Циманис

Номер патента: 1830945

Опубликовано: 10.08.1999

Авторы: Авот, Грен, Мясникова, Останин, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 15/26, C12N 15/81

Метки: alphoil, cerevisiae, saccharomyces, биосинтез, днк, дрожжах, дрожжей, интерлейкина-2, конструирования, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, секреторный, секрецию, человеческого, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК plDB(ALPHOIL), обеспечивающая биосинтез и секрецию человеческого интерлейкина-2 в дрожжах, мол.м. 5,3 мДа и размером -8,1 т.п.о., содержащая: - Hind III - Sal I - фрагмент плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора plDB 207 размером 6,3 т.п. о. , включающий бактериальный ген устойчивости к ампициллину, бактериальную область инициации репликации, дрожжевой ген LEU2, а также фрагмент дрожжевой двумикронной плазмиды, обеспечивающий репликацию плазмиды в клетках дрожжей; - Sal I - Bam H1 - фрагмент полилинкера плазмиды pUC 19 размером 20 п.о.; - Bam H1 - Sau 3A - фрагмент промотора гена PHO5 дрожжей плазмиды pVY 18 размером 0,35 т.п.о. с...

Номер патента: 1770359

Опубликовано: 23.10.1992

Авторы: Авот, Грен, Мясников, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 1/19, C12N 15/26

Метки: cereuisial, msil, sасснаrомuсеs, sасснаrомyсеs, днк, дрожжей, интерлейкина-2, клетках, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...фаза Т 4 и проводят инкубацию в течение ночи при 4 С, 20 25 30 ампициллина Из полученных описанным способом отдельных клонов трансформантов выделяют плазмидную ДНК методом, аналогичным методу выделения плазмиды рМЯ 46, с тем отличием, что выращивание клетокЕ,сове; дут в 10 мл питательной среды и все объемы растворов соответственно уменьшают в 50 раз по сравнению с указанными. Кроме того, вместо центрифугирования в растворе 35 40 50 55 51015 Полученной таким образом лигазной смесью трансформируют клетки Е.со НВ 101. Для этого клетки Е,со выращивают в 100 мл средыВ при 37 С и интенсивном перемешивании до достижения оптической плотности при 600 нм 0,4 - 0,5. Культуру охлаждают на льду, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10...

Номер патента: 1703693

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Авот, Грен, Дебабов, Козлов, Косиков, Костров, Мазель, Машко, Мочульский, Носовская, Романчикова, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Трухан, Циманис, Черновская, Юрин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: 2-19, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...ДНК длиной =750 п.нвырезает и проводят элюцию ДНК. Для достройки о,;ноцепочечных концов ДНК с помощью Кленовского фрагмента ДНК-полимеразы 1 Е со, выделенный из геля фрагмент обоа;э; .пгают в пробе объемом 20 мкл, содер,кэ.,ей 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 10 мМ МдС 1:, по ЗО мкМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов Реакцию останавливают прогреванием, ДНК из смеси переосаждают этанолом и растворяют в 20 мкл,Полученный препарат фрагмента плазмиды рАА 1213-23 В используют на дальнейших этапах конструирования для интеграции кодирующей части интерлейкиначеловека в векторную плазмиду рВВ 124 В.3 мкг ДНК плазмиды рВВ 124 В расщепляют рестриктазой ВагпН в пробе обьемс . 12 мкл, содержащей буфер для рестрикци:- Реакцию останавливают фенольной...

Номер патента: 1684339

Опубликовано: 15.10.1991

Авторы: Агапов, Войтенок, Грэн, Коричнева, Кушниров, Панютич, Скрябин, Смирнов, Тер-Аванесян, Тоневицкий, Ураков, Циманис

МПК: C12N 15/26

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, дрожжей, интерлейкина-2, продуцент, человека, штамм

...содержащий структурную область гена интерлейкиначеловека, и в результате получают плазмиду рА 19, Есой-Яа 1 1 - фрагмент (1,8 т.п,н) плазмиды рА 19 клонируют по тем же сайтам в плаэмиду рГТР 4, сОдержащую терминатор транскрипции гена кислой фосфата з ы Р Н 05.В полученной таким образом плаэмиде рУ 116 сайт Есой 1 затем заменяют при помощи линкеров на сайт Вагп М 1, в результате получают плазмиду рУ 116 В. Ващ М 1 - Нпд 111 - фрагмент плаэмиды рУ 116 В клонируют в плазмиду рЗОВ 207 и получают плазмиду рЯ 1711 размером 8,9 т,п,нсодержащую ген ИЛчеловека под контролем препрообласти гена альфа-фактора и способная к репликации в дрожжах.Штамм бВ-Н 28/рЯ,.11711 - продуцент интерлейкиначеловека получен трансформацией клеток Я,сегеч 1 з 1...

