Стойнова

Номер патента: 1615180

Опубликовано: 23.12.1990

Авторы: Йомантас, Козлов, Народицкая, Стойнова, Уланова

МПК: C12N 15/75

Метки: бациллах, вектор, днк, клонирования, предназначенный, рва, фрагментов

...В, яиЬТ 111 я 83112 позволяют выявить плазмиду рВА 4,5 мкг ДНК рВА 4 обрабатывают рестриктазой ЕсоКв следующих ус"ловиях: 100 мМ тряс-НС 1, рН 7,5,10 мМ ИяС 1 р, 6 мМ 2-8-меркаптаэтанола, 50 мМ ИаС 1 р 0,5 ед, активности ЕсоК 1. Объем инкубационной5 16 смеси 40 мкл, Инкубацию проводят при 3 С в течение 20 мин, Реакцию останавливают добавлением 100 мкл 96%- ного этанола. Затем ДНК перерастворяют в 20 мкл буфера ТЕ (10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 0,1 мМ ЭДТА), вносят смесь дезокситрифосфатов до конечной концентрации 0,25 мМ каждого. Объем доводят до 30 мкл буфером ТЕ и вносят 2 ед, активности кленовского фрагмента ДНК-полимеразы Е.со 1 д, Реакцию достройки липких концов проводят при комнатной температуре 30 мин и останавливают добавлением...