C12N 15/28 — факторы некроза опухоли

Номер патента: 1607690

Опубликовано: 15.11.1990

Авторы: Такао, Хадзиму, Хиратака, Хироси

МПК: C12N 15/28

Метки: некроза, опухоли, рекомбинантного, стабилизации, фактора

...7 сут. При проведении описанного выше испытания в качестве контрольного обраэца используют раствор активного вещества, не содержащий альбумин. Что касается лиофилизированной пробы, то ее растворяют в стерильной дистиллированной воде, после чего испытывают образец на цитотоксическую активность. Испытывают 1 п ч 1.чо или 1.п ч 1.го остаточную активность каждого образца.1П р и м е р 5. К аликвотам добавляют ФНО человека по отдельности в различных концентрациях вещества, которые являются хорошо известными стабилизирующими агентами для растворов обычных физиологически активных веществ, в частности различные аминокислоты, соли металлов и хелатообраэующие агенты. Каждый иэ полученных при этом растворов хранят при 4 С в течение 7 сут,...

Номер патента: 1614765

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Масааки, Мицие, Юнити, Ясуджи

МПК: C12N 15/28

Метки: днк, кодирующей, некроза, опухоли, плазмидной, рекомбинантной, фактор, человека

...со скоростью потока, равной133 мп/ч. Элюат фракционируют по ф 1 акциям 10 мп. Фракции, обладающие цито"токсической активностью, :.бирают иобъединяют,Выделение цитотоксической активности на этой стадии составляет 533, удельная активность повышается приблизительно в 9 раэСоединенные активные фракции обессоливают и концентрируют до 1/10 объеУ ма ультрафильтрацией с помощью Оай 1 о .с использованием мембраны УМ 10,Концентрат подвергают препаративному изоэлектрофокусирующему гель-электрофорезу, Аликвоту концентрата наносят на пластинку из полиакриламидного геля (0,2 х 10 х 10 см) с градиентомрН от 5,6 до 6,1, созданном с помощью1 ишоЪ 1 чпе. Электрофореэ проводят принапряжении 2400 В в течение 16 ч при15 С, "ель нарезают на куски...

Номер патента: 1630602

Опубликовано: 23.02.1991

Авторы: Такао, Хироси, Юнити

МПК: A61K 37/02, C12N 15/28

Метки: некроза, опухоли, рекомбинантного, фактора

...чего получают клеточный экстракт, содержащий человеческий ФНО. Экстракт имеет активность5,2.10 И/мл, а содержащийся в немчеловеческий ФНО имеет удельную активность 4,2 104 И/мл.К экстракту прибавляют стептомицин в таком количестве, чтобы получить конечную концентрацию 0,7 мас.Х//объем для получения осадка нуклеиновых кислот. После удаления осадка1630602 Нхя ТЬк 11 е Бег Акс 1 11 е А 1 а Ча 1 Бек Тук 61 п Тйк Ьув Ча 1 Аяп Ъец Ьеа Бег А 1 а 11 е Ьув Бег Рго Суя С 1 п Агс 1 61 ц Тйг Рко 61 ц 61 у Я 1 а 61 ц А 1 а Ьуя Рхо Тгр Туг С 1 и Рго 11 е Туг Ьеи С 1 у С 1 у Ча 1 РЬе 61 п Ьео 61 о Ьув 61 у Х Агу Рхо Аяр Туг Ъец Аьр РЬе А 1 а 61 а Бег 61 у 61 п Ча 1 Туг РЬе61 у 11 е Х 1 е ЪХа Ьеа,мированных плазмидой, кодирующей ФНОсо следующей...

Номер патента: 1739855

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Мицие, Мосааки, Юнити, Ясуджи

МПК: C12N 15/28

Метки: активностью, некроза, обладающего, опухоли, полипептида, фактора, человека

...20 мкг/мл,5. Конструирование рекомбинатных.плазмид,6120 мкл раствора олиго(дЦ)-концевой к-ДНК смешивают с равным объемомраствора олиго(дГ)-концевой ДНКрВК 322, инкубируют при 65 С в течение5 мин и при 57 С в течение 120 миндля достижения ренатурации.6, Отбор организмов-хозяев.Полученными плазмидами трансформируют клетки штамма Е.со 1 Х 1776,культивируют при 37 С в 20 мл Ь-бульона (состав: 10 г триптона, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г хлористогонатрия и 1 г глюкозына 1 л, рН 7,2),содержащего 100 мкг/мп диаминопимелиновой кислоты и 40 мкг/мл тимидина, дотех пор, пока мутность, измеряемая при600 нм, не достигнет 0,5. Клетки собираюто, центрифугированием при 4, С, промывают10 мл 10 мМ буфера трис-ИС 1 (рН 7,3),содержащего 50 мМ...

