Патенты с меткой «днк»

Номер патента: 1742331

Опубликовано: 23.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Озолс, Осе, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: 51-3, 56-103, антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, кор, крупного, лейкоза, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, рогатого, скота, экспонированным, эпитопом

...разбавляют в 4 раза дистиллированной водой и подвергаютф ра кциони рован и ю сульфатом аммония. 20Н ВсАд Ь - ВО/др 51(56 - 103) собирают восадке, полученном при 30 насыщениясульфатом аммония. Осадок растворяют в0,05 М трис-НС 1, рН 8,0, 0.15 М йаО, 0,1тритоне Хдо конечной концентрации .25белка 25 - 50 мг/мл, и 2 - 4 мл этого раствора наносят на колонку с сефарозой (1,6 х 100см), уравновешенную тем же буфером, нобез тритона Х. Фракции, проявляющиеНВсАд-активность, собирают и используют 30либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-нымсульфатом аммония,П р и м е р 3. Определение НВсАд-активности методом РИД. 35Титр НВсАд определяют с помощью радиальной иммунодиффузии по Ухтерлони,Для этого готовят двухкратные...

Номер патента: 1744110

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 1/21, C12N 15/33, C12N 15/70 ...

Метки: frblv, бактерий, бактериофага, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, оболочки, плазмидная, прод, рекомбинантная, рогатого, скота, слитый, штамм

...50 мМ трис-НС, рН 7,5; 10 мММдС 2, 10 мМ дитиотрейтол, 50 Ы АТР и 10ед, Т 4 ДНК-лигазы, в течение 12 ч при 4 С,Фрагмент инактивируют нагреванием при650 С в течение 15 мин, К реакционной смесидобавляют 100 мкл клеток Е,соИ ВВ 1, обработанных 100 мМ СаС 2 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл), длятрансформации клеток,Отбор клонов осуществляют путем экспресс - выделения ДНК и ее рестрикционного анализа, а также секвенирования.Плазмида с ожидаемой последовательностью получает наименование рГРВ Ч-Р 6,Конструирование рекомбинантнойплазмидной ДНК рЕРВ ЧзР 6,2 мкг плазмиды рРРВ Ч-Г 6, выделенной стандартным методом, расщепляют 3.ед, растриктазы Есо 781 и 3 ед, рестриктазыЗзр 1 в 25 мкл раствора А, содержащего100 мМ трис-НС, рН 7,5; 50 мМ...

Номер патента: 1744111

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Епифанова, Ксензенко, Кулаков, Новикова, Носкова

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: rv7-ii, бактерий, выявления, днк, еsснеriснiа, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, ротавирусов, содержащая, фрагмент, фрагмента, человека, штамм

...мк КиН; АТФ и 1/10 объема поли-А-полимеразы (0,5 мкг,Степень аденилирования определяют по известной методике, Определяют время реакции, необходимое для присоединения 15 - 20 остатков АМФ. Полученный препарат экстрагируют фенолом и осаждают 2,5 объемами спирта.К препарату полиаденилированной РН К в буфере ТЕ добавляют 5 мкг олиго-ОТ 2-в денатурируют 3 мин при 100 С и охлаждают во льду. Синтез кДНК проводят в буфере, содержащем 50 мМ трис-НС 1, рН 8,3, 50 мМ КС 1, 10 мМ МдС 2, 10 мМ ДТТ, 4 мМ пирофосфата натрия, по 0,5 мМ б АТР, б СТР, б 6 ТР, б ТТР, 10 мк Ки Р АТР в объеме реакционной смеси 100 мкл. Добавляют 25 ед,обратной транскриптазы из вируса миелобластоза птиц и инкубируют 2 ч при 42 С,Цепи РНК удаляют щелочным гидролизом (0,25 М...

