C12N 9/14 — гидролазы (3.)

Номер патента: 1661211

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Бойков, Малыгин, Мацкова, Назаренко, Чикаев

МПК: C12N 9/14

Метки: bacillus, амylоliquеfасiеns, биомассы, в-3188, вкпм, ферментов, штамм

...АТР и инкубируют в течение 16 ч при 10 С. Затем проводят повторную рестрикцию эндонуклеазой Вагп Н 1. Продукты каждой из этих реакций анализируют электрофорезом в 1 о -ном агарозном геле. Каквидно из электрофореграммы, полученный препарат эндонуклеазы Вагп Н 1 обеспечивает полную рестрикцию ДНК фага 1 с образованием фрагментов ожидаемой длины.После добавления ДНК-лигазы происходитполная сшивка рестриктов. Повторная рестрикция продукта лигазной реакции приводят к образованию характерных фрагментов рестрикции. Данный тест показывает, чтопрепарат Вагп Н 1 свободен от примесей экзонуклеаз, фосфатаз и неспецифических эндонуклеаз.П р и м е р 2. Свойства экзонуклеазыВ.аву 1 оИрце 1 ас 1 епз,В данном примере приведены доказательства того, что...

Номер патента: 1661212

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Верхозина, Виноградова, Дегтярев, Дедков, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: асinетовастеr, аса, бактерий, продуцент, рестриктазы, саlсоасетiсus, штамм

...6 С вДН К% (по плавучей плотности).Культуральные признаки. 10Дает рост на МПА, при температурномдиапазоне от 5 до 30 С. Оптимальнаятемпература 25 С. Оптимальный рН 7. Растет при 0,5 - 30 йаС. Оптимальная для роста О,б 1 чаС 1. Требователен к аэрации. 15Хранение осуществляют под вазелиновыммаслом в 30%-ном глицерине при 70 С.П р и м е р 1. Получение биомассы ивыделение рестриктазы,Ночную культуру штамма 20А.са 1 соасебсоз засевают в свежую питательную среду, состоящую из 10 г/л триптона ("ОИсо"); 5 г/л дрожжевого экстракта1,"Зегча"); 6 г/л йаС 1; остальное вода. Культивируют при 25 С в термостатированной 25качалке в двухлитровых колбах с 200 млпитательной среды при 200 об/мин до достижения логарифмической фазы роста,Клетки осаждают...

Номер патента: 1661213

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Верхозина, Виноградова, Дегтярев, Дедков, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: flаvовастеriuм, аquатilе, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...нить. ОбнаруживаЬтся рост при 15 - 30 С, Оптимальной дляЬоста является 25-30 С. Наблюдается ростпри концентрациях КаС 0 - 1,5 О/ оптимальные значения 0-0,7 О. Оптимальными являются нейтральные значения рН. При рН 5 и9 роста не обнаруживается.Дает активный рост на бульоне Хоттинегра. Требователен к аэрации.Хранение штамма осуществляют подваэелиновым маслом в ЗОО-ном глицеринепри -70 С,Штамм Е,ароайе Всодержит уникальную рестриктазу с ранее неизвестнойспецифичностьо5 -ССС 6 С 3 -666 С 6-5Изобретение иллюстрируется следующими примерами,П р и м е р, Получение биомассы и выделение фермента,Ночную культура Е,/азиате засевают всвежую питательную среду МПБ. Культивируют при 25 С с аэрацией два объема вминуту при 2000 об/мин мешалки до...

Номер патента: 1661214

Опубликовано: 07.07.1991

Авторы: Гимадутдинов, Ожерельев, Перфирьева, Синявина, Тюлина, Шарапов, Юсупова

МПК: C12N 9/14, C12N 9/22

Метки: serratia, бактерий, маrсеsсеns, продуцент, штамм, эндонуклеазы

...(реакционная смесь без Фермента), наодну оптическую единицу за час инкубациив пересчете на 1 мл культуральной жидкости(А 26 о ед/мл/ч).В качестве субстрата используют препараты высокополимерной ДНК из тимуса 5теленка, выделенной по методу Кэя в модификации Бенинга, или коммерческие препараты высокополимерной ДНК,Сравнительная характеристика активности внеклеточной эндонуклеазы штаммов Я,щагсезсепз известных и предлагаемого в качестве продуцента эндонуклеазы на питательной среде следующего состава:Глицерин 5Цитрэт аммония 5Двузамещенный фосфаткалия 10Сернокислый магний 0,5Хлористый натрий 0,5Сернокислое железо 0,025Гидролизат казеина 1Дрожжевой экстракт 3рН среды 7,6для получения эндонуклеазы представленав таблице.П р и м е р 1, Получение...

