Патенты с меткой «днк»

Номер патента: 1471949

Опубликовано: 07.04.1989

Авторы: Джозеф, Джон, Уолтер

МПК: C12N 15/00

Метки: бычий, гормон, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, роста

...Осуществляют процедуру такимже образом, как описано в примерах5(А) - (С), в которых использовалисьЕ, со 1 х КРЛ, Е. со 11 НВ 101, Е. со 11РР 50 или Е. со 1 ПРЯ иф Р, вместоЕ. со 1, Х 1776, Все условия идентичны и получают идентичные результаты.П р и м е р б. Для осуществления данного примера получают сДНК,кодирующую предшественник.гармонароста, как описано в примере 1. Вводят линкеры Нпй 111 и кДНК обрабатывают посредством Нпи 1 111 илиНзц 1, как описано в примере 4(А).Плазмиду рС 194, изолированнуюиз Б. ацгеце, используют в качествевектора, рС 194 расщепляют в зонеНпс 1 1 .1 посредством Нпй 111 илиНяц 1 и затем подвергают обработкещелочной фосфатазой,Полученную кДНК соединяют с расщепленной рС 194. Осуществляют трансформацив В. зцЬг 11...

Номер патента: 1491346

Опубликовано: 30.06.1989

Авторы: Бригитте, Рональд

МПК: C12N 15/00

Метки: бычьего, гормона, днк, кодирующей, плазмидной, рекомбинантной, роста, синтез, человеческого

...Абс ТТС ТСС ВСС СТС ТТТ ЮСС ААС ССТ СТССТ Ю ААС А 66 ССС САС ААА СБС ГТС ССА С 5 Конструируют указанную линкерную последовательность в соответствии с обычной методикой.Целевые трансформанты, обозначенные Е.со 1 д К 12 КЧ 309/рСЕ 112,2, помещают на ТЧ агар, содержащий соответствующие антибтотики, а затем обычным способом культивируют до получения и выделения плазмиды рСЕ 112,2. Эти трансформанты как показано по дан ным гель-электрофореза, К 1 А и других тестов, экспрессируют шей-ЬСН с вы 6 АС, ОЛТ ТДД АТС ттт сст ССТ в 1 111 111 11 Т 11 . 111, 11 СТС СТА АТТ ТАС ддд ОСА ССЯ ДАС ССТ СТ 6 СТ 311 111 1ТГО ССА С У 5 СТДОД 666 ТАТТЛЛТА, 1.1 11 1111 3 ТСССЯТЯАТТДТ АТВ ТСС ТТС ТСС СРС 111 11 11111 11 тдс АСС ДЯС АСС СССАТС фАТ 1 САС111 1 1....

Номер патента: 1511646

Опубликовано: 30.09.1989

Авторы: Веселков, Дымант, Рыбаков

МПК: G01N 21/27

Метки: времен, днк, переходов, растворе, релаксации, структурных, характерных

...температуры с последующим вычислением характерных времен релаксации, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения време. ни анализа, быстрое изменение температуры раствора ДНК осуществляют периодически с заданной частотой с помощью термоэлектрических преобразова телей, составляющих боковые стенки кюветы спектрофотометра, а вычисление характерных времен релаксации проводят на основании анализа зависимости оптического поглощения от частоты температурных колебаний. Составитель А,СпундэРедактор А.Ревин Техред .И,Верес Корректор А.Обручар Заказ 5895/46 Тираж 789 ПодписноеВНИИЙИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5...

Номер патента: 1530628

Опубликовано: 23.12.1989

Авторы: Гарабаджиу, Гинзбург, Розанов, Склярова, Умецкая

МПК: C07D 235/20, C09K 11/06

Метки: 2-2-фенил-5(6)-бензимидазолил-n-(3, диметиламинопропил)-5(6)-бензимидазолкарбоксамида, днк, исследования, качестве, красителя, тригидрохлорид, флуоресцентного

...остатокрастворяют в 30 мл ледяной уксуснойкислоты, К полученному раствору добавляют 0,581 г (1,58 ммоль) гидрохлорида метоксиэтилового иминоэфира2 ефениле 5(6)-бензимидазолкарбоновойкислоты. Реакционную смесь кипятят5 ч. Уксусную кислоту отгоняют е вакууме, Маслянистый остаток затираютдо образования кристаллов в 30 мл 7 н.раствора хлористого водорода в изопропиловом спирте. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном. Выход0,558 г (68). Т,пл350 С,Найдено 4; С 56,81; Н 5,2115,25 С 1 19,50, М =138 (массспектрально, в виде основания)30С Н Г 1О 3 Н(1Вычислено, 1: С 56,99; Н 5,33,11 15,3 й; С 1 19,1 1. М=438,5.Основная область излучения полученного препарата (1) лежит в пределах 350-ч 50 нм,Ъ,.,387 нм.Краситель "Хехст 3258" обладаетследующими...