Номер патента: 1751206

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Булгакова, Попов

МПК: C12N 15/12

Метки: yersinia, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, реsтis, рек, рекомбинантная, фибринолизин, фибринолизина, штамм

...и подсушивают, Осадок растворяют в буфере для лигировдния (0,066 М трис-НС 1, рН 7,5; 5 мМ МЫС 2, 5 мМ дитиотрейтола и 1 мМ АТФ) с добавлением ДНК лигэзы фага Т(5 ед). Лигировдние проводят 10-12 ч при 16 С.1751206В, Анализ рекомбиыантыых плазмид и форм (ЗДТА) лиэоцим, Обломки клетоквыделение клона, несущего рекомбинанг- осаждают. Супернэтант, содержащийагоную плаэмиду рЕК 4, вые частицы, используют для заражения.Полученную смесь ДНК испольэуютдля Культуру Е, соИ К 802 (110 кл/мл) сметрвнсформации клеток Е. соИ К 802. Транс шиваот с 0,1 мл фаголиэата и инкубируот 1формировайные клетки подраи 1 иваот 1 чэс ч при 28 С, полученную смесь разводятв бульоне СВ и высевают на агэризировэн-бульоном 1.В в 10 раз и 0,1 мл высевают наную среду 1,В с...

Номер патента: 1751207

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Крашенинникова, Пухальский, Смирнов, Теверовская

МПК: C12N 15/21, C12N 15/84

Метки: pst20, альфа, днк, интерферон, кодирующая, плазмидная, растениях, рекомбинантная, табака, человека

...трех штаммов и наносят на нитроцеллюлозный фильтр, который помещают на полноценную питательную среду на 18 ч при 300 С, Бактерии сйывают с фильтра и, высевают на селективную среду. содержащую ампициллин (100 мкг/мл), рифампицин (100 мкг/мл),.спектиномицин (100 мкг/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл), Выросшие через 3 сут колоний на селективной среде при 30 С очищают на той же среде до отдельных колоний й выделяют из клеточной биомассы тотальную ДНК, 10 мкг ДНК переваривают с 20 ед, рестриктазы ВавН 1 1 ч.при 37 С, фракциоййруют путем электрофореза в 0,7 агарозном геле и переносят на нитроцеллолознь 1 й.фйльтр по методу Саузерна. Проводят гйбридизацию иммобилизованной на фильтре ДНК с Р-меченной ДНК .32плазмиды рЯТ 20, отмывают фильтр от...

Номер патента: 1751208

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Бреде, Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: pfrblv, бактерий, бактериофага, белка, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, обо, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рогатого, скота, штамм

...при фильтрыинкубируютсмоноклональны 65 С. После очистки ДНК В 9 И 1 - ВагпН фраг- ми анти- др 51 антителами глАК 14 в развемента на агарозном геле ДНК растворяют в дении 1:500 на буфере ТВЯ, содержащем20 мкл воды, Заполнейие концов проводят 55 50 мМ трис-НС 1, рН 7,5, 0,15 М МаС 1, 0,1%в 100 мкл раствора Б, содержащего 0,05 М тритон Х 100, 1% БСА, в течение 15 ч притрис-НС 1, рН 7,5, 0,01 М 9 С 12, 0,01 М дитиот С, После трехкратной отмывки буферомрейтол,0,025 М МаС 1, 100 мкМ сАТР, ОСТР, ТВЯ фильтры инкубируют 2 ч при 200 С снТТ 1- и ОСТР и 10 ед, ДНК-полимеразы Е. коньюгатом пероксидазы с антителами просоИ (фрагмент Кленова, в течение 1 ч при тив иммуноглобулинов мыши в разведении1:500. Фильтры отмывают буфером ТВЯ (3 - но. Иньекции...

Номер патента: 1751209

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстман, Пумпен, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/33, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: 24-5, бактерий, белка, белок, вируса, гепатита, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, кор-ант, кор-антигена, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, слитого, слитый, человека, штамм

...клеток к реакци-онной смеси добавляют 100 мкл клеток Е.соП ЯВ 1, обработанных 0,1 М СаС 12 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл).9Отбор клоновосуществляют путем рестрикционного анализа плазмидной ДНК,выделенной экспресс-методом. Плаэмида сожидаембй рестрикционной картой получает наименование рНИ 24-5,2. Штамм-продуцент Е. соИ К 802 (рН24 - 5),Штамм-продуцейт получают трансформацией клеток Е. со 11 К 802 рекомбинантнойплазмидной рНИ 24-5, Клетки выращиваютдо оптической плотности ОП 65 о 4-5 в солевой среде М 9 с добавкой, г/л: каэаминовыекислоты 10; глюкоза 2; ампициллин. 0,02,Клетки собирают центрифугированием и лизируют в четырехкратном обьеме буфера,содержащего 0,05 М трис-НС 1, рН 8,0; 0,15М ИаС 1, 0,1% тритон Х 100,...

Номер патента: 1751210

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстманн, Пумпен, Пушко, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/48, C12N 15/51, C12N 5/10 ...

