Мицие

Номер патента: 1739855

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Мицие, Мосааки, Юнити, Ясуджи

МПК: C12N 15/28

Метки: активностью, некроза, обладающего, опухоли, полипептида, фактора, человека

...20 мкг/мл,5. Конструирование рекомбинатных.плазмид,6120 мкл раствора олиго(дЦ)-концевой к-ДНК смешивают с равным объемомраствора олиго(дГ)-концевой ДНКрВК 322, инкубируют при 65 С в течение5 мин и при 57 С в течение 120 миндля достижения ренатурации.6, Отбор организмов-хозяев.Полученными плазмидами трансформируют клетки штамма Е.со 1 Х 1776,культивируют при 37 С в 20 мл Ь-бульона (состав: 10 г триптона, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г хлористогонатрия и 1 г глюкозына 1 л, рН 7,2),содержащего 100 мкг/мп диаминопимелиновой кислоты и 40 мкг/мл тимидина, дотех пор, пока мутность, измеряемая при600 нм, не достигнет 0,5. Клетки собираюто, центрифугированием при 4, С, промывают10 мл 10 мМ буфера трис-ИС 1 (рН 7,3),содержащего 50 мМ...

Номер патента: 1614765

Опубликовано: 15.12.1990

Авторы: Масааки, Мицие, Юнити, Ясуджи

МПК: C12N 15/28

Метки: днк, кодирующей, некроза, опухоли, плазмидной, рекомбинантной, фактор, человека

...со скоростью потока, равной133 мп/ч. Элюат фракционируют по ф 1 акциям 10 мп. Фракции, обладающие цито"токсической активностью, :.бирают иобъединяют,Выделение цитотоксической активности на этой стадии составляет 533, удельная активность повышается приблизительно в 9 раэСоединенные активные фракции обессоливают и концентрируют до 1/10 объеУ ма ультрафильтрацией с помощью Оай 1 о .с использованием мембраны УМ 10,Концентрат подвергают препаративному изоэлектрофокусирующему гель-электрофорезу, Аликвоту концентрата наносят на пластинку из полиакриламидного геля (0,2 х 10 х 10 см) с градиентомрН от 5,6 до 6,1, созданном с помощью1 ишоЪ 1 чпе. Электрофореэ проводят принапряжении 2400 В в течение 16 ч при15 С, "ель нарезают на куски...