Ворсанова

Номер патента: 1792429

Опубликовано: 30.01.1993

Авторы: Ворсанова, Юров, Яковлев

МПК: C12Q 1/68

Метки: 1-ой, ri-7, альфа, днк, маркирования, плазмидная, предназначенная, рекомбинантная, хромосомы, человека

...инкубацию 5 минут. Клизатудобавляют 1,5 мл 3 М ацетата натрия,осторожно перемешивают раствор и оставляют на час при 0 С. Образующийся осадок 55удаляют центрифугирова нием(1200 об/мин,),нуклеиновые кислоты из супернатантаосаждают 2,5 объемами этилового спирта(.18 С, 30 мин.), Осадок растворяют а 1 мл50 мМ трис-НО (рН 8,0) + ),1 М ацетата натрия и переосаждают этанолом. Процедуру переосаждения повторяют дважды, конечный осадок после аысушивания растворяют в 100 мкл ТЕ,Эндонуклеазную обработку ДНК человека и бактериальных плазмид проводят в буфере ВЕВ, содержащем 10 мМ трис-НС рН,4), 10 мМ М 9 О, 10 мМ йаС и 1 мМ дитиотреитола (РТТ). Полный эндонуклеазный гидролиз ДНК получается при относительной концентрации рестриктаз 5 - 8 ед/мкг ДНК...

Номер патента: 1494724

Опубликовано: 07.01.1991

Авторы: Александров, Ворсанова, Миткевич, Юров

МПК: C12N 15/00, G01N 33/60

Метки: количества, х-хромосом, человека

...5 мкл нерадиоактив 1494724цых дезоксицуклеозидтрифосфдтон (по 0,02 М каждого), 5 мкл ДКдзы 1 (концентрация 1 мкг/мл), 5 мкл ДИК- полимераэы 1 (коццентраццл 0,5- 2 ед/мкл), 10 мкл меченного тритием (для гибридизации ш я).ц) или Фосфором (гибридизация колоний) одного из дезоксинуклеозидтрифосфдта и но- ды до конечного дбъема 150 мкл, Реакцию ведут н течение 20-40 мин при 20 С, Средняя удельная радиоактивность составляет около 2,5 л 10импульсов в 1 мнц н расчете ца 1 мкм ДПК н случае трития и около 2,510 " им пульсов в 1 мин н случае фосфора (э Р) .Перед гибридизацией фильтр с колоо ниями бактерий вымачцндют при 67 С н растворе 6 юББС; 0,5 Х Б 1)Б; 0,1 Х 20 фиколлц 0,1 Х цолифенцлпцрролидоц н течение 60-90 миц, Вслед зд этим фильтр...