Номер патента: 1532050

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Амосенко, Балаян, Казачков, Крутянская, Кусов, Лашкевич, Миронова, Свиткин, Терлецкая, Тимофеев, Хапчаев, Эльберт

МПК: A61K 39/00, A61K 39/12, C12N 7/00 ...

Метки: вируса, днк, клеточной, суспензии

...Очистка суспензии вируса клещевого энцефалита от клеточной ДНК с применением протамин сульфата с последующей гельхроматографией, Надосадок после обработки протамин сульфатом и удаления клеточнойДНК аналогично примеру 1 подвергаютгельхроматографии на колонке 5 х 40 см,заполненной кремнеземом МПСП,Для элюции вирусного материала используют среду 199 или 0,1 М фосфатный буфер рН 7,4 с 0,14 М ЮаС 1, Содержание ДНК в конечном препарате300 пг/мл или 14-57 пг в дозе последополнительного разведения,П р и м е р 3, Очистка суспенэии вируса клещевого энцефалита от клеточной ДНК с применением протамин сульфата в сниженной концентрации. К вирусному концентрату, полученному аналогично примеру 1, добавляют протамин сульфат в концентрации 0,5 мг/мл....

Номер патента: 1532585

Опубликовано: 30.12.1989

Авторы: Грубер, Дебов, Карягина, Лопатина, Лунин, Никольская-Санович, Поляченко

МПК: C12N 15/00

Метки: бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, метилазу, метилазы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, штамм

...Бяо 11 в клетках, несущих плазмиду с 1 33, не происходит.Плазмидную ДНК о 33 подвергают рестрикционному анализу.Характеристика штамма.2585 6Е. со 1, трансФормированных плазми"дой й 33.ШтаммТ 15 чения характера метилирования Яяо 11 20 25 30 40 45 50 55 5 153Клетки прямые, палочковидные, неподвижные, грамотрицательные, лактозопозитивные. При рассеве на чашкис 1,3%-ным МПА рост в виде отдельных,колонии, иногда в К-форме с неровными5краями. Хорошо растет на плотных ижидких питательных средах (МПА, МЛБ,1.В-бульон и ЬВ-агар).Физиолого-биохимические признаки,сКлетки растут в пределах 4-45 Спри оптимуме рН 6,8-7,5. Штамм разлагает глюкозу, лактозу, маннит с образованием кислоты, не .разлагаетсахарозу, сбраживает мальтозу, ксилозу,...

Номер патента: 1539205

Опубликовано: 30.01.1990

Авторы: Грубер, Дебов, Карягина, Лопатина, Лунин, Никольская-Санович, Поляченко

МПК: C12N 15/00

Метки: бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, метилазы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рестриктазы, синтез, штамм

...при 10000 я 15 мин, затем 1 О мкл супернатанта добавляют впробу, содержащую 1 мкг бактериофага 3 в 10 мкл буфера А. Пробу инкубируют 1 ч при 37 С, после чегоанализируют электрофорезом в 1,2 Еном агарозном геле. Картина рестрикции в случае штамма Е, со 1 Р 8200,несущего плазмиду с 1 24, характерназля рестриктазы Бзо 11.1 мкг плазмидной ДНК й 24, выделенной из штамма Е.со 1 Р 8200, обрабатывают 1 О ед. рестриктирующей эндонуклеазы Бво 11 в буфере А в течение 2 ч при 37 С. Электрофорез показывает, что ДНК плазмиды й 24 при такой обработке не фрагментируется, вто время как плаэмида р 11 С 19 даеткартину гидролиза, типичную для плазмиды рЦС 19, обработанной рестриктаэой Бво 11. Эти данные свидетельствуют о защите мест узнавания...

Номер патента: 1555652

Опубликовано: 07.04.1990

Авторы: Гарабаджиу, Гинзбург, Иванов, Комар, Кузнецов, Фомина

МПК: C09K 11/06, C12N 15/00, G01N 21/64 ...

Метки: днк, микроколичеств

...итенсивность Флуоресценциипробы, окрашенной (Т);ИФ - интенсивность флуоресцен 2ции пробы после добавкираствора стандартной ДНК.Предлагаемый метод позволяет определять содержание ДНК в растворахс концентрацией до 3 10 ф мкг/мл(нижняя граница чувствительности),что примерно в 1,5-2 раза ниже предела чувствительности для известныхФлуоресцентных красителей ДАФИ иХехст. В силу достаточно высокой специфичности красителя (Ъ) метод определения микроколичеств ДНКможет бытЬ использован при анализе .содержания ДНК в биологических материалах, в частности в плазме крови.П р и м е р 1, Синтез Флуоресцентного красителя (1) осуществляют посхеме в системах: А - хлороформ - метанол1 555652 Таблица 1 Проба Состав пробы ДИФ ИФ-Иф+ ст, ДНК (6,7 мкг/мл)...

