Штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент внеклеточной щелочной фосфатазы и ее предшественника
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1632975
Авторы: Манувахова, Несмеянова, Федотикова, Цфасман
Текст
35 Морфологические признаки .Клетки прямые, палочковидной формы, подвижные, неспоровые.Культуральные признаки.Клетки хорошо растут на глюкозоминеральной среде, содержащей в 1 л, г. МаС 1 4,68; КС 1 1,49; ИНС 1 1,07; Мд 8040,1; СаС 1 0,04, На 800,099;. ГеС 1 0,0022, трис 6; глюкоза 10, . 10 ортофосфат 1 мМ, тиамин 1 мг; пелтон 0,082. При росте на жидких средах, в том числе на МПБ или ЬВ-бульоне, образуют ровную интенсивную муть. При росте на мясо-пептонном агаре образуют округлые, гладкие с ровными краями, выпуклые, бесцветные колонии.Физиолого-биохимические признаки.Клетки растут при 37 С, оптимум рН 7,5-7,8, В качестве источников углерода используют глюкозу, не усваивают лактозу. При росте в глюкозоминеральных средах требуют 20 мкг/мпметионина.Устойчивость к антибиотикам. 25Устойчив к ампициллину, что обусловлено наличием плаэмиды рН 1-7 с ампициллиновым геном. Растет в присутствии 20 мкг/мп ампициллина.П р и м е р . Культивирование штам ма ВКМ СКД проводят на жидкой глюкозо-минеральной среде с добавлением 0,08% пептона, 0,5 мМ ортофосФата и 20 мкг/мп ампициллина с азраацией, при й = 37 С. При посеве 10 клеенок/мп в медицинских колбах объемом 0,7 л в 200 мп среды за 5 ч культивирования при интенсивной аэрации на качалке со скоростью 120 об./мин культура достигает экспо ненциальной стадии роста, Затем культуру разбавляют в соотношении 1/20 свежей средой того же состава, но без ортофосфата и культивирование продолжают еще 15 ч, Через ч 4 инку бации достигается максимальная активность внутриклеточной щелочной Фосфатазы 0,07 Е/мп, удельная активностьм 0,5 Е/мг белка.При последующем культивировании начинается секреция щелочной фосфата 50 зы в культуральную среду. Максимальное содержание фермента в среде достигается через 15 ч, когда он составляет 847. от всего синтезированного Фермента и является преобладающим белком культуральной жидкости. Максимальная активность щелочной Фосфатазы в среде составляет 0,16 Е/мп,внутриклеточной 0,03 Е/мп. Удельнаяактивность 4 Е/мг белка. В то же время клетки содержат значительное количество предшественника, который локализован в мембранах. Его содержаниев этом компартменте не меняется в течение всего периода секреции щелочной фосфатазы в культуральную среду.Определение активности внеклеточной фосфатазы проводят стандартнымметодом по скорости гидролиза п-нитрофенилфосфатаЗа единицу Фосфатнойактивности принимали количество фермента, которое гидролизует 1 мкмольсубстрата (и-нитрофенилфосфата) вмин. Анализ содержания внеклеточнойщелочной Фосфатазы и мембраносвязанного предшественника с помощью иммуноблотинга с использованием антителпротив щелочной Фосфатазы показал,что выход внеклеточной фосфатазы составляет 8 мг/л, а предшественника0,5 мг/л,Внеклеточную щелочную Фосфатазувыделяют из фильтрата культуральнойжидкости, путем двухкратной Фильтра- .