Номер патента: 1622398

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Бука, Бундулис, Грен, Звиргзда, Циманис

МПК: C12N 15/00, C12P 21/00

Метки: бактериальных, выделения, интерлейкина-2, клеток, рекомбинантного

...на Фреичпрессе при давлении 700 атм. Полученную суспенэию центрифугируют 30 минпри 12000 об./мин на центрифуге. Осадок ресуспенднруют и по 3-4 раза промывают сначала буфером А с последующим цеитрифугированием в описанномрежиме, затем буфером А, содержащим2 М мочевину, и буфером А, содержащим4 М мочевину, Осадок суспендируют в40 мл буфера А, содержащего 27 додецилсульфата натрия, при перемещивании растворяют, прогревают 2 мин прио60 С, охлаждают до комнатной температуры и тестируют иммунохнмическимили биологическим методом.Раствор рИЛнаносят на колонку2 ч К 100/100 с себадексом 0-100,уравновешенную 50 ммоль трис-НС 1(рН 8,5) с добавками 5 ммоль ДТТ,1 ммоль бенилметилсульфонилбторидаи 17. додецилсульфат натрия. Фракции,содержащие...

Номер патента: 1472499

Опубликовано: 15.04.1989

Авторы: Беляев, Казенных, Лунев, Михалева, Несмеянов, Овчинников, Оноприенко, Циманис

МПК: C12N 5/00

Метки: антител, гибридных, животных, интерлейкину-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, человека, штамм

...и вносят в лунку по 100 мкл препарата, содержащего антитела, После инкубации в течение одного часа при 37 С плашки отмывают ФСБТ и обрабатывают раствором антител к иммуноглобулинам мыши, конъюгированных с пероксидазой хрена (100 мкл на лунку, разведение 1:1000, 15 1 ч 37 С). Плашку еще раз отмывают и вносят 100 мкл раствора ортб-фенилендиамина (1 мг/мл) в 1%-ном цитратном буфере (рН 4,5), содержащем 0,05 НО. Реакцию останавливают через 15 мин добавлением 100 мкл на лунку раствора 2 М серной кислоты, Отрицательным контролем служат лунки плашки, не содержащие 1 Ь 2, а также лунки, в которые вместо антител к 1 Ь 2 25 вносят нормальный иммуноглобулин мыши.П р и м е р 2. Получение и очистка моноклональных антител.Получение и очистка...

Номер патента: 1472497

Опубликовано: 15.04.1989

Авторы: Бундулис, Войтенок, Панютич, Скривелис, Циманис

МПК: C12N 5/00

Метки: антител, гибридных, еsснеriснiа, животных, используемый, клеток, культивируемых, липополисахариду, мusсulus, моноклональных, штамм

...клетки пассировали один раз в 2-3 дня, кратностьрассева - 1:б - 1:8. Культура суспенэионная,Культивирование в организме животных. Для выращивания асцита пригоднымыши Ва 1 в/с. Мышам эа 7-30 дней доинъекции клетокштамма вводят внутрибрюшинно по 0,5 мл пристана, Клетки инъецируют внутрибрюшинно по 2-5 х 10 клеток в 1 мл среды 1 МДМ. Асцит формируется через 12-14 дней.Продуктивность штамма.Секреция моноклонального антитела(МкАТ) на 2-3 день культивированиясоставляет 40-45 мкг в 1 мл культуральной среды и 15-20 мг в 1 мл асцитной жидкости при определении иммуноферментным методом.Характеристика полученного продукта. Штамм продуцирует моноклональноеантитело с изотипом 1 Ы. Специфичность - антиген Е.со 1 небелковойприроды,.содержащийся в...

