Способ определения характерных времен релаксации структурных переходов в растворе днк

тро т Л.Н. Дыма8.8) .И. Ниэкоте я биологиче иси: Мецние ерас реба Маеуег,гаса, РцЬ есЬп. 1963,биофизиию кинеИзобретение относится к ке, в частности к определе тических параметров плавле Цель изобретения - упро соба определения характерньия ДНК.ение спои време переходов в руктурных ая цельбыстро г вора ДНК арактерн елаксации састворе ДНКПоставлен достигается зао изменения тем счет создани с последующим ых времен релак оптического попературы ра вычислением висимост сации глощен леб ани т частоты температурных ко об осущест т следующим обо имер. Впр выполненные оугольные отбоковых стен верс ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХАРАКТЕРНЫХ ВРЕМЕН РЕЛАКСАЦИИ СТРУКТУРНЫХ ПЕРЕХОДОВ В РАСТВОРЕ ДНК(57) Изобретение относится к биофизике, в частности к определению кинетических параметров плавления ДНК. Целью изобретения является упрощение способа определения характерных времен релаксации структурных переходов в растворе ДНК. Поставленная цель достигается за счет того, что в растворе ДНК создается быстрое периодическое изменение температуры, а затем по зависимости оптического поглощения от частоты температурных колебаний определяют характерные времена релаксации. ках кюветы устанавливают два термоэлектрических тепловых преобразователя энергии, которые включают параллельно и подключают .к генератору переменного тока. Используют препаратыДНК из селезенки крупного рогатогоскота, эритроцитов цыплят и спермылосося. Молекулярная масса ДНК (М == 4 10 Да) вычислена по значению характеристической вязкости в 0,15 1.ИаС 1. Концентрацию ДНК (С.ц) в растворе определяют спектрофотометрически по разности оптической плотности на длинах волн 270 нм и 290 нмпосле гидролиэа с 67-ной хлорной кислотой. Растворы для измерений готовят следующим образом. Сухой образецДНК растворяют в дистиллированной воФормула изобретения Способ определения характерных времен релаксации структурных переходов в растворе ДНК путем измерения оптического поглощения раствора ДНК с заданными концентрацией, ионной си. лой и начальной температурой и выведенного из равновесного состояния быстрым изменением температуры с последующим вычислением характерных времен релаксации, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения време. ни анализа, быстрое изменение температуры раствора ДНК осуществляют периодически с заданной частотой с помощью термоэлектрических преобразова телей, составляющих боковые стенки кюветы спектрофотометра, а вычисление характерных времен релаксации проводят на основании анализа зависимости оптического поглощения от частоты температурных колебаний. Составитель А,СпундэРедактор А.Ревин Техред .И,Верес Корректор А.Обручар Заказ 5895/46 Тираж 789 ПодписноеВНИИЙИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,Ужгород, ул. Гагарина,101 3 1511646 де в концентрации 0,01 г/100 сми выдерживают в течение суток при температуре6 С. Затем раствор досаоливают до 0,15 М НаС 1. Непосредствен но перед измерениями раствор ДНК разбавляют с помощью водно-солевого растворителя (0,15 М БаС 1) до концентрации Ф 0,001 г/100 см , что соответствует оптической плотнооти (Р) нативного образца в кювете длиной 1 - 1 см на длине волны= 250 нм П 6 0,25. Приготовленные растворы Д 11 К фильтруют через стеклянный фильтр Р 1, растворитель (0,15 М БаС 1) через 5 фильтр Р 3 и заливают в кювету спектрофотометра. С помощью термостата устанавливают базовую температуру (Т) растворителя. Изменяя величину тока (1), проходящего через термоэлектри ческие тепловые преобразователи энергии в диапазоне 1 = (0-3) А и частоту (1) переменного генератора тока в диапазоне 1 = (0,01 - 0,5) Гц, регулируют амплитуду температурных колебаний (Т ) и частоту (4), Контроль температуры раствора в кювете осуществ-. ляют с помощью датчика температуры, включающего калиброванную (38 мкВ/град) медно-константановую термопару и уси литель постоянного тока с коэффициентом усиления К = 500. Выход УПТ по-, авали на цифровой вольтметр. Частоту следования тактовых импульсов измеряют частотомером электронносчетным. Термопару устанавливают в центре кюветы, Измерение оптической плотности раствора проводят на спектрофотометре. Температуру раствора изменяют в соответствии с выражением Т = , 40Т+ Е(Т, 1 ). При этом варьировали Тв диапазоне Т = (50-75) С; Т, = (2-7) С, частотой Я = (0,01 - 0,5) Гц. В процессе эксперимента по цифровому индикатору спектрофотометра регистрируют оптическую плотность (ОП)раствора ДНК на длине волны=260 нм,соответствующую максимуму поглощательной способности нативной ДНК.Наибольшие изменения относительнойоптической плотности происходят причастотах 1, = 0,15 Гц и 14 =0,024 Гц,что соответствует характерным временам накопления выплавленных участковмолекулы ДНК, соответственно равным6,5 с и о,4 = 42 с. Измеренныехарактерные времена денатурационныхпереходов согласуются с результатами их косвенного определения методами теплового удара,