ции культуральной среды через мембранные фильтры ХМА и ХМв сочетании с тепловой обработкой, чтопозволяет добиться 992-ной чистотыФермента. Из клеток выделяют мембраны, их селективно солюбилиэуют и проводят очистку предшественника,Таким образом, предлагаемый штаммЕ. со 11 ВКМ СКД обладает способностью одновременно продуцироватьвнеклеточную щелочную Фосфатазу инакапливать,внутриклеточно предшественник, что позволяет в одном процессе, используя как культуральнуюсреду, так и клетки, выделять щелочную Фосфатазу и ее предшественник.Штамм стабилен прн культивированиии устойчив при хранении в различныхусловиях.Формула изобретенияШтамм бактерий ЕзсЬег 1 сЬ 1 а со 11 ВКМ СК"297 Д - продуцент внеклеточной щелочной фосфатазы и ее предшественника,
СмотретьЗаявка
4495706, 18.10.1988
ИНСТИТУТ БИОХИМИИ И ФИЗИОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ АН СССР, КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМ. КРАСНОЙ АРМИИ
НЕСМЕЯНОВА МАРИНА АРТЕМЬЕВНА, МАНУВАХОВА МАРИНА ШАУЛОВНА, ФЕДОТИКОВА ЕВДОКИЯ ТИМОФЕЕВНА, ЦФАСМАН ИРИНА МАТВЕЕВНА
МПК / Метки
МПК: C12N 1/20, C12N 15/55, C12N 9/14
Метки: бактерий, внеклеточной, еsснеriснiа, предшественника, продуцент, фосфатазы, штамм, щелочной
Опубликовано: 07.03.1991
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-1632975-shtamm-bakterijj-essnerisnia-coli-producent-vnekletochnojj-shhelochnojj-fosfatazy-i-ee-predshestvennika.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент внеклеточной щелочной фосфатазы и ее предшественника</a>
Способ определения качественного состава внеклеточных протеолитических ферментов бацилл
Номер патента: 1326615
Опубликовано: 30.07.1987
Авторы: Андрошюнене, Дагите, Люткявичюс, Мешкис, Рубикас, Юркшайтите
МПК: C12N 9/52, G01N 27/26
Метки: бацилл, внеклеточных, качественного, протеолитических, состава, ферментов
...белки из одного диска служат контрольной полосой для выявления общего числа протеолитических фер. ментов (фиг.1, В, 11). Две другие полосы отрезают и накладывают: одну на индикаторную пластинку с ингибитором металло-протеиназ о-фенантрилином (0,5 мг/мп) для выявления сериновых3 13протеиназ (фиг. 1, В, 9); вторую - наиндикаторную пластинку с ингибиторомсериновых протеиназ фенилметансульфонилфторидом (0,5 мг/мл) для выявленияметалло-протеиназ (Фиг,1, В, 10). Наличие ферментов определяют по зонампросветления индикаторной молочноагарозной пластинке (см, схему нафиг. 1) .П р и м е р 2. Сравнение состава1протеиназ, синтезируемых клеткамив отдельных колониях Вас 111 цв вцЬг 11 гз Сяг 4 и Вас 111 цв ГЬцгдп 8 гепвгв203 (фиг. 2) .Клетки...
Способ определения токсичности веществ
Номер патента: 1057532
Опубликовано: 30.11.1983
Авторы: Астахова, Божко, Григорьева, Давыдкина, Наумов, Тарасова
МПК: C12N 1/00
Метки: веществ, токсичности
...несущих мутации по репарации.Согласно данному способу в качестве .Ртест системы используют киетки ба бдо-.МИО (,фМрщ 10 тл, в которые цля облегчения доступа тестируемых веществввоцят мутации; повреждающив структуруклеточной оболочки (01,(о ), При этомтестируемое вещество наносят на дискиэ фильтровальной бумаги, который домешают на бактериальный газон. Через24 ч инкубации при 37 фС оцениваютмутагенный(токсический) эффект тестируемого вещества по величине зоны гибелибактерий. Тест-система отличается повышенной чувствительностью благодарямутациям, поврежцаюшим клеточную оболочку 1,Однако способ характеризуется длитвиьпостыл гестирования. Кроме того, микросомы экстрактов печени, используемыхв тестах на баФВОИЕИОдля метаболической...