Номер патента: 1671691

Опубликовано: 23.08.1991

Авторы: Авиженис, Валанчюс, Паюодис

МПК: C12N 9/14

Метки: bacillus, suвтilis, ацетилглюкозаминидазы, в-2471, вкпм

...Ьипьтрате образуется осадок. В цримерлх 6 - 9 суси: цзцю бдсс); сначала обрабатьи)дют раэц),и) копчг - ствами препарата -11-апет) глюкоэаминицазы, а потом - ранее )добра)ным оптимальным количеством хлористогокдльцця и перлита, затем подвергают Фильтрации и диайнльтрации. Обработка биомассы препаратом -Я-ацетилглюкоэамицидаэы в количестве от 2 до 4 г оказывает существенное влияние ца диафильтрацию. Диалиэированный йильтрат получают без осадка, а выход-11- ацетилглюкозаминидазы увеличивается в 2 разаНа основе исследований приняты следующие условия Фильтрации: суспензию биомассы обрабатывают в течение 2 ч препаратом (3-11-аиетилглюкоэамицидазон в количестве 2 - 4 г, добавляют 8 об.% хлористого кальция и насыщенным раствором...

Номер патента: 1678832

Опубликовано: 23.09.1991

Авторы: Аникейчева, Калугин, Коваленко, Самко, Соколов, Фицнер, Фодор, Хорошутина, Эльдаров

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: lастовасillus, бактерий, продуцент, рlаnтаruм, рестриктазы, штамм

...и сеооводород - не образует.)Келатина уколом - разжижения нет,4 увствитель ность к антибиотикам,Культура чувствительна ко многим антибиотикам: пенициллину, стрептомицину, канамицину, тетрациклину, хлорамфениколу,эритромицину, олеандомицину, неомицину,карбенициллину, линкомицину, гентамицину, метициклину, оксациллину, нистатину,ампициллину; резистентна к полимиксину.Оптимальные условия выращивания ихранения, Культура хорошо растет на МПБ,бульоне Хоттингера, средеВ и среде ч. 7,без аэрации, при 30-37 С.Наибольший выход биомассы, содержащей рестриктазург 1, получают при выращивании на питательной среде, котораясодержит в 1 л, г; дрожжевой экстракт 5;пептон 10; глюкоза 5; йа 2 НРОп 12 Н 20 2,2;МаС з; М 980 0,5; СаС 20,25.Существенным...

Номер патента: 1678833

Опубликовано: 23.09.1991

Авторы: Аникейчева, Калугин, Самко, Соколов, Фицнер, Фодор, Хорошутина, Эльдаров

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: alvei, bacillus, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...в течение 4 - 5 ч додостижения конца логарифмической фазыроста, 40На среде "рыбный экстракт" культурарастет медленно, а активность рестриктазыв биомассе значительно ниже, чем при культивировании на средах Хоттингера иВ.Оптимальная температура роста 37 ОС, 45но растет и при 40-45 С,Рабочие культуры пересевают иа бульон Хоттиигера один раз в 7 - 10 дн, Храняткультуру в полужидком агаре под вазелиновым маслом или в лиофилизированном состоянии в ампулах,Культура непатогенна для мышей.Существенным фактором культивирования является аэрация, В анаэробных условиях выход рестриктазы Вачснижается, 55Инкубационная смесь для определенияактивности рестриктазы Вач 6751 обьемом25 - 50 мкм содержит 0,01 М трис-НС 1, рН7,5, 0,01 МсС 2, 0,001 М...

