Способ определения молекулярной массы реплицирующейся днк у двудольных растений
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1567585
Авторы: Квеситадзе, Таварткиладзе
Текст
кают через мембранный фильтр размером пор 0,24 мкм, В колбу с Ферментным раствором помещают 15 г каллюсной культуры табака и оставляют нао,14 ч при 27 С. Суспензию пропускаютчерез капроновый Фильтр и центрифугируют 2 раза по 3 мин при 800 об/мин.На дне центрифужного стакана осаждаются протопласты, которые далее метятН-тимидином (0,4 Г 1 Бк/мл, удельнаяактивность 185 ГВк/мл) в 20 мл жидкойпитательной среды по Мурасиге и Скуга, время мечения 5 ч, После импульсной метки раствор центрийугируют при800 об/мин, супернатант выливают, аосадок промывают в том же растворе2 раза, 0,2 мл суспензии протопластов(концентрация 5 ч 10 4 пр/мл) помещаютна дно центриАужного стакана, добавляют О, 1 мл заранее приготовленного,лизирующего раствора по Мальцу(0,005 н. МаОН, 1/ додецильсульфатнатрия, 0,2/ дезоксихолат натрия,О,ООЬ Г цитрат натрия, 0,05 Г 1 ЭДТА,рН 12), оставляют на 90 мин при комнатной температуре, После лизиса наносят на щелочные градиенты сахарозы,приготовленные заранее (начальная5 Х, конечная 30/), Центрифугируют30на ультрацентрифуге на бакет-роторепри 42 000 об/мнн, 20 С, 150 мин,После остановки ротора осуществляютразделение Аракций, Каждую Фракциюнаносят на Аильтры, промывают Аильтры 3 раза в ледяной 10/-ной трихлоруксусной кислоте и 96/-ном этаноле,сушат и подсчитывают радиоактивностьв стандартном сцинтилляционном растворе. В табл,2 приведено количестворадиоактивности каждой фракции гра- фдиента (время подсчета 1 мин), Подсчитывают ЕР;:1,. = 14133, 128 1 О и;3". = 5188, Средний молекулярный весподсчитывают по Аормуле (1) - М=12,25 10П р и м е р 2. Культура юкки,Готовят Аерментный раствор: взвешивают 3,5 пектомацерина Гх, целлюлазы 1,5 г, пектинаэы 0,4 г и последовательно растворяют в 100 мп бидистиллированной воды, потом добавляют 7,3 г ЫогЬ 1 о 1, 1,1 г СаС 1 ираствор доводят до рН 5,3. Дальнейшие определения проводят по техноло"гии и в ревммах,описанных в примере 1.55В табл.3 приведены количественныезначения радиоактивности каждой фракции ДНК юкки, Подсчитывают: Е,Г 1, 88261,327 1 ОРГ, = 3955,0; И у" 22,3 10 ф. Таким образом разработан способопределения молекулярного веса реплицирующейся ДНК у двудольньг растений,Способ может быть рекомендован для генетических исследований сельскохозяйственных культур,Формула, изобретения Способ определения молекулярной массы реплицирующейся ДНК у двудольных растений, включающий получение протопластов из растительных клеток в растворе, содержащем 3,5-4,5 пектомацерина Г, 1,5"2,0 Х целлюлозы, 0,4-0,Ь/. пектинаэы, 0,73 Х сорбитола и О, 113 СаС 1 , инкубацию протопластов в среде, содержащей з Н-тимндин, лизис раствором детергента по Мальцу, ,Фракционирование в щелочном градиенте сахарозы и последующий расчет молекулярной массы по формуле ЪР; М;ю Г1 где Р; - радиоактивность 1.-ой фракции,М; - молекулярная масса 1.-ой Аракции,Таблица 16Таблица 2567585 Фракция Количество радиоактивностиР 1, имп/мин Количество радиоактивностиР 1, имп/мин Фракция сТаблица 3 Количество радиоактивностиГ 1, имп/мин фракция фракция Количество радиоактивности Г 1, имп/минв Составитель Т, ЗабойкинаРедактор М, Недолуженко Техред А.Кравчук Корректор О. Кравцова Заказ 1300 Тираж 298 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР113035, Москва, Ж Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,О 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2 3 4 5 6 7 8 9 10 169 194 214 189 208 230 313 201 334 721 588 171 123 19795 14891 . 155 155 135 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 511 248 248 211 296 150 69 196 176 210 161 615 264 171 151 164 151 136 114 210
СмотретьЗаявка
4327729, 12.11.1987
ИНСТИТУТ БИОХИМИИ РАСТЕНИЙ АН ГССР
КВЕСИТАДЗЕ ГЕОРГИЙ ИВАНОВИЧ, ТАВАРТКИЛАДЗЕ БЕГЛАР АКАКИЕВИЧ
МПК / Метки
МПК: C07H 21/04
Метки: двудольных, днк, массы, молекулярной, растений, реплицирующейся
Опубликовано: 30.05.1990
Код ссылки
<a href="https://patents.su/3-1567585-sposob-opredeleniya-molekulyarnojj-massy-repliciruyushhejjsya-dnk-u-dvudolnykh-rastenijj.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения молекулярной массы реплицирующейся днк у двудольных растений</a>
Предыдущий патент: Способ получения ди-трет-бутилперокситрифенилсурьмы
Следующий патент: Способ получения полимерной композиции
Случайный патент: Трубопоршневая установка для градуировки и поверки счетчиков и расходомеров