Способ получения сесквитерпеновых производных или их солей
Номер патента: 1056901
Опубликовано: 23.11.1983
Авторы: Васеи, Есимаса, Масано, Такетоси, Хироцугу, Ясуо
МПК: A61K 31/343, A61P 13/12, A61P 17/00, A61P 29/00, A61P 35/00, A61P 37/00, A61P 37/08, C07D 307/94, C07D 493/02
Метки: производных, сесквитерпеновых, солей
...или агентов.Терапевтические агенты. Полученные сесквитерпеновые производные ,общей формулы (1) и их соли являются полезными как препараты длялечения нефрита, В этом случае их вводят в фармацевтические рецептуры вместе с обычными Фармацевтическими приемлемыми носителями, которымиявляются, например, разбавители или экципиенты, такие как наполнители,расширители, связующие, смачивающиеагенты, деэинтеграторы, поверхностно-активные агенты и смазки, которые обычно применяют для приготовления лекарств, зависящих от способа введения единичных форм дозы.Для лечения могут быть выбраныв соответствии с целью лечения раз личные формы дозы испособы введения лекарства как средства лечениянефрита, Типичныи формами дозы являются таблетки, пилюли,...
Способ получения 5 -бром-6 -фтор-16 метил-3, 17 диоксипрегнан-20-она
Номер патента: 437280
Опубликовано: 25.07.1974
Авторы: Квит, Малиновска, Сальва, Яворска
МПК: C07C 169/30
Метки: бром-6, диоксипрегнан-20-она, метил-3, фтор-16
...вещества, содержащего свыше 80/о изомеров 5 абром-бр-фтора - метил-Зр- диацетокси (20) -,прегнена.Этот продукт растворяют приблизительно в 100 мл эфира и к охлажденному раствору добавляют 10 мл 30%-ного раствора перуксусной кислоты в уксусной кислоте, в которой следы серной кислоты предварительно нейтрализуют, добавляя 200 мл ацетата натрия. Смесь оставляют в темном месте в тече 5 1 О 15 го г 5 зо35 40 45 50 55 60 б 5 ние 4 суток, После истечения этого времени эфирный раствор промывают по очереди водой, кислым карбонатом натрия и водой до нейтральной реакции, сушат безводным сульфатом натрия и эфир упаривают. При этом получают приблизительно 9 г густого масла, содержащего свыше 60/о смеси изомеров 5 к-бром-бр - фтода-метил,20 -...
Штамм облигатно-термофильной бактерии 132-4к-продуцент щелочной фосфатазы
Номер патента: 1017731
Опубликовано: 15.05.1983
Авторы: Бобык, Егорова, Логинова, Серегина
МПК: C12N 15/00
Метки: 132-4к-продуцент, бактерии, облигатно-термофильной, фосфатазы, штамм, щелочной
...способностью к биосинтезувысокоактивного Фермента - щелочнойФосфатазы и культивируемый на среде.простого состава.Предлагаемый штамм облигатно-термофильных бактерий является новымвидом бактерий рода ТЬегвцз и выде"лен из почвы тропической зоны. штамм 60ТЬегвцз гцЬег 132-4 К имеет оптимальную температуру роста 55600 С.ВНИИПИ Заказ 3481/28 Культура поддерживается на косяках с картофельно-пептонной агаризованной средой (20-ный картофельныйотвар, содержащий 0,5 пептона,0,1 дрожжевого экстракта, 3 агарагара). Внутриклеточная щелочнаяФосфатаза проявляет максимальнуюактивность через 8-10 ч роста куль"туры на жидкой среде вышеукаэанногосостава. Активность щелочной фосфатазы в бесклеточных экстрактах достигает 33 юЕ.Время генерации...
Предыдущий патент: Штамм бактерий рrотеus vulgaris-продуцент рестриктазы р ii
Следующий патент: Дутьевая фурма доменной печи
Случайный патент: Залавливающее устройство рыбонасоса