Номер патента: 1567585

Опубликовано: 30.05.1990

Авторы: Квеситадзе, Таварткиладзе

МПК: C07H 21/04

Метки: двудольных, днк, массы, молекулярной, растений, реплицирующейся

...подсчета 1 мин), Подсчитывают ЕР;:1,. = 14133, 128 1 О и;3". = 5188, Средний молекулярный весподсчитывают по Аормуле (1) - М=12,25 10П р и м е р 2. Культура юкки,Готовят Аерментный раствор: взвешивают 3,5 пектомацерина Гх, целлюлазы 1,5 г, пектинаэы 0,4 г и последовательно растворяют в 100 мп бидистиллированной воды, потом добавляют 7,3 г ЫогЬ 1 о 1, 1,1 г СаС 1 ираствор доводят до рН 5,3. Дальнейшие определения проводят по техноло"гии и в ревммах,описанных в примере 1.55В табл.3 приведены количественныезначения радиоактивности каждой фракции ДНК юкки, Подсчитывают: Е,Г 1, 88261,327 1 ОРГ, = 3955,0; И у" 22,3 10 ф. Таким образом разработан способопределения молекулярного веса реплицирующейся ДНК у двудольньг растений,Способ может быть...

Номер патента: 1572419

Опубликовано: 15.06.1990

Авторы: Гюнтер, Кристиан, Норберт, Петер, Рудольф, Эва

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, кодирующей, омега-интерферон, плазмидной, рекомбинантной

...этих фрагментов. Сделан вывод, что в случае вставки клонов, Е 76 Е 9 и Р 9 А 2 речь идет о до сих пор неизвестных интерфероногенах, а именно о омега-интерферонах.Информацию об омега-интерферонах используют для того, чтобы переварить кДНК-ставку с рестрикционными эндонуклеазами. Образовавшиеся фрагменты лигируют в с 1 з ДНК-форму (репликативная форма) М 13 тпр 9 и секвенсируют с помощью дидеокси-метода Бащег. Однонитевую ДНК рекомбинантных фагов изолируют. Послесвязывания синтетического олигомера в четырех отдельных приготовлениях осуществляют двухнитевые синтезы при применении большого фрагмента ДНК-полимеразы 1 из Е.со 1 (фрагмент Кленова). В каждой из четырех частичных реакций добавляют один из четырех дидезоксинуклеозидтрифосфатов...

Номер патента: 1573026

Опубликовано: 23.06.1990

Авторы: Васюренко, Глатман, Кравец, Кузьмин, Солонин, Тарутина, Фролов

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, определяющая, плазмидная, рекомбинантная, рестрикции, синтез, эндонуклеазы

...штамма Е. со 11К 802, трансформанты подращивают 2 чв бульоне 1,В инфицируют фагом р 801 г9с множественностью заражения 10 ивысевают на агаризованную среду, содержащую 50 мкг/мл ампициллина, Изклонов, резистентных к ампициллину,выделяют плазмидную ДНК рВС МЗ известными способами,Проведен анализ наличия рестриктазы сГгВ 1 в клетках Е, со 1 ь.Для этого клетки Е. со 11 К 802//рВС МЗ выращивают в 10 мМ 1,В бульона до поздней логарифмической стадиироста, собирают центрифугированием,ресуспендируют в 5 мл буфера В, (10 мМтрис НС 1, рН 7,5, 50 мМ НаС 1, 10 мМЭДТА 10 мМ 2-меркгптоэтанола), раз-.рушают ультразвуком, центрифугируютпри 6000 об/мин 1 ч для освобожденияот клеточных обломков,Для определения активности готовятразведения экстракта в...

Номер патента: 1585327

Опубликовано: 15.08.1990

Авторы: Гимадутдинов, Порфирьева, Юсупова

МПК: C12N 1/20, C12N 9/14

Метки: serratia, ампициллину, бактерий, геном, днк, используемый, маrсеsсеns, трансформации, устойчивости, штамм

...был отобран мутант, неспособный продуцировать неспецифическую внеклеточнуюэндонуклеазу.1Полученный мутанг засевают в колбы с мясопептонным бульоном до оптической плотности 0,05 при 650 нм,Культуру выращивают на качалке дооптической плотности 0,5, осаждаютклетки центрифугированием, промывают 0,1 М цитратным буфером, рН 5,5в 20 раз измеряли оптическое поглоще ние при 260 нм на спектрофотометре Сф, За единицу активности принимали количество фермента, которое дает увеличение оптической плотности в опытных образцах, по сравнению с контрольными (реакционная смесь без фермента) на одну оптическую единицу за 1 ч инкубации в пересчете на 1 мл культуральной жидкости (опт, ед. мл ч 9 . В качестве субстрата использовали препараты...