Номер патента: 1686000

Опубликовано: 23.10.1991

Авторы: Дегтярев, Пучкова, Речкунова, Серов, Терещенко

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, sтеаrотнеrморнilus, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...Выход фермента Взз Т не менее 10000 ед, акт,/г влажной биомассы.Полученная рестриктаза Взз Т характеризуется следующими свойствами; узнает и специфически расщепляет последовательность нуклеотидов СС(А/Т)(А/Т)86, оптимальное значение рН для действия рестриктазы 7,5 - 8,0, оптимальная температура действия 50-55 С, оптимальная концентрация МаС 50 мМ.Определяющие отличия предлагаемого штамма В. зееагойегаорЫцз (360) В: высокое содержание рестриктазы Взз Т 1, составляющей 10000 ед.акт./г влажной биомассы (в 5 раз выше), отсутствие патогенности штамма, использование для культивирования микроорганизмов простой дешевой среды.П р и м е р 1. Получение биомассы.Клетки В. з 1 еагойепворЫЬз (360), хранящиеся под слоем вазелинового масла при 40 С,...

Номер патента: 1687614

Опубликовано: 30.10.1991

Авторы: Богданова, Дегтярев, Каравайко, Приходько, Речкунова, Цаплина

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: ruвеr-продуцент, бактерий, рестриктазы, тнеrмus, штамм

...молоко, разбавленное в 5 раэ, свертывают и пептонизируют, гидролизуют желатин в концентрации 10 и 50%, сероводород, индол и ацетоин не образуют, серу и тиосульфат не окисляют, Бактерии чувствительны к ИаС в среде (1% йаС в среде ингибирует рост бактерий), образуют каталаэу, антибиотики не образуют. Культура способна растворять клеточные стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Минимальная температура роста на агариэованной картофельной среде 40 С, оптимальная 60 С, максимальная 70 С.Культуру хранят в лиофильно высушенном состоянии,Для культивирования Т,гцЬег 9 применяют питательную среду следующего состава, %:Картофельный отвар 20Пептон 0,5Дрожжевой экстракт 0,02рН 7,8 - 8,2, Культивирование проводят при 60 С в течение...

Номер патента: 1689400

Опубликовано: 07.11.1991

Авторы: Дегтярев, Пучкова, Речкунова, Серов, Терещенко

МПК: C12N 9/14

Метки: flаvовастеriuм, бактерий, ваlusтinuм, продуцент, рестриктазы, штамм

...неутилизирует. Лизин, аргинин, орнитин и фенилаланин не ферментирует,Отношение к антибиотикам.Культура устойчива к пенициллину, ампициллину,мономицину, неомицину, канамицину, оксациллину, чувствительна ктетрацикливу, стрептомицину, олеандомицину, левомицетину, эритромицину, карбенициллину, линкомицину, гентамицину,.рифампицину.Штамм хранят в лиофильно-высушенном состоянии и на питательном агаре подваэелиновым маслом,Для культивирования Е.Ьацзтпцпч 324применяют питательную среду следующегосостава, дистиллированная вода 1000,0; сухой дрожжевой экстракт 20,0; уксуснокислый натрий 2,0, сернокислый магний 0,2,фосфор н окисл ый калий 2,0. Готовая средаимеет рН 7 Культивирование проводят при 30 С со скоростью вращения качалки 200 об/мин до...

Номер патента: 1693049

Опубликовано: 23.11.1991

Авторы: Величко, Полянская, Черкасова, Шутова

МПК: C12N 9/14, C12N 9/16

Метки: культивирования, пектолитических, питательной, приготовления, продуцентов, среды, ферментов

...целлюлолитическихферментов при ферментолизе свекловичного жома (содержание целлюлозы до 70 о )позволяет провести Ферментолиэ целлюлозы до образования олигосахаридов, что позволяет сократить лаг-фазу и получитьболее высокую скорость роста продуцента. Значения рН 2,8-3,2 для проведениякислотного гидролиэа являются существенными, поскольку именно в этом пределе рН образуются продукты фосфоролиза, кото рые являются стимуляторами биосинтезапектолитических ферментбв.Дозировки ферментов для гидролиэаподобраны экспериментально.П р и м е р 1. 3 г свекловичного жома и 10 1 г солодовых ростков заливают 100 мл воды. Доводят ортофосфорной кислотой рН суспенэии до 2,6 и нагревают до 125-130 С, выдерживают смесь при этой температуре 2...