Номер патента: 1446157

Опубликовано: 23.12.1988

Авторы: Бундулис, Войтенок, Панютич, Скривелис, Циманис

МПК: C12N 5/00

Метки: антител, белку, гибридных, еsснеriснiа, животных, интерлейкина-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, мембранному, моноклональных, препарате, рекомбинантного, человека, штамм

...в препарате РИЛчеловека, Методы оценки сохранения специфичности: тест на связыва" ние МКА с иммобилизованным частично очищенным РИЛ(иммуноферментный анализ), Продукция МКА сохраняется как минимум до 10 пассажей 1 п чдС- то. В асцитной форме штамм не пассируется более одного раза,Контаминация. Бактерии и грибы в культуре не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питательные среды. Заражение микоплаэмой не выявлено по характеру включения тимидиновой метки.. Криоконсервирование. Для длительного хранения клетки штамма замораживают в эмбриональной телячьей сыворотке с добавлением 10 диметилсульфоксида, Режим замораживания;1 С в 1 мин до -70 С, После замораживания клетки переносят в жидкий . азот, Размораживание - на водяной...

Номер патента: 1446154

Опубликовано: 23.12.1988

Авторы: Войтенок, Осипович, Панютич, Циманис

МПК: C12N 5/00

Метки: антител, белку, гибридных, еsснеriснiа, животных, интерлейкина-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, мембранному, моноклональных, препарате, рекомбинантного, человека, штамм

...частично очищенным РИЛ(иммуноферментный анализ).Продукция МКА сохраняется как ми) нимум до 10 пассажей п ч 11 о, В асцитной форме штамм не пассируется более одного раза.Контаминация, Бактерии и грибы в культуре .:не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на пита" тельные среды. Заражение микоплазмой не выявлено по характеру включения тимидиновой меткиКриоконсервирование, Для длительного хранения клетки штамма замораживают в эмбриональной телячьей сыво" ротке с добавлением 10 диметилсульфо оксида. Режим замораживания: 1 С в 1 мин до -70 С. После замораживания клетки переносят в жидкий азот, Раэморажйвание - на водяной бале при +3 С. Жизнеспособность клеток послеоразмораживания 70-80 , по окрашиванию трипановым синим,П р...

Номер патента: 1437393

Опубликовано: 15.11.1988

Авторы: Бундулис, Войтенок, Панютич, Скривелис, Циманис

МПК: C12N 5/00

Метки: антител, гибридных, животных, интерлейкину-2, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, рекомбинантному, человека, штамм

...не пассируетсяболее одного раза.Контаминация, Бактерии и грибы вкультуре не обнаружены при длительном наблюдении и посевах на питатель.ные среды. Заражение микоплаэмой невыявлено при окрашивании красителямина ДК Н и по характеру включения тимидиновой метки,Криоконсервирование, Для длительного хранения клетки штамма замораживают в эмбриональной телячьейсыворотке с добавлением 107 диметилсульфоксида. Режим заморажния: 1 С/минОдо -70 С. После замораживания клеткипереносят в жидкий азот. Размораживание - на водяной бане при 37 С.Жизнеспособность клеток после размораживания 70-807. по окрашиванию трипановым синим.Использование штамма иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Гибридомные клеткипомещают в стеклянный флакон объемом50...

Номер патента: 486669

Опубликовано: 25.03.1976

Авторы: Алексеева, Гиллер, Салдабол, Циманис

МПК: C07D 307/70

Метки: получения-2-(изонитрозоацетил)-5-нитрофурана

...подвергают взаимодействию с аткилцитритом с среде концентрированной серной кислоты с выделен нием целевого продукта обычными приемами, фг.е, цо предлагаемому способу 2-(изонитрозоацетил)-5-нитрофуран получают водну стадию из 2-ацетил-цитрофуранапо схеме 2. П р и м е р 1, Рас гворякГт 46,5 г( О, 3 моль, 2-ацетил-цитрофурана в200 мл 93 ъ серной кислоты при 4-5 оС,К раствору прибавляют по каплям примерно в течение 45 миц 54 мл (0,45 моль)Н - бутилнитрита, поддерживая температуру реакционной смеси 10-1 З С, По оконочеции добавления бутилнитрцта смесь переме 111 ивают еше полчаса, затем выливаютпри переме 1 пивации ца ЗОО г льда и 200 млВоды, церсмешивацие продолжают полчаса,после чего Гз еВший осадок кремовогоцве г,1 отфильтровывают,...