Номер патента: 1413960

Опубликовано: 07.09.1990

Авторы: Борхсениус, Меркулова, Чернова

МПК: C12N 15/00

Метки: днк, заражений, микроплазменных, обнаружения, плазмидная, рекомбинантная

...рКК 3535, несущей рибосомный оперон ггп В Е.со.Плазмиду рМя 16 получают врепаративных количествах и очищают в градиенте плотности 1 в 11.П р и м е р 2, ДНК клеточньм культур выделяли стандартными методами, для этого собирают клетки МХ и Не Ьа, и предполагаемых микоплаэм цеитрифугированием культуральной жидкости при 10000 об/мин 30 мин.Оказалось, что плазмида рМ 16 не гибридизуется с ДНК эукариот, не контаминированных микоплаэмами, что является необходимым условием ее применения.Оказалось также, чтс с помощью ДНК гибридизации с рМя ,6 можно уловитьнг ДНК микоплазмы, что соот 5ветстнует .1 О инфекционных частиц. Известно, что в 1 ил культуральной жидкости клеток, культивируемых 1 п ч 1 Сго при микоплаэменной инфекции,всодержится 10 -...

Номер патента: 1433019

Опубликовано: 15.09.1990

Авторы: Арсенян, Аспетов, Виноградова, Ершов, Крыкбаев, Кузнецов, Мелков, Монастырская, Новохатский, Овчинников, Ростапшов, Свердлов, Царев, Чернов, Честухин

МПК: A61K 38/21

Метки: днк, иммунного, интерферона, кодирующая, плазмидная, рекомбинантная, синтез, т"рр, человеческого

...буфере.Х 1 мкг полученного фрагмента до 50бавляют 0,1 мкг синтетических олигодезоксирибонуклеотидов, полученныхпутем химического синтеза, 2 мкг выделенного электроэлюцией большого, ЕсоВ 1-Рв 1 фрагмента рВВ 322 с триптофановым промотором и лигируют вприсутствии .10 ед ДНЕ"лигазы Фага Т 4в растворе, содержащем 0,5 мМ АТР и,буФер, состав которого был приведен вьппе .Лнгазной смесью трансформируют компетентные клетки Е,со 11 К 12, которые высевают на чашки, содержащие ЬВ-агар с тетрациклипом. Из полученных клонов выделяют плаэмиды и структура встроенных генов подтверждается рестриктным анализом н спквенсом.Полученную генно-инженерную конструкцию анализируют по эффективности синтеза иммунного интерферона после трансФормации...

Номер патента: 1476896

Опубликовано: 23.09.1990

Авторы: Добрица, Шевченко

МПК: C12N 15/00

Метки: bacillus, polya15, spp, векторная, генов, днк, еsснеriснiа, клетках, клонирования, конструирования, плазмидная, предназначенная, чужеродных

...0 С. На следую- тов, Зля трансформации берут в рабощнй день О, мл Са ф -клеток смешиваютту 0,5 мл суспензин полученных прото"с 0,05 мп ДНК (10 мкг/мп), инкубируют пластов, смешивают с ДНК, растворен-.1 ч при температуре ОС и 5 мин ной в ЯММР буфере,н добавляют 1,5 мппри температуре 42 С и затем перено- полиэтиленгликоля (ПЭГ). После разсят в пробирку с 1,5 мп среды ЬВ. 1 О бавления в 5 мп БММР буфера клеткиПосле 2 ч инкубации в этой среде при центрифугируют и ресуспендируют в37 С со встряхиванием клетки высева мл ЯММР буфера. Через 1,5 ч суспенют на чашки с индикаторными (Ьас) зию высевают на чашки Петри со средойсредами, содержащими тетрациклин ДМЗ. Чашки инкубируют при температурео(15 мкг/мл). В качестве индикаторных 5 37 С в течение 2...

Номер патента: 1453896

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Бурьянов, Витенене, Косых

МПК: C12N 15/00

Метки: corii, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, метилазу, метилазы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рестриктазу, рестриктазы, рук11, штамм

...штаммаЕ, соН В 834(рС 857),обусловлен тем,что штамм не содержит интерферируюих с ферментами Есо КП примесей исодержит плаэмиду с геном термочувст Овительного репрессора с 1 фага ляйбда,Содержаний рестриктаэы и метилазцЕсо К 11 в сконструированном штаммеравно 500000 ед, каждого фермента наг сырой биомассы клеток,Штами ЕвсИехсЫа со 1. ВКИ СК 2889 характеризуется следующими признаками;Иорфологические признаки.6 6ную как р 7 К 11 и содержащую в своем . составе трк фрагмента, которые обра,зуются при гидролизе плазмидной ДНК эндокуклеаэой рестрикции Рве 1Выделенную .ДНК р 7 К 11 трансформируют в штамм Е. со 11 В 834/рС 1857 Трансформаиты отбирают на среде, содержащей ампицкплин (50 мкг/мл) и канамкцин (25 мкг/мл). Плаэмида РС 1857 несет...