Номер патента: 1694647

Опубликовано: 30.11.1991

Авторы: Африкян, Дегтярев, Репин, Речкунова, Хачатурян, Читчян

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, бактерий, вrеvis, продуцент, рестриктазы, штамм

...качалках при 30 С.Недостатками данного штамма (по литературным данным) являются низкий выход фермента, составляющий 3000 ед/г сырой биомассы, а также требовательность к богатым и дорогостоящим питательным средам (выход биомассы не указан). Цель изобретения - выявление штамма ВасИоз Ьгечз - продуцента, синтезирующего рестриктаэу ВЬч 121, способную узнавать и расщеплять последовательность нуклеотидов 56(А/Т)6 С(А/Т)Сс более высоким выходом фермента.Штамм выделен из бурой окультуренной почвы в результате систематического поиска штаммов - продуцентов эндонуклеаз рестрикции в роде ВэсИоз и хранится в ВКПМ под регистрационным номером В,Рестриктаза иэ ВасИоз Ьгечз Вследующими признаками.Кул ьтурал ьно-морфологические и ризнаки. На МПА...

Номер патента: 1701745

Опубликовано: 30.12.1991

Авторы: Дегтярев, Малуп, Николаенкова, Репин, Речкунова, Свиридов

МПК: C12N 9/14

Метки: sтrертомyсеs, биомассы, обогащенной, рестрикции, эндонуклеазой

...со скоростью 200 - 220 об/мин, а начиная со вторых суток (с 25 ч) - со скоростью 50 об/мин, что позволяет повысить выход биомасы и целевого фермента.В табл.4 - 5 приведены зависимости выхода биомассы и фермента от времени культивирования и скорости перемешивания гомогенной биомассы.Из табл,4 и 5 видно, что увеличение урожая клеток в первой фазе культивирования(24 ч) происходит при перемешивании со скоростью 200 - 220 об/мин, что связано с эффективным разрушением клеточных ассоциаций, а уменьшение скорости перемешивания до 150 об/мин во второй фазе роста (после 24 ч) способствует увеличению гомогенной биомассы, обогащенной рестриктазой,На чертеже представлены электрофореграммы продуктов гидролиза линеаризованной по Чзр - сайту плазмиды...

Номер патента: 1703687

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Богданова, Дегтярев, Речкунова, Цаплина

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...также относится крайне низкий выход целевого продукта - около 100 ед,/г биомассы (4000 ед. из 30 г),Целью изобретения является упрощение процесса и повышение выхода целевого п родукта.Способ заключается в том, что используют штамм термофильной бактерии ТЬегацз гцЬег ВКМ В(ВС), продуцирующий единственную рестриктазу Тгц 201 Г с повышенным ее содержанием, Штамм культивируют на питательной среде, клетки разрушают ультразвуком и проводят очистку фермента путем хроматографий на фосфоцеллюлоэе и гепарин-сефарозе.П р и м е р, Культивирование штамма и получение биомассы.Клетки ТЬеггпцв гцЬег ВСвысевают из ампулы на твердую среду, содержащую 207 О картофельного отвара, 0,57 ь пептона и 0,02 дрожжевого экстракта, инкубируют в течение 1 сут при 60...

Номер патента: 1703689

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Билай, Гомартели, Джобава, Квеситадзе, Ломкаци, Церетели, Школьный

МПК: C12N 9/14, C12N 9/26

Метки: canescens, гриба, продуцент, реniсilliuм, фруктофуранозидазы, штамм

...короткой,Культуральные признаки. На агариэованных искусственных средах (сусло-агар, картофельно-глюкоэный агар, картофельный агар) и синтетических агаризованных средах(средах Чапека, Сабура, Ролена-Тома. агариэованной среде с сахарозой) штамм растет хорошо,Линейный рост колоний штамма на агаризованных средах по дням: сусло-агаровой среде 5-й день 35-48 мм; 10-й день - до 85 мм; среда Чапека - 5-й день 30 мм; 10-й день 40 мм; агаризованная среда с лактозой - 5-й день 28-40 мм; 10-й день до 70 мм.На отрубях в условиях твердо-фазной ферментации штамм растет хорошо.Отношение к углеродному питанию, Хороо усваивает моносахариды; глюкозу, арабинозу, сахароспирты: сорбит, манит, дульцит, иэ дисахаридов: лактозу, сахарозу, мальтозу, а также...

