Ростапшов

Номер патента: 1660388

Опубликовано: 20.05.1995

Авторы: Ажикина, Мясников, Ростапшов, Свердлов, Смирнов, Чернов

МПК: C12N 1/19, C12N 15/23

Метки: cerevisiae, pvgib, saccharomyces, быка, гамма, гамма-интерферона, днк, дрожжей, интерферон, кодирующая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pYGIB, кодирующая гамма-интерферон быка, размером 8,0 т.п.о. и мол.м. 5,2 МД, содержащая Hind III-BamHI фрагмент плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора pjDB 207 размером 6,6 т.п.о. BamHI-EcoRI-фрагмент ДНК плазмиды pMS 46 размером 0,52 т. п. о. XbaI Hind III/BamHI фрагмент ДНК рекомбинантного фага mp 18-gamma IFN, нуклеотидная последовательность которого кодирует гамма-интерферон быка, размером 0,428 т.п.о. BamHI/Sau 3A-PstI/Hind III фрагмент ДНК плазмиды pMS 46 размером 0,39 т.п.о. гены и регуляторные участки; ген bla, обеспечивающий устойчивость к ампициллину; ген LEU 2, обеспечивающий возможностью роста на селективных средах без лейцина; бактериальный локус ori, обеспечивающий...

Номер патента: 1700004

Опубликовано: 23.12.1991

Авторы: Ажикина, Бородин, Данилкович, Ростапшов, Чернов

МПК: C07H 21/04, C12Q 1/68

Метки: днк, качестве, методу, олигодезоксирибонуклеотид, первичной, праймера, сенгера, структуры, универсального

...ч/ч, 0,5 мл, 0,5 мин); окисление - 1 о -ный раствор йода в смеси уксусной кислоты с пиридином (1/9, ч/ч, 0,7 мл, 0,5 мин). После окончания синтеза проводят удаление защитных групп. Сначала удаляется диметокситритильная группа обработкой 0,2 М раствором трифтороуксусной кислоты в дихлорэтане непосредственно в реакционной колонке. Затем полимер обрабатывают смесью тиофе 5 -б(6 Т А А А А С 0 А С 0 О С С А 6 Т)-3 (2) 40проводят в растворе общим объемом 5 мкл, содзержащем 2 - 3 пМ праймера, 3 пМ(а- Р-АТР (уд, активность 3000Ки/мМ), 50 мМ трис-НС (рН 8,3), 35 мМ МдС 2 и 0,1 - 1 ед, активности полинуклеотидкиназы (37 С, 30 ми н.), После добавления 7 мкл (2 мкг) фага М 13 гпр 10 с клонированным фрагментом - интерферона быка и 1 мкл...

Номер патента: 1469856

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Ажикина, Анджапаридзе, Антонова, Арсенян, Балаян, Блинов, Вальяно, Василенко, Дроздов, Коврига, Кравченко, Кусов, Маркова, Насташенко, Овчинников, Петров, Приходько, Ростапшов, Рохлина, Свердлов, Серпинский, Снешков, Урманов, Фролов, Царев, Чернос, Чижиков

МПК: A61K 39/29, C12N 15/00

Метки: гепатита, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, полипептидных, против, рекомбинантной, синтез, субстанций

...эндонуклеазой рестрикции Вя 11 и затем Рз 1, как описанов примере 1, Полученный больший фрагмент лигируют с Вя 11 - (ЛРцц 11)Рзг.фрагментом длиной 1243 п.о., вьделенным из плазмиды рНА 123. Лигазной смесью трансформируют компетентные клетки штамма Е,.со 1 НВ 101 и в клонах, содержащих плазмиду со встроенным фрагментом, определяют ориентацию последнего с помощью эндонуклеаз рестрикции ЕсоВ. и Ваш 1,Клоны, содержащие плазмиды с нужной ориентацией фрагмента, наращиваютв среде Мс, тетрациклином и р -индЬ- дилакриловой кислотой, синтезируемый гибридный белок, содержащий полный 7 ф-интерферон человека и фрагменты белков ОРЗ (со 11 О по 23,а.к.) и УР5 (спо 271 а.к.) ВГА, выделяют из бактериальных клеток и используют дпя иммунизации морских...

Номер патента: 1433019

Опубликовано: 15.09.1990

Авторы: Арсенян, Аспетов, Виноградова, Ершов, Крыкбаев, Кузнецов, Мелков, Монастырская, Новохатский, Овчинников, Ростапшов, Свердлов, Царев, Чернов, Честухин

МПК: A61K 38/21

Метки: днк, иммунного, интерферона, кодирующая, плазмидная, рекомбинантная, синтез, т"рр, человеческого

...буфере.Х 1 мкг полученного фрагмента до 50бавляют 0,1 мкг синтетических олигодезоксирибонуклеотидов, полученныхпутем химического синтеза, 2 мкг выделенного электроэлюцией большого, ЕсоВ 1-Рв 1 фрагмента рВВ 322 с триптофановым промотором и лигируют вприсутствии .10 ед ДНЕ"лигазы Фага Т 4в растворе, содержащем 0,5 мМ АТР и,буФер, состав которого был приведен вьппе .Лнгазной смесью трансформируют компетентные клетки Е,со 11 К 12, которые высевают на чашки, содержащие ЬВ-агар с тетрациклипом. Из полученных клонов выделяют плаэмиды и структура встроенных генов подтверждается рестриктным анализом н спквенсом.Полученную генно-инженерную конструкцию анализируют по эффективности синтеза иммунного интерферона после трансФормации...