Номер патента: 1469856

Опубликовано: 30.09.1990

Авторы: Ажикина, Анджапаридзе, Антонова, Арсенян, Балаян, Блинов, Вальяно, Василенко, Дроздов, Коврига, Кравченко, Кусов, Маркова, Насташенко, Овчинников, Петров, Приходько, Ростапшов, Рохлина, Свердлов, Серпинский, Снешков, Урманов, Фролов, Царев, Чернос, Чижиков

МПК: A61K 39/29, C12N 15/00

Метки: гепатита, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, полипептидных, против, рекомбинантной, синтез, субстанций

...эндонуклеазой рестрикции Вя 11 и затем Рз 1, как описанов примере 1, Полученный больший фрагмент лигируют с Вя 11 - (ЛРцц 11)Рзг.фрагментом длиной 1243 п.о., вьделенным из плазмиды рНА 123. Лигазной смесью трансформируют компетентные клетки штамма Е,.со 1 НВ 101 и в клонах, содержащих плазмиду со встроенным фрагментом, определяют ориентацию последнего с помощью эндонуклеаз рестрикции ЕсоВ. и Ваш 1,Клоны, содержащие плазмиды с нужной ориентацией фрагмента, наращиваютв среде Мс, тетрациклином и р -индЬ- дилакриловой кислотой, синтезируемый гибридный белок, содержащий полный 7 ф-интерферон человека и фрагменты белков ОРЗ (со 11 О по 23,а.к.) и УР5 (спо 271 а.к.) ВГА, выделяют из бактериальных клеток и используют дпя иммунизации морских...

Номер патента: 1597392

Опубликовано: 07.10.1990

Автор: Друца

МПК: C12N 15/00

Метки: вставок, днк, мутагенности, неприродных, оценки

...узла, а по соотношению мутантных и немутантных клонов легко определить вероятность генерации мутаций.П р и и е р 1 (контрольньй). Конструирование гетеродуплексной ДНК.1 икг однотяжевой ДНК Фага М 13 шр 8 ор55 и 0,5 мкг большого ЕсоК 1/Н.пд 111 Фрагмента ДНК - Фага М 13 шр 8 орг нагревают в 90 мкл ТЕ-буфера 3 мин прн 100 С, быстро охлаждают, добавляюто10 мкл 10-ББС-буфера и отжигают 24 чпри 65 С. Осаждают ДНК 3 объемамиэтанола, растворяют в 30 мкл воды,добавляют 10 мкл 5"-лигазного буфера(0,1 мМ АТР) и 10 мкл водного раствора немодифицированного олигонуклеотида) рАССТТСССТССАССТССАСССАТССССССС(0,001 О Е гса). Смесь нагревают10 мин при 60 фС и медленно (3 ч) охлаждают до комнатной температуры.Добавляют 1 мкл раствора Фермента Т...

Номер патента: 1599434

Опубликовано: 15.10.1990

Авторы: Максимова, Прокулевич, Титок, Фомичев

МПК: C12N 15/00

Метки: pmtf59, бактерий, днк, еnтеrовастеriасеае, мутагенеза, плазмидная, предназначенная, семейства, транспозонного

...а среди них счастотой 1,17, отбирают ауксотройные50мутанты,П р и м е р 2. Для полученияауксотроАных мутантов используютштамм Егюп 1 а ЬегЬ 1 со 1 а 103 К/рМТР 59.Способ получения ауксотроных мутантов такой же, как и в примере 1, различия состоят в том, что частотаВтранспозиции транспозона Тп 5 вхромосому этого штамма 9,9 10 а ауксотрофные мутанты отбирают счастотой 5,57,П р и м е р 3. Для полученияауксотройных мутантов используютштамм Аитопатогенных бактерий Егт- па сЬгуяапгЬе 1 п 1 ЕИА 49/рМТР 59, Способ получения ауксотройных мутантовтакой же, как и в примере 1, разли"чия состоят в том, что частота транспозиции транспозона Тп 5 в хромосому этого штамма 1,2 10 -, а ауксотроАные мутанты отбирают с частотой2,07,П р и м е р 4. Для...