Номер патента: 1707077

Опубликовано: 23.01.1992

Авторы: Аникейчева, Калугин, Либрик, Самко, Соколов, Фицнер, Хорошутина

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...после добавления в ферментер инокулята в соотношении 1:10 к объему среды,Рабочие культуры пересев: от на среду Хоттингерэ один раз в 8 - 10 дней, Хранят культуру в полужидком агаре под вазелиновым маслом или в лиофилизиронэнном виде в ампулах.Выделение рестриктазы Взр 01 производят фракционированием полиэтиленимином и хроматографией на колонках с аффинным сорбентом и ионообменниками. 5 10 1 Г, 20 25 30 35 40 45 50 55 Инкубационная смесь дпя определения активности рестриктэзы ВзрОобьемом 50 мкп содержит 0,01 М трис-НС 1 буфер(рН 7,4) 0,01 М гх 9 С 12, 0,001 М дитиотреитолэ (или .,007 М 2-меркэптоэтанолэ) и 2 мкг ДНК фага Л . Инкубацию проводят при 37 С в течение 60 мин, Продукты расщепления Д 11 К фага Л рестриктэзой ВзрО 1...

Номер патента: 1712414

Опубликовано: 15.02.1992

Авторы: Величко, Полянская, Черкасова, Шутова

МПК: C12N 9/00, C12N 9/14

Метки: выделения, пектолитических, ферментов

...0,8, Смесь активно перемешивают, После полного растворения сульфата аммония смесь барботируютвоздухом в количестве 0,1 объема на объем смеси в 1 мин. Образующуюся пену собирают и гасят. Перемешивание и барботажзаканчивают с прекращением пенообразования. Образующаяся жидкость представляет собой высокоактивный очищенный10концентрат пектолитических ферментов, из которого препарат вызделяют методом лиофильной сушки, С 1 м культуральной жидкости после вакуум-концентрированияполучают 100 л концентрата с активностью40 ед/мл, а после осаждения сульфатом аммония, сбора и гашения пены - 2,2 л раствора выделенных пектолитических ферментовс активностью 1778 ед/мл, Суммарная активность пектолитических ферментов.3,91 10 ед, 20П р и м е р 2, Выделение...

Номер патента: 1712415

Опубликовано: 15.02.1992

Авторы: Аникейчева, Калугин, Либрик, Самко, Соколов, Фицнер, Хорошутина

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...аэрации при 370 С на бульоне Хоттингера с добавлением 2 глюкозы, а также на среде, содержащей в 1 л, г: дрожжевой экстракт 5; пептон 10; глюкоза 5; МагНРО 12 НгО 2,2; МаС 3; Мд 804 0,5; СаО 2 0,25, рН 7,2-7,5. Ферментацию культуры проводят после добавления в ферментер инокулята в соотношении 1:10 к объему среды. Рабочие культуры пересевают на бульон Хоттингера один раз в 7-10 дней. Храняткультуру в полужидком агаре под вазелиновым маслом или в лиофилизированном виде5 в ампулах,Культура непатогенна для мышей.Инкубационная смесь для определенияактивности рестриктазы ВЬчА 1 объемом 40 -50 мкл содержит 0,05 М трис-НО, рН 7,5,10 0,01МдСг, 0,001 М, дитиотреитола, 0,1 ММаС 1,2 мкгДНКфагаЛи 0,5-10 мкл фермента, Инкубацию проводят при 37 С в...

Номер патента: 1723121

Опубликовано: 30.03.1992

Авторы: Данилова, Жукова, Зорина, Максимов, Матюшина, Молодова, Ожерельев, Уваркина, Шатаева

МПК: C12N 9/14

Метки: гиалуронидазы

...проводили в оптимальных условиях; рН 4,5, скорость 70 мл/ч/см ).Из табл. 2 следует, что десорбцию гиалуронидазы в статических условиях необходимо проводить при рН выше 8,5, при этом выход на стадии составлял 55-60 . Увеличение рН выше 8,8 приводило к элюции большого количества балластных белков, что вызывало уменьшение удельной активности в конечных препаратах (см. табл. 5),В табл. 3 приведены экспериментальные данные по подбору условий обесцвечивания растворов гиалуронидазы активированным углем, 5 10 15 Результаты опытов свидетельствуют о том, что при концентрации угля 1,0 - 1,5 происходит обесцвечивание раствора гиалуронидазы на 75 - 78 при сохранении активности на стадии до 85-90 , При снижении концентрации угля в растворе остается...

