/л дистиллированной воды;Пептон 10Дрожжев ойэкстракт 5БаС 1 10 ры В.шеяагегцш в 10 раз выше, чем с 1 л культуры В.враегсцвП р и м е р. Клетки В,шеаегдцш 36 1, хранящиеся в 15 Х-ном глицерине в Ь-бульоне при минус 60 оС, размораживают и высевают для оживления в Ь-бульон, инкубируют 24 ч при 30 оС. Полученную жидкую культуру высевают на чашки РПА для получения отдельных колоний, инкубируют 24 ч при 30 С,...

Номер патента: 1613490

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Пустошилова, Шингарева

МПК: C12N 9/22

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

...приливают 30 мл смеси,содержащей 212 полиэтиленгликоля и6 Х декстран, 3,45 мл 1 м раствора 40ИаС 1 (до конечной концентрации 38 мМ)и 26,55 мл деионизованной воды, Смесьпродолжают перемешивать в течение15 мин, затем центрифугируют при5000 об/иин в течение 20 мин. Верхнюю Фазу отбирают, разбавляют в 2,5раза буфером А и наносят на колонкус Фосфоцеллюлозой Р 11 (1,5 к 30) см,уравновешенную буфером А. Колонкупромывают 50 мл 0,2 М ИаС 1 в буфере50А, Фермент элюируют линейным градиентом концентрации ИаС 1 от 0,2 до1,0 М в буфере А. Общий объем градиента 200 ил. Скорость нанесения наколонку, промывки и элюции 20 мл/ч.Собирают фракции по 5 ил и анализируют на активность рестриктазы НЬа 1,отбирают аликвоты для испытанияобъемом 5 мкл, Фракции,...

Номер патента: 1232680

Опубликовано: 23.05.1986

Авторы: Загребельный, Майстренко, Пустошилова, Романов

МПК: C07K 1/30, C07K 2/00, C12N 9/00 ...

Метки: кислот, клеточных, нуклеиновых, удаления, ферментсодержащих, экстрактов

...реагентов для удаления нуклеиновых кислот и повысить выход ферментов с 60 до 80-1003. 1 1232680Изобретение относится к биохимии,а именно к способам получения ферментов из микробиологического сырья,Источником ферментов часто служатклетки микроорганизмов. Очистка фермента включает в себя несколько стадий: получение клеточного экстракта,грубое фракционирование клеточногоэкстракта с целью удаления нуклеиновых кислот и очистка фермента хроматографией.В связи с этим важнейшей задачейна первых стадиях очистки ферментовявляется освобождение от нуклеиновыхкислот с помощью различных фракционирующих реагентов,Цель изобретения - увеличение содержания фермента в целевом. продукте.В предлагаемом способе используютв качестве фракционирующего...