Номер патента: 1614765

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Масааки, Мицие, Юнити, Ясуджи

МПК: C12N 15/28

Метки: днк, кодирующей, некроза, опухоли, плазмидной, рекомбинантной, фактор, человека

...со скоростью потока, равной133 мп/ч. Элюат фракционируют по ф 1 акциям 10 мп. Фракции, обладающие цито"токсической активностью, :.бирают иобъединяют,Выделение цитотоксической активности на этой стадии составляет 533, удельная активность повышается приблизительно в 9 раэСоединенные активные фракции обессоливают и концентрируют до 1/10 объеУ ма ультрафильтрацией с помощью Оай 1 о .с использованием мембраны УМ 10,Концентрат подвергают препаративному изоэлектрофокусирующему гель-электрофорезу, Аликвоту концентрата наносят на пластинку из полиакриламидного геля (0,2 х 10 х 10 см) с градиентомрН от 5,6 до 6,1, созданном с помощью1 ишоЪ 1 чпе. Электрофореэ проводят принапряжении 2400 В в течение 16 ч при15 С, "ель нарезают на куски...

Номер патента: 1615180

Опубликовано: 23.12.1990

Авторы: Йомантас, Козлов, Народицкая, Стойнова, Уланова

МПК: C12N 15/75

Метки: бациллах, вектор, днк, клонирования, предназначенный, рва, фрагментов

...В, яиЬТ 111 я 83112 позволяют выявить плазмиду рВА 4,5 мкг ДНК рВА 4 обрабатывают рестриктазой ЕсоКв следующих ус"ловиях: 100 мМ тряс-НС 1, рН 7,5,10 мМ ИяС 1 р, 6 мМ 2-8-меркаптаэтанола, 50 мМ ИаС 1 р 0,5 ед, активности ЕсоК 1. Объем инкубационной5 16 смеси 40 мкл, Инкубацию проводят при 3 С в течение 20 мин, Реакцию останавливают добавлением 100 мкл 96%- ного этанола. Затем ДНК перерастворяют в 20 мкл буфера ТЕ (10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 0,1 мМ ЭДТА), вносят смесь дезокситрифосфатов до конечной концентрации 0,25 мМ каждого. Объем доводят до 30 мкл буфером ТЕ и вносят 2 ед, активности кленовского фрагмента ДНК-полимеразы Е.со 1 д, Реакцию достройки липких концов проводят при комнатной температуре 30 мин и останавливают добавлением...

Номер патента: 1615181

Опубликовано: 23.12.1990

Авторы: Булгакова, Попов

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: бактерий, днк, днк-зонда, еsснеriснiа, иде, идентификации, конструирования, микроба,несущих, пестициногенности, плазмидная, плазмиду, продуцент, рек-7-днк-зонд, рекомбинантная, чумного, штамм, штаммов

...Злюат экстрагиру ют Фечолом, хлороформом и обрабатываю эфиром. ДНК плазмиды рАТ 153(10 мкг) подвергают гидролизу рестриктазами Ипд 111 и ВапН 1 по методике, описанной ныше. Больший 15 (3,3 т.п,н,) из двух полученных в результате гидролиза фрагментов извлекают из геля. электроэлюцией. Злюаточищают от примесей агарозы и смешивают с злюатом, содержащим Нлпс 1 111- 20 "ВапН 1 - ррагмент рРзс, ДНК осаждают 96 Е-ным этаколом, промывают 70 Еньм зтанолом и подсушивают, Осадокрастворяют н буфере для легирования(5 ец,), Легирование проводят 1012 ч при 16 С.В. Анализ рекомбннактных плазмид 30 и получение штамма - продуцента Р 1- зонда для диагностики штаммов чумногомикроба,хлорамфениколом (С = 20 мкг/мл).ДНК плазмид рРзС и рАТ вьделяют.Клетки...

Номер патента: 1552643

Опубликовано: 15.01.1991

Авторы: Данилюк, Серпинский, Синяков

МПК: C12N 15/00

Метки: вектор, днк, конструирования, концами, липкими, произвольными, фрагментов

...и минимальной длиной встроенного фрагмента.а) для определения рекомбинантов вектора рГН 124 с максимальной длиной встроенного фрагмента в этом векторе клонируют по Рз 1 1 и Ба 1 1-сайтам фрагмент ДНК полноразмерной копии гена интерлейкина - 2 человека, длиной 413 п.о.Дпя этого 0,25 пкмоль векторной ДНК, полученной иэ рРН 124, совместным расщеплением эндонуклеазами рестрикции РзС 1 (7 ед. 50 мМ МаС 1,ч, 37 С) и Ба 1 С 1 (О ед. 150,мМ ЮаС 1 1 ч, 37 С) и 3 пкмоль указанного фраг-. мента ДНК обрабатывают 20 ед. Т ДНК- лигазы в условиях, описанных выше. Полученной лигаэной смесью трансформируют клетки Е. со 1 1 М 103, Колонию+с Ьас фенотипом проводят через 4. пассажа, как описано в примере 2. После каждого пассажа выделенную иэ биомассы...