Номер патента: 1762761

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Катухиса, Рюдзи, Хиротада, Хитоси, Юнити

МПК: C12N 15/28

Метки: некроза, опухоли, полипептида, свойствами, фактора

...-6 В, предварительно уравновешенную с помощью 20 мМ буфера трис-НС (рН 7,8). После промывки колонки тем же буфером для удаления неадсорбированных компонентов, требуемый полипептид элюируют с использованием линейного градиента концентрации йаС от 0 до 0,3 М в том же буфере, Каждую фракцию подвергают ДСН-полиакриламидному гельэлектрафорезу и фракции, содержащие палипептид, имеющий молекулярную массу около 17 килодапьтонов, собирают и обьединя ют.Обьединенную фракцию диализируютотносительно 20 мМ буфера трис-НС (рН7,8), а затем ее снова подвергают хроматографии в колонке ДЭАЭ-сефароза С:6 В описанным образом, но элюирование проводятв условиях более слабого градиента концентрации МаС.Фракции, содержащие целевой полипептид собирают,...

Номер патента: 1438240

Опубликовано: 20.03.1996

Авторы: Болдырева, Добрынин, Коробко, Кравченко, Недоспасов, Турецкая, Филиппов, Чувпило, Шахов, Шингарова

МПК: C12N 1/21, C12N 15/28

Метки: ген, днк, кодирующая, конструирования, некроза, опухоли, плазмида, плазмидная, плазмидной, полипептид, полусинтетический, промежуточная, рекомбинантная, рекомбинантной, ртnf, содержащая, фактора, человека

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pTNF 22, содержащая полусинтетический ген фактора некроза опухоли человека, - промежуточная плазмида для конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК pTNF 31, с мол.м. 3,6 MD (5,95 т.п.о. ), содержащая:Bam I - Hind III-фрагмент ДНК плазмидного вектора PVR 291 с промотором, оператором и измененным геном -галактозидазы, кодирующим 1027 аминокислотных остатков размером 5,35 т.п.о.;Bam I - Msp I-фрагмент синтетической ДНК с участком, инициации трансляции Escherichia coli, инициирующим кодоном ATG и 31 N-концевым кодоном фактора некроза опухоли размером 120 тыс. п.о.;Msp I - Hind III-фрагмент ДНК рекомбинантного фага l 422 с...

Номер патента: 1438241

Опубликовано: 20.03.1996

Авторы: Болдырева, Добрынин, Коробко, Кравченко, Недоспасов, Турецкая, Филиппов, Чувпило, Шахов, Шингарова

МПК: C12N 1/21, C12N 15/28

Метки: escherichia, бактерий, днк, кодирующая, некроза, опухоли, плазмидная, полипептид, полипептида, продуцент, рекомбинантная, ртnf, свойствами, фактора, человека, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pTNF 33, кодирующая полипептид со свойствами фактора некроза опухоли человека, с мол.м. 2,93 MD и размером 4,85 т. п.о., содержащаяPst I / Pvu II-фрагмент ДНК плазмиды pGA 23 с тандемом промоторов A2 и A3 ранней области бактериофага T7, с геном дигидрофолатредуктазы и частью гена -лактамазы размером 1,83 т.п.о.,Pst I /Xho I-фрагмент ДНК плазмиды pTNF 3 с геном хлорамфениколацетилтрансферазы, терминатором транскрипции фага l, частью гена -лактамазы и частью гена фактора некроза опухоли человека, кодирующего аминокислотную последовательность 4 (Ser)-157 (Leu) размером...

Номер патента: 1445193

Опубликовано: 20.03.1996

Авторы: Болдырева, Добрынин, Коробко, Кравченко, Максимова, Недоспасов, Турецкая, Филиппов, Чувпило, Шахов, Шингарова

МПК: C12N 1/21, C12N 15/28

Метки: днк, кодирующая, конструирования, плазмидная, плазмидной, полипептид, продукт, промежуточный, рекомбинантная, рекомбинантной, свойствами, фактора

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pGA 23 - промежуточный продукт для конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК pT pTNF311 с мол.м. 2,5 МД, содержащая:Rst I -Bam I-фрагмент ДНК плазмиды p 4256 с тандемом промоторов A2 и A3 ранней области фага T7 и с частью гена b лактамазы размером 1,01 т.п.о.;Bam I - Pst-фрагмент ДНК плазмиды pDSI T0 2+ с геном дигидрофолатредуктазы, хлорамфениколацетилтрансферазы с терминатором транскрипции фага l и частью гена b -лактамазы;генетические маркеры:ген b -лактамазы и хлорамфениколацетилтрансферазы, детерминирующие устойчивость трансформированных плазмидой pGA 23 клеток Escherichia coli к...