Йомантас

Номер патента: 1679800

Опубликовано: 09.01.1995

Авторы: Гервинскас, Дебабов, Изотова, Йомантас, Козлов, Народицкая, Стеркин, Стронгин, Уланова

МПК: C12N 15/52, C12N 15/72

Метки: amyloliquefaciens, bacillus, pbanp, бактерий, днк, кодирующая, металлопротеиназу, металлопротеиназы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, штамм

РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBANP 464, КОДИРУЮЩАЯ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗУ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS A-50 И ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS - ПРОДУЦЕНТ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ .1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pBANP463, кодирующая металлопротеиназу Bacillus amyloliquefaciens A-50 размером 6,3 т.п.н. и содержащая: плазмидную ДНК pBA4 размером 4,4 т.п.н., в которой с помощью фрагмента Кленова ДНК-полимеразы 1 удален в полилинкерной последовательности участок узнавания эндонуклеазы рестрикции EcoRI; B8l 11 - B8l 11 - фрагмент размером 1,9 т.п. н. с геном металлопротеиназы B.amyloliquefaciens А-50, гены: npr-ген, кодирующий синтез металлопротеиназы, emrC-ген, детерминирующий устойчивость клеток к эритромицину,...

Номер патента: 2003689

Опубликовано: 30.11.1993

Авторы: Азизбекян, Дебабов, Йомантас, Козлов, Попов, Стеркин

МПК: C12N 15/32, C12N 15/56, C12N 15/75 ...

Метки: amyloliquefaciens, bacillus, альфа, альфа-амилазы, амилазу, днк, кодирующая, плазмидная, продуцент, рва1418, рекомбинантная, штамм-бактерий

...содержит 10 мл 1%- ного растворимого. крахмала, растворенного в 15 мМ йа-К-фосфатном буфере, рН 6,0, и 5 мл исследуемого образца (разведенного в 2 мМ ацетатном буфере, рН 6,0, 03, мМ СаС 2, 100 мМ МаС), Контроль вместо исследуемого образца содержит 5 мл буфера для разведения фермента, Пробы инкубируют при 30 С 10 мин. Реакцию останавливают добавлением к 1 мл реакционной смеси 10 мл 0,1 М раствора НС. Из полученной смеси отбирают 1 мл и переносят в 10 мл раствора йода, содержащего 0,0025% Л и 0,025% КЛ, Реакционную смесь выдерживают при 20 С.20 мин и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 656 нм, Контрольный раствор имеет синюю окраску, а опытные образцы приобретают фиолетовый цвет, Контрольный раствором при...

Номер патента: 1788966

Опубликовано: 15.01.1993

Авторы: Баев, Болотин, Вольфович, Дебабов, Йомантас, Козлов, Народицкая, Орлова, Попов, Рябченко, Сорокин, Стеркин

МПК: C12N 1/21

Метки: bacillus, liснеnifоrмis, амylоliquеfасiеns-продуцент, амилазы, бактерий, штамм

...маркеров плазми1. Устойчивость к эритромицину клеток В.агпу 1 оИцце 1 асепз (В), содержащих плаэмиду рВАТАМ 2, анализируют на среде с содержанием эритромицина 5 - 20 мкг/мл. Данные клетки растут на средах с такой концентрацией эритромицина.2. Наличие секретируемой термостэбильной а -амилазы в клетках В,агпу 1 оИцце 1 асепз (В), содержащих плазмиду рВАТАМ 2, устанавливают следующим образом: клетки из отдельных клонов наносят микробиологической петлей на чашку Петри с твердым 1 В-агаром, содержащим 0,15% амилопектиназура, в виде точек или полос и инкубируют при 37 С 18 - 24 час. Вокруг выросшей массы клеток образуется прозрачная зона гидролизованного амилопектиназура. Клетки исходного штамма - реципиента В.ату 1 оИс 1 цеГасепз (В),...

Номер патента: 1717633

Опубликовано: 07.03.1992

Авторы: Баев, Болотин, Вольфович, Дебабов, Йомантас, Козлов, Народицкая, Орлова, Попов, Рябченко, Сорокин, Стеркин, Стронгин

МПК: C12N 15/18

Метки: bacillus, suвтilis, альфа-амилазы, бактерий, днк, кодирующий, конструирования, продуцент, синтез, фрагмент, штамм

...ТемпераДНК А Ч произведена оптимальная под- турный оптимум для а-амилазы, кодируе.стыковкапоследовательностиДНК,кодиру- мой фрагментом ДНК А 1.Ч, составляет5 10 15 20 30 40 45 50 55 75-85"С. Меньшая продуктивность штамма, синтезирующего термостабильную а -амилазу связана с меньшей удельной активностью термостабильного белка из В.ИсЬепИогглз. измеренной в неоптимальных условиях (37 С).Б р и м е р 1, Конструирование фрагмента ДНК АУ/7, кодирующего синтез термостабильной а -амилазы,Клетки бактерий В.мЬИз (рЧ 31), содержащие плазмидную ДНК рЧЯ 1, выращивают в 10 мл 1-бульона (триптон 10 г/л; дрожжевой экстракт 5 г/л; ЙаС 10 г/л; рН 7,5) с добавлением эзоитромицина (0,02 мг/мл) до титра 1 х 10 кл/мл, Клетки осаждают центрифугированием...

Номер патента: 1615180

Опубликовано: 23.12.1990

Авторы: Йомантас, Козлов, Народицкая, Стойнова, Уланова

МПК: C12N 15/75

Метки: бациллах, вектор, днк, клонирования, предназначенный, рва, фрагментов

...В, яиЬТ 111 я 83112 позволяют выявить плазмиду рВА 4,5 мкг ДНК рВА 4 обрабатывают рестриктазой ЕсоКв следующих ус"ловиях: 100 мМ тряс-НС 1, рН 7,5,10 мМ ИяС 1 р, 6 мМ 2-8-меркаптаэтанола, 50 мМ ИаС 1 р 0,5 ед, активности ЕсоК 1. Объем инкубационной5 16 смеси 40 мкл, Инкубацию проводят при 3 С в течение 20 мин, Реакцию останавливают добавлением 100 мкл 96%- ного этанола. Затем ДНК перерастворяют в 20 мкл буфера ТЕ (10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 0,1 мМ ЭДТА), вносят смесь дезокситрифосфатов до конечной концентрации 0,25 мМ каждого. Объем доводят до 30 мкл буфером ТЕ и вносят 2 ед, активности кленовского фрагмента ДНК-полимеразы Е.со 1 д, Реакцию достройки липких концов проводят при комнатной температуре 30 мин и останавливают добавлением...