Номер патента: 1552645

Опубликовано: 15.01.1991

Авторы: Горн, Зарытова, Коваленко, Мартвецов

МПК: C12N 15/00

Метки: ангиогенин, белка, галактозидазы, днк, кодирующая, конструирования, мз», пептид, рекомбинантная, синтез, слитого, фаговая

...для трансфекции.Компетентные клетки для трансфекции готовят следующим образом, Клетки Е,со 11 Л(103 иэ 50 мп среды 2 х УТ (16 г триптона, 10 г дроскеного экстракта, 5 г МаС 1 на 1 л воды) при тит-Мре 5;10 кл/мл осаждают центрифугированием, ресуспендируют в 25 мл сте-, рильного 50 пИ СаС 1 при 0 С, вновь Осаждают 10 мии 5000 я при +40 С, ре" суепендируют н 3,6 мп 50 11 СаС 1 при ОС, инкубрунт 30 мин при 0 С. К 200 мкл клеток добавляют 20 нг геТЕРОДУПЛЕКСНОй ДИ:(, инкубируют ЗО мин при 0 С, затем прогренают 2 мнп при 42 С, добавляют 200 мкл экспоненциальной Л 1103, 40 мкл 2% 7-яа 1 и 10 мкл 0,1 И 1 РТС и с 3 мл верхнего агара высенают на чашку с нижним ага" ром. Чеоез 12 ч образонынаются синие и белые колонии, Среди 603 белых колоний было...

Номер патента: 1623567

Опубликовано: 23.01.1991

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52

Метки: pit337, днк, изопенициллин-n-синтетазу, плазмидной, рекомбинантной, экспрессирующей

...с 5 мкл1,5 МЬ Л 3 сог-ВагпН 1 рестрикционного фрагмента ппазмиды р 11335 до получения плазмиды 1. 7337, Реакционный объем составляет О мкл и включает указанные фрагментыДНК, 1,1 мкл ( 100 ед,) Т 4 ДНК лигазы, 3мкл 10-кратного лигирующего буфера (0,5 Мтрис-НС 1, рН 7,8; 100 мМ М 9 С 1 г; 200 мМ дитиотреитола ЭДТТ); 100 мМ АТР; и 1 мг/млВЯА/ и 13,4 мкл НгО. Реакционную смесьинкубируют при 15 С в течение 2 ч, послечего реакция практически завершается. Лигированная ДНК составляет целевую плаэмидную ДНК рТ 337.С, Конструирование Е,со 1 К 12ЯЧ 308/рТ 337.А, Конструирование Е.со К 12ЯЧ 308/ р 1 Т 337,50 мл культуры Е,со 1 К 12 ЯЧ 308 (ИЯЯВ - 15624) в-бульоне выращивают доО.Д 59 о 0,5 единиц поглощения, Культуруохлаждают на льду в...

Номер патента: 1640156

Опубликовано: 07.04.1991

Авторы: Дегтярев, Костюк, Кочетков

МПК: C12N 5/00, C12P 21/08

Метки: антител, бактериофага, гибридных, днк, животных, зависимой, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, рнк-полимеразе, штамм

...из крупных округлых клеток с крупными ядрами и тонким ободком цитоплазмы.Ядрьппки крупные, по 1-2 в ядре.Культуральнйе признаки. Среда для 5культивирования - среда ДИЕМ сыворотка эмбриона коровы (10%), сыворотка новорожденных телят (10%),глютамин (2 ммоль), пируват натрия(0,05 ммоль), пенициллин/стрептоцимин (1000 ед./мл). Характер ростастационарная суспензия. Метод снятиявстряхивание. Частота пассирования -2-3 раза в неделю. Посевная доза150 тыс. клеток на 1 мл. Кратностьрассева 5-10 раз.Контаминация, Бактерии, грибы и микоплазмы не обнаружены.Культивирование т.п чиччо. Культурапрививается и растет в виде асцитыв перитональной полости мьппей ВАЯВ/С,За 7 дней до введения клеток мьппамреципиентам вводят по 0,5 мл пристана, Асцит...

Номер патента: 1640157

Опубликовано: 07.04.1991

Авторы: Дегтярев, Костюк, Кочетков

МПК: C12N 5/00, C12P 21/08

Метки: антител, бактериофага, гибридных, днк, животных, зависимой, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, рнк-полимеразе, штамм

...признаки. Среда длякультивирования - среда ДМЕМ: сыворочка эмбриона коровы (10 ), сыворотка новорожденных телят (10 .), глютамин (2 ммоль), пируват натрия (1 ммоль), 2-меркаптоэтанол (0,05 ммоль), пеницилин/стрептомицин (1000 ед/мл).Характер роста - стационарная суспензия. Метод снятия - встряхнвание.Частота пассирования 2-3 раза в неделю. Посевная доза 150 тыс. клеток на 1 мл. Кратность рассева 5-10 раз.Контроль контаминаций. Бактерии, грибы и микоплазмы не обнаружены,Культура прививается и растет в виде асцита в перитонеальной полости мьппей БАЕВ/С, За 7 дней до введения клеток мышам-реципиентам вводят по 0,5 мл пристана. Асцит образуется через 10-15 сут после введения 1-5 млн клеток.Продуктивность штамма. Первичная...

