C12N 15/79 — векторы или экспрессионные системы, специально приспособленные для эукариотических хозяев
Вектор pps-5-neo для введения и экспрессии генов в культивируемых соматических клетках млекопитающих
Номер патента: 1622396
Опубликовано: 23.01.1991
Авторы: Маркелов, Павлова, Прасолов, Фролова, Чумаков
МПК: C12N 15/79
Метки: pps-5-neo, введения, вектор, генов, клетках, культивируемых, млекопитающих, соматических, экспрессии
...под контроль промоторацитомегалловируса. 20Конструирование ретронирусноговектора рРЯ-пео приницпиально состоит в следующем. В вектор рРБ-пеовводят сильный конститутивный промотор цитомегаллонируса с однонременной инактивацией одного иэ двух сайтов Ба 11 в полилинкерной области.Введение чужеродных генов в клетки млекопитающих с помощью векторарРБ-пео осуществляют в два этапа.1. ДНК, вектора рРБ-пео с встроенным н него геном внодят методомДНК-трансфекции в клетки, экспрессирующие структурные белки вируса лейкоза мьппей (клетки ( 2 или подобные).2. После селекции клеток, экспрессирующих ретронирусный конструкт, насреде с генетицином производят сборвирусоподобных частиц из среды культивирования клеток и заражают клетки, в которых...
Векторная плазмидная днк ртк 1261, предназначенная для интеграции чужеродного фрагмента в геном вируса осповакцины, и способ ее конструирования
Номер патента: 1640163
Опубликовано: 07.04.1991
Авторы: Микрюков, Приходько, Серпинский, Урманов, Чижиков
МПК: C12N 15/79
Метки: 1261, векторная, вируса, геном, днк, интеграции, конструирования, осповакцины, плазмидная, предназначенная, ртк, фрагмента, чужеродного
...ДНК разделяют электрофорезом в 43-ном полиакриламидном геле (ПААГ) и выделяютбольший Фрагмент ДНК.20 мкг плаэмидной ДНК рПС 18 расщепляют ферментами Нпй 111 и,Есо К 1,55как описано, и выделяют Ндпй 1 ПЕсо К 1-полилинкер из 87-ного ПААГ.Линеариэованную плазмидную ДНКрТК 1285 Нхат 111 Есо К 1 и Ный 1114 Есо К 1-полилинкер сшивают ДНК-лигазой Фага Т 4 (1 е.а.) в 50 мИ трисНС 1, рН 7,5; 0,5 мИ АТР, 10 мМ 2-мерокаптоэтанола, 5 мМ И 8 С 1 при 8 С12 ч. Препарат ДНК осаждают спиртом.1/10 часть ДНК трансформируют вкомпетентные клетки штаюа Е,со 11НВ 101, Пдазмидную ДНК (рТК 1261)выделяют щелочным методом из положительно гибридизующейся п здп колонии Е.со 1 и подвергают рестрикционному анализу. Структуру полилинкераподтверждают...
Векторная плазмидная днк ртк 1285, предназначенная для интеграции чужеродного фрагмента в геном вируса осповакцины, и способ ее конструирования
Номер патента: 1640164
Опубликовано: 07.04.1991
Авторы: Микрюков, Приходько, Серпинский, Урманов, Чижиков
МПК: C12N 15/79
Метки: 1285, векторная, вируса, геном, днк, интеграции, конструирования, осповакцины, плазмидная, предназначенная, ртк, фрагмента, чужеродного
...1 х НВ 101 проводятотбор колоний фенотипа "Ар Тс и рестрикционный анализ плазмидных ДНК(рВКНК)П р и м е р 3. Рекомбинантныеплазмидные ДНК рТК 108, рТК 1567,рТК 1238 и РТК 1285Плазмидную ДНК рВКНК подвергаютгидролизу эндонуклеазой рестрикцииРчц 11 в стандартных Условиях и сшивают ДНК-лигазой фага Т 4 по примеруЛигаэной смесью трансформируют компетентные клетки штавща Е.со 1 НВ 101и отбирают колонии, содержащие рекомбинантные плазмиды с Нпй 111 - Рсщ 1150фрагментом ДНК длиной 1708 н.п,(рТК 1708).Плазмидную ДНК рТК 1708 расщепляют последовательно рестриктазамиНЫЙ 111 и ХЬа 1, выделяют большийфрагмент ДНК, который инкубируют снуклеаэой З 1 по примеру 1. Затем пре парат ДНК сшивают ДНК-лигазой фагаТ 4 и проводят трансформацию компе 64...