Метки: 41-22, антиген, бакт, белка, вируса, гепатита, днк, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, кор, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, фрагментом, человека, штамм, экспонированным

...С 1 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х. Фракции, проявляющие РВсАд - активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-ным сульфатом аммония.3. Определение НВсАд - активности Методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью рэдиал ьной иммунодиффузии (Р ИД), Дл я этого готовят двукратные серийные разведения клеточного лизата и титруют против анти-НВс антител человека, В качестве 510 стандарта используют очищенный НВсАд, полученный из рекомбинантных бактерий (1 мг/мл). Результаты титрования методом х 0,75 мм, Злектрофорез проводят в теЗО чение 15 ч при силе тока 7 мА. После злектрофореэа белки переносят нэ нитроцеллюлозные фильтры, инкубируют с моноклональными...

Номер патента: 1754722

Опубликовано: 15.08.1992

Авторы: Бударин, Волченскова, Кейсевич, Копытин, Майданевич, Трохименко, Шалимов

МПК: A61K 31/295, C07F 15/00

Метки: активностью, днк, комплексного, обладающего, платины, противоопухолевой, соединения

...вискозиметрическим методом молекулярная масса соединения 25 РЮН=ДНК составляет 6,0 10 дальтон, Исходя иэ молекулярной массы соединения Р 1 ОН-ДНК и массы мономерной единицей этого полимера, имеющей эмпирическуюформулу30аГ;(ОН)СОМНзХН 2 О)МВСЕНзуо)2 Ъ х х (С 39 Н 51 ОЖЙ 15 Р 4)можно рассчитать среднестатистическую 35 величину и в соеАиненйи, Онз равна2000 + 100. Следовательно, е среднем на 2000 нуклеотйдных квартетов ДНК, состоящих из пар арбенин-тймин, гуанин-цитоэин.приходится примерно 4000 комплексных ча стиц (Рт(ОН)С(МНзХН 20 Н и 8000 комплексных частиц (Р 1 С 1)ЙНзХН 20)3УФ-спектр поглощения соединенияРтОН-ДНК, полученного в водном растворе и выделенного индивидуально, характери 45 эуется максимальным поглощением при265,7 нм, а...

Номер патента: 1759334

Опубликовано: 07.09.1992

Авторы: Константинов, Нестерова, Таусон

МПК: A01H 1/04

Метки: анализа, днк, митохондриальной, растений

...наслаивается по 10 мкл суспензии митохондрий. Электрофорез в стандартном приборе с платиновыми электродами проводится в трис-борзтном буфере в течение 1 ч при напряжении 1 В/см, затем втечение 2,5 ч при напряжении 5 В/см. Гель окрашивается в растворе бромистого этидия в воде (0,5 мкг/мл) и фотографируется в ультрафиолетовом свете. На электрофореграмме (фиг,1) выявляется ДН К митохондрий из 0,3 г проростков кукурузы. Анализ на электрофореграмме фракций митохондриальной ДНК, принадлежащих гибридам ЖеребковскийМВ и КраснодарскийТВ, показывает, что первый гибрид получен на основе цитоплазматической мужской стерильности (ЦМС) молдавского типа (Я-тип цитоплазмы), а второй гибрид на основе ЦМС техасского типа (Т-тип цитоплазмы). Для Я-типа...

Номер патента: 1761805

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Данилюк, Кравченко, Кьамынина, Сандахчиев, Синяков

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: pil-221, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкин-2, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, человеческий, человеческого, штамм

...ДНК-полимеразы (фрагмент Кленова) и выдерживают еще 10 мин при 10 С. 10мкл смеси используют для трансформациикомпетентных клеток Е.со 3 М 10 . Из колоний, имеющих фенотип Ар, Тс, выделяютплазмидную ДНК, обозначенную рВ, ипроводят Маги (Есор -ЯаО )-рестрикционный анализ, Правильность структуры нуклеотидов в области сайтов Есори ЯаОподтверждают методом Максама-Гилберта.П р и м е р 2, Конструирование рекомбинантной плазмиды рВ 1:2,20 мкг репликативной формы ДНК фагаМ 1 з гра гидролизуют в 100 мкл буфера 2 50ед, рестриктазы Есор1 ч при 37 С. Есор-Есор-фрагмент (198 п,о,) выделяют в 6%ПААГ,1 мкг ДНК плазмиды рВ -2 гидролизуют в 20 мкл буфера 2 рестриктазой Есогвописанных выше условиях, Смесь 0,25пкмоль линейной формы рВ:2,пкмоль(Есор -Есор...