Номер патента: 1640158

Опубликовано: 07.04.1991

Авторы: Дегтярев, Костюк, Кочетков

МПК: C12N 5/00, C12P 21/08

Метки: антител, бактериофага, гибридных, днк, животных, зависимой, используемый, клеток, культивируемых, мusсulus, моноклональных, рнк-полимеразе, штамм

...61.Консервация клеток. Клетки ИМБСзаморожены на 36-м пассаже. Общееколичествоампул 20, по 4 млн клетокв ампуле. Криозащитная среда - рос-.товая,П р и м е р 1. Культивированиегибридных клеток ИМБС, .Во Флаконы для культйвированияклеток вносят гибридные клетки в концентрации 100-200 тыс клеток в 1 млсреды ДМЕМ, содержащей 10% эмбриональной сыворотки коровы, 10% сыворотки новорожденных телят, 2 ммольглютамина, 1 ммоль пирувата натрия,0,05 ммоль 2-меркаптоэтанола,1000 ед,/мл пенициллина/стрептомицина. Клетки инкубируют 2-3 сутв стационарном состоянии при37 С в атмосфере 6% СО. Концентрацияклеток, превышающая 1 млн в 1 мл,неблаго"приятна для роста клеток ивызыв ает их,гибель. Культуральнуютометра.Моноклональные антитела, продуцируемые...

Номер патента: 1640163

Опубликовано: 07.04.1991

Авторы: Микрюков, Приходько, Серпинский, Урманов, Чижиков

МПК: C12N 15/79

Метки: 1261, векторная, вируса, геном, днк, интеграции, конструирования, осповакцины, плазмидная, предназначенная, ртк, фрагмента, чужеродного

...ДНК разделяют электрофорезом в 43-ном полиакриламидном геле (ПААГ) и выделяютбольший Фрагмент ДНК.20 мкг плаэмидной ДНК рПС 18 расщепляют ферментами Нпй 111 и,Есо К 1,55как описано, и выделяют Ндпй 1 ПЕсо К 1-полилинкер из 87-ного ПААГ.Линеариэованную плазмидную ДНКрТК 1285 Нхат 111 Есо К 1 и Ный 1114 Есо К 1-полилинкер сшивают ДНК-лигазой Фага Т 4 (1 е.а.) в 50 мИ трисНС 1, рН 7,5; 0,5 мИ АТР, 10 мМ 2-мерокаптоэтанола, 5 мМ И 8 С 1 при 8 С12 ч. Препарат ДНК осаждают спиртом.1/10 часть ДНК трансформируют вкомпетентные клетки штаюа Е,со 11НВ 101, Пдазмидную ДНК (рТК 1261)выделяют щелочным методом из положительно гибридизующейся п здп колонии Е.со 1 и подвергают рестрикционному анализу. Структуру полилинкераподтверждают...

Номер патента: 1640164

Опубликовано: 07.04.1991

Авторы: Микрюков, Приходько, Серпинский, Урманов, Чижиков

МПК: C12N 15/79

Метки: 1285, векторная, вируса, геном, днк, интеграции, конструирования, осповакцины, плазмидная, предназначенная, ртк, фрагмента, чужеродного

...1 х НВ 101 проводятотбор колоний фенотипа "Ар Тс и рестрикционный анализ плазмидных ДНК(рВКНК)П р и м е р 3. Рекомбинантныеплазмидные ДНК рТК 108, рТК 1567,рТК 1238 и РТК 1285Плазмидную ДНК рВКНК подвергаютгидролизу эндонуклеазой рестрикцииРчц 11 в стандартных Условиях и сшивают ДНК-лигазой фага Т 4 по примеруЛигаэной смесью трансформируют компетентные клетки штавща Е.со 1 НВ 101и отбирают колонии, содержащие рекомбинантные плазмиды с Нпй 111 - Рсщ 1150фрагментом ДНК длиной 1708 н.п,(рТК 1708).Плазмидную ДНК рТК 1708 расщепляют последовательно рестриктазамиНЫЙ 111 и ХЬа 1, выделяют большийфрагмент ДНК, который инкубируют снуклеаэой З 1 по примеру 1. Затем пре парат ДНК сшивают ДНК-лигазой фагаТ 4 и проводят трансформацию компе 64...