Номер патента: 1724689

Опубликовано: 07.04.1992

Авторы: Андреева, Репин, Сизов, Хомов

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: tgatca-3, нуклеотидов, последовательность, расщепляющей, рестрикции, узнающей, эндонуклеазы

...прозрачные, блестящие, с ровным краем. Оптимальная температура роста 65 С, рН 7,0-1,2. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Культуру поддерживают пересевом на плотных средах, хранят в растворе глицерина при -70 С или в лиофильно-высушенном состоянии,Физиологические признаки,Не восстанавливает нитраты, отрицателен по лецитиназе, в реакции с метиловым красным и Фогес-Проскауера; не гидролизует крахмал, казеин, желатин, эскулин; не использует малонат, цитрат, не растет при концентрации МаС 1 5 ои 0,001 лизоцима; энергично образует кислоту иэ глюкозы, очень слабо - из арабинозы, ксилозы и маннита; не дезаминирует фенилаланин, не выделяет индол и сероводород.Штамм высокочувствителен к антибиотикам: пенициллину, карбенициллину, ампициллину,...

Номер патента: 1738853

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Корсун, Лебедев

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: luтеns, micrococcus, биомассы, в-2836, вкпм, продуцента, рестриктазы

...клеточного лизата с 0,5 мкг ДНК фага лямбда);анализ клонов на содеркание рестриктазы Ма 1 при пассировании на среде без ДНК (контроль, первая дорожка - 5 мин инкубации, вторая - 60 мин инкубации одинакового количества клеточного лизата с 0,5 мкг ДНК фага ламбда);анализ биомасс М. 1 цсеоз на содержание рестриктазы Мв 1, полученных с пассираванием на среде без ДНК, с пассированием на среде с ДНК. В пробы добавляли соответственно клеточного лизата 0,5(а); 1,0(б); 2,0(в); 3,0(г); 5,0(д); 10,0(е);0,025(ж); 0,05(з); 0,1(и); 0,15(к); 0,25(л) и 0,75(м) мкл, инкубировали с 0,5 мкг ДНК фага лямбда в течение 1 ч при 37 С.Из полученных данных установлена, что картина полного специфического гидролиза ДНК рестриктазой наблюдается в первой...

Номер патента: 1752769

Опубликовано: 07.08.1992

Авторы: Андреева, Афиногенова, Гордиенко, Лебедев, Майстренко, Пустошилова

МПК: C12N 9/14

Метки: gtcgac, нуклеотидов, последовательность, расщеплять, рестриктазы, способной, узнавать

...в 6 - 8 раз больше, чем в известном способе, Полученная рестриктаза характеризуется следующими свойствами;узнает и гидролизует последовательностьнуклеотидов 6 ТС 6 АС, оптимальное значе 10 ние рН для действия рестриктазы 8,0; оптимальная температура 37 С; для проявленияактивности рестриктазы требуются ионыМц (оптимальная концентрация Мц 1015 мМ); оптимальная концентрация йаС в15 реакционной смеси 100-120 мМ.Полученный ферментный препарат свободен от значительных количеств неспеци-фицеских нуклеаз и фосфатаз, Приинкубации 200 ед,акт. фермента с 1 мкг ДНК20 фага в течение 2 ч при 37 С наблюдаетсястандартный набор фрагментов ДНК, Фрагменты ДК, полученные при инкубации 10ед.акт, фермента с 1 мкг ДНК фага в течение2 ч при 37 С, сшиваются...

Номер патента: 1781295

Опубликовано: 15.12.1992

Авторы: Клуге, Лещинская, Рокштро, Филимонова, Шарипова, Штенц

МПК: C12N 9/14

Метки: бактериофагов, ингибитор, рнк-геномных

...(Эн"донуклеаза Ят, ЕС 3.1,30,2) представляетсобой термолабильный фермент -эндонуклеазу, атакующую ДЙК и РЙК, Удельная активность препарата составляет 0,35 х 106ед/мг белка. Препарат производится на Вышнеполоцком заводе ферментных препаратов Миймедбйопрома СССР.Рибонуклеаза панкреатическая (РНКаза А; ЕС 3.1.27.5), коммерческий ирепарат,йройзводимйй на Ленинградском фармзаводе, Представляет собой фермент, расщепляЮшбий РНК с удельной активностью0,35 х 10 ед/мг белка,Дезоксирибонуклеаза панкреатическая(ДН Каза 1, ЕС 3.1.21.1), коммерческий препарат, производимый на Ленинградскомфармэаводе. Представляет собой белковыйферментный препарат, расщепляющийтолько ДХК с удельной активностью 0,5 хх 10 ед/мг белка.Все исследуемые ферменты -...