Номер патента: 1761806

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Вакуленко, Навашин, Фомина, Энтина

МПК: C12N 15/31

Метки: днк, фрагмент

...Проводят в стандартных условиях гидролиз плазмидной ДНК эндонуклеазной рестрикции Н 1 пб 11 и в присутствии маркеров молекулярной массы устанавливают, что детерминанта резистентности к гентамицину, сизомицину, тобрамицину и нетилмицину находится в составе Н 1 пб 111 фрагмента размером 2,3 т.п,н,При помощи метода Сэнгера определяют нуклеотидную последовательность клонированной детерминанты резистентности. В результате компьютерной обработки результатов ген отнесли к типу аасС 2 а,Из лабораторного штамма Е.со 11, содержащего рекомбинантную плазмиду рЯИ 1, щелочным методом выделяют плазмидную ДНК в препаративных количествах. Проводят рестрикцию плазмидной ДНК эндонуклеаэой Есо Ю. Фрагмент размеров 537 п,н. вырезают из геля, проводят...

Номер патента: 1761808

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Абрамов, Галев, Гузаев, Завьялов, Смирнов, Чернов

МПК: C12N 15/48, C12P 19/34, C12Q 1/68 ...

Метки: белка, вируса, днк, др120, иммунодефицита, кодирующий, лимфоцитов, ответственную, поверхностного, протеином, связывание, сд4т, фрагмент, часть, человека

...65 с. В качестве мономеров используют ч-ацил-О-диметокситритип-О-цианоэтил)- й,ч-диизопропиламидофосфит)-2 -дезокси 1761808рибонуклеозиды. причем если рибонуклеозид = аденозин или цитидин, то ацил = бензоил, если рибонуклеозид = гуанозин, то ацил = изобутирил, если рибонуклеозид = тимидин, то ацил отсутствует, В качестве активатора межнуклеотидной концентрации используют тетразол, детритилирующего агента 20 -ный раствор трихлоруксусной кислоты в дихлорметане, окислителя 0,1 М раствор иода в смеси пиридин-вода-тетрагидрофуран 2:20:75, кэпирующих реагентов: равные обьемы реагента И (уксусный ангидрид,6-лутидин-тет рагидрофуран 10:10;80) и реагента В (1-метилимидазол-тетрагидрофуран 16:84), растворителя для промывки и конденсации -...

Номер патента: 1768639

Опубликовано: 15.10.1992

Авторы: Каримова, Михайлова, Панферцев, Степаншина, Черепанов

МПК: C12N 15/31

Метки: g824, j-антиген, j-антигена, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, микроба, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, чумного, штамм

...100 мкг/мл,Из сконструированного таким образом банка генов У.ремз отбирают клон, дающий положительную реакцию диффузионной преципитации с моновалентной анти- сывороткой (4), Рекомбинантная плазмидная ДНК, выделенная из этого клона, получает наименование р 67 (фиг. 1),Рекомбинантную плазмидную ДНК р 07 используют в качестве донора при создании плазмиды р 682. В качестве вектора при этом используют предварительно созданную плазмиду рР - делеционнь 1 й вариант малой плазмиды рРа 1 У,резбв, в которой фрагмент ЕсоВ - Нпб заменен на фрагмент ДНК, кодирующий ген сас (устойчивости к хлорамфениколу) из плазмиды рВВ 325, 1 мкг ДНК плазмиды р 67 смешивают с 1 мкг ДНК плазмиды рР 1 и инкубируют с рестриктазой Крп (5 ед.) в буфере 1 (трис-НС....

Номер патента: 1770359

Опубликовано: 23.10.1992

Авторы: Авот, Грен, Мясников, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 1/19, C12N 15/26

Метки: cereuisial, msil, sасснаrомuсеs, sасснаrомyсеs, днк, дрожжей, интерлейкина-2, клетках, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...фаза Т 4 и проводят инкубацию в течение ночи при 4 С, 20 25 30 ампициллина Из полученных описанным способом отдельных клонов трансформантов выделяют плазмидную ДНК методом, аналогичным методу выделения плазмиды рМЯ 46, с тем отличием, что выращивание клетокЕ,сове; дут в 10 мл питательной среды и все объемы растворов соответственно уменьшают в 50 раз по сравнению с указанными. Кроме того, вместо центрифугирования в растворе 35 40 50 55 51015 Полученной таким образом лигазной смесью трансформируют клетки Е.со НВ 101. Для этого клетки Е,со выращивают в 100 мл средыВ при 37 С и интенсивном перемешивании до достижения оптической плотности при 600 нм 0,4 - 0,5. Культуру охлаждают на льду, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10...