Номер патента: 1784642

Опубликовано: 30.12.1992

Авторы: Верхозина, Дегтярев, Дедков, Жилкин, Колыхалов, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: bacillus, sрнаеriсus-продуцент, бактерий, рестриктазы, штамм

...(1 6-18 ч) клетки подвижные, палочковидные, 0,6 мкм в поперечнике и 1,5-3мкм в длину. Располагаются поодиночке,иногда короткими цепочками, Грамположительные. Клетка способна образовыватьсферическую спору, расположенную терминально и раздувающую спорангий,Физиолого-биохимические признаки.Штамм - строгий аэроб. Каталазоположительный. Не образует кислоту, газ и ацетоиниз глюкозы. Кислоту не образует также изарабинозы, сорбита, рамнозы, сахарозы,. мальтозы, лактозы, глицерина, маннита,этанола. Гидролизует желатин, но не крахмал и твин, Не восстанавливает нитрат внитрит, Не образует сероводород и индол.В аэробных условиях растет на среде изгидролизата кильки при температуре от 4 до40 С (оптимум 37 С), концентрации йаС от0 до 3%...

Номер патента: 1796676

Опубликовано: 23.02.1993

Авторы: Арутюнян, Гончар, Грубер, Левченко, Никольская-Санович

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктирующей, эндонуклеазы

...размытыми и эффективногонуклеиновых кислот осуществляют с по- разделения ферментов не происходит, Вмощью сульфата стрептомицина, Высалива- препарате В Яаи 6782 содержатся примесиние белков проводят сульфатом аммония нуклеаз, Выход фермента 1200 ед/г, Актив(СА) 800 насыщения, Осадок оастворяют в ность 2000 ед/мл. Удельная активностьРБ рН 9 до конечной концентрации 2 мг/мл, 50 55000 ед/мг.диалиэуют от СА и наносят на колонку Для стандартной процедуры выделения1,2 х 10 см с ФЦ, уравновешенную тем же фермента был выбран пример 2.буфером со скоростью 10 мл/ч, Колонку про- Доказательства высокой степени чистомывают тремя объемами РБ и элюируют ты ферментного препарата получены прифермент двойным комбинированным гра...

Номер патента: 1806191

Опубликовано: 30.03.1993

Авторы: Андреева, Беличенко, Дегтярев, Зернов, Репин, Речкунова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: micrococcus, species, бактерий, продуцент, рестриктазы, штамм

...округлые, край ровный.Физиолого-биохимические свойства. Аэроб, отрицателен по оксидазе, амилазе, аргининдегидролазе и реакции с метиловым красным, не выделяет сероводород и индол, каталазоположителен, не утилизирует малонат, цитрат, мочевину, не восстанавливает нитраты,Содержание ГЦ пар в ДНК - 77 мол. ф, Хранение штамма осуществляют под вазелиновым маслом или в 30 глицерине приС,Выходрестриктазы Мзр 201 3000 ед/г сырой биомассы,На чертеже представлена злектрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фага лямбда ферментами Ваи Мзр 201,1-ая дорожка - гидролиз Ва 12-ая дорожка - совместный гидролиз Ва 1 1 и Мзр 20 13-ая дорожка - гидролиз Мзр 201 П р и м е р 1. Получение биомассы и выделение фермента,Перед началом работы клетки штамма...

Номер патента: 1806192

Опубликовано: 30.03.1993

Авторы: Воробьева, Дегтярев, Кривопалова, Репин, Речкунова, Фиш

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: viвriо, vна, бактерий, наrvеyi, продуцент, рестриктазы, штамм

...При исследовании разрушенной биомассы в ней обнаружена и выделена эндонуклеазарестрикции ЧЬа 464 , споСобная узнавать и "0расщеплять последовательность нуклеотидо в 5-СТТААО,Определяющими отличиями предлагаемого штамма ЧЬго Ьагчеу являются:штамм содержит одну рестриктаэу ЧЬа 15464вместо трех в прототипе,продуктивность штамма составляет5000 ед/г (более чем в 15 раз выше, чем уштамма-прототипа).На чертеже представлена электрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фагаферментами А 1и ЧЬа 464 .1-ая дорожка - гидролиз Ат2-ая дорожка - совместный гидролиз АЛи ЧЬа 464253-ая дорожка - гидролиз ЧЬа 464 ,П р и м е р 1. Получение биомассы ивыделение фермента.Перед началом работы клетки штаммапродуцента пересевают бактериологической петлей на...

Номер патента: 1822877

Опубликовано: 23.06.1993

Авторы: Арутюнян, Громова, Грубер, Кубарева, Левченко, Никольская-Санович, Упорова

МПК: C12N 9/14

Метки: рестриктазы

...1,5 мл/ч. Объем промывочного буфера 12 мл, объем градиента 60 мл, объем одной фракции 1 мл (см,фиг,1)На фиг, 1 обозначены; Н - оттекающая жидкость П - промывочный буфер, Г - градиент, По оси абсцисс - номера фракций, по оси ординат слева - активность фермента (ед/мл), справа - молярность элюирующего раствора чаС (М),Облучен препарат К Явоза 36 ч с удельной активностью 10 тыс,ед/мг белка, однако целевой продукт содержит нуклеазные примеси, Потери активности фермент- ного препарата составляют 25 .П р и м е р 2, Фракции градиента с ФЦ Р, содержащие рестриктазную активность, диализуют против РБ содержащего 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 10 мМ фосфата калия, и проводят аффинную хроматографию на денатурированной ДЕК- целлюлозе,...

Номер патента: 2001952

Опубликовано: 30.10.1993

Авторы: Андреева, Гордиенко, Лебедев, Майстренко, Пустошилова, Репин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: leguminosarum-продуцент, rhizobium, бактерий, рестриктазы, штамм

...Мц ц В 1 е 69 1, дорожки: А - совместный гидролиз Мц + йе 69 1, Б - гидролиз Й 1 е 69 1, В - гидролиз М 1 ц 1; на фиг, 3 - построение рестрикционной карты ДНК фага А с использованием ферментов Н 1 пб 111, М 1 ц 1 ц Й 1 е 69 1; на фиг, 4 - электрофореграммэ гидролизэДНК плаэмиды рВВ 322 рестриктазами Вва 1, В(е 69 1 о Нпб, дорожки: А - обработка Вза 1, Б - обработка Ве 69 1, В - совместный гидролиз Ве 69 1 о Нпб , цифрами указано количество пар нуклеотидов в ферментах ДНК,П р и м е р 1. Культивирование штамма и получение биомассы.Культуру В.едогппозагогп выращивают на питательном бульоне следующего состава, г/л: пептон 10; дрожжевой экстракт 5; хлористый натрий 5; глюкоза 10 ( -бульон),Для получения инокулята суточную культуру...

Номер патента: 1453893

Опубликовано: 30.12.1993

Авторы: Гурьев, Подгорный, Смирнова

МПК: C12N 9/14

Метки: клеток, полинуклеотидфосфорилазы

...и, растворив в небольшом количестве буфера. диалиэируют против негов течение 15-20 ч.Выход ПНФазы 45 ед.акт./г биомассы.40 П р и м е р 2. ПНФаэу выделяют иэ 100г клеток по примеру 1, но используют декстран, полиэтиленгликоль и хлористый натрий в концентрациях 0,5; 2,5 и 9соответственно, Термообработку проводят45 при 56 С, Выход ПНФазы 40 ед.акт,/г клеток,1453893 40 45 мония и последующий диализ, 50 отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и упрощения способа, извлечение фермента осуществляют путем термообработки суспензии клеток в буферном растворе, со держащем декстран, полиэтиленгликоль ихлористый натрий соответственно в концентрациях, мас.: 0,5 - 0,9; 2,5 - 3,0: 6,0- 9,0, при 56 - 58 С в течение 2...