Номер патента: 1780542

Опубликовано: 07.12.1992

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52, C12N 15/80

Метки: активностью, асrемоniuм, днк, изопенициллин-n-синтетазу, изопенициллин-n-синтетазы, кодирующей, конструирования, обладающего, плазмидной, рекомбинантной, сернаlоsроriuм, штамма

...3,7 ХааРестрикцибуфера и 85 мкл Н 20. Около 5 мкл (50 еди онного фрагмента получают и суспендир ютниц) рестрикционного фермента Н 1 пб - И 1 в 10 мкл Н 20.добавляют к раствору ДНК и полученный В, Окончательное конструированиераствор инкубируют при 37 С в течение 2 ч. плэзмид РРЯ 30 и РРЯ 30,1.Н 1 пб- расщепленную плазмиднуюРРЯ 21 А ДНК помещают на 1 агарозный 40 . Около 1 мкг плэз ДНКг плэзмиднои Д растворягель и проводят электрофорез до тех пор, ют в 2 мкл 10 Х Хмкл аа рестрикционного буфеН 1 пб - И 1пока. 3,45 кв, 3,16 кв, 1,2 кви 69 кв ра и 6 мкл Н О. 0 2и - рестрикционные фрагменты не ста- рестрикционного фермента Хаа 1 добавляновятся четко выделенными на геле. Выде- ют к раствор " ДЙКляют Н 1 пб - И 1ляют и - рестрикционный...

Номер патента: 1664011

Опубликовано: 23.12.1992

Авторы: Быков, Бычков, Козаченко, Орлов

МПК: A61B 10/00, G01N 33/48

Метки: выявления, днк, матки, препарате, слизистой, цитологическом, шейки

...материал помещают в 0,88 М раствор сахароэы на 1,0 - 15 мин для гомогенизации ДНК с последующей фиксацией в изопропиловом спирте в течение 10 мин. Освобождение фосфатных радикалов дезоксирибонуклеиновой кислоты, которые впоследствии связываются с флюорохромом; производят помещением препарата на 4 - 5 мин в 5 н. раствор НО при комнатной температуре, Затем препараты промывают в 3 емкостях с дистиллированной водой, готовят мазок и окрашивают в течение 5 мин 0,20-ным раствором ауромина О, содержащим 1 г метабисульфита натрия (на 100 мл раствора).Процесс обработки микропрепарата завершают споласкиванием в 3 сменах дис1664011 Составитель Л.Стебаева,Техред М.Морге нтал Корректор И.Муска Редактор С.Рекова Заказ 568 Тираж Подписное ВНИИПИ...

Номер патента: 1789562

Опубликовано: 23.01.1993

Авторы: Белявская, Веревкина, Долгова, Закабунин, Ильичев, Красноборов, Петренко, Хрипин, Юдина

МПК: C12N 15/48

Метки: антигенными, белка, белок, вич, гибридный, днк, кодирующая, плазмидная, рекомбинатная, свойствами

...анализируют на наличие сайтов для эндонуклеэз рестрикции. Вд 11 иВаа Н 1, Структуру подтверждают секвенированием: полученную плазмидную ДНК, содержащую адапторный фрагмент, обозначают р 2 41. 1 мкг ДНКру 41 расщепляют эндонуклеазой рестрикции ЕсоЮ в течение часа в Я-буфере, После этого добавляют рестриктазу Вд( 1 и также инкубируют в течение часа при 37 С. Препарат депротеинизируют с помощью фенольной экстракции, ДНК осаждают этанолом и ресуспендируют в ТЕ- буфере,Фрагмент размером 98 н, и., содержащий промотор а -амилазы, ЯО-последовательность и расположенный от нее на расстоянии б нуклеотидных пар, инициирующий кодон, получают на смеси Есой - Яац ЗА фрагментов ДНК плаэмиды рЕМВ 303,Выделение индивидуального фрагмента проводят путем...

Номер патента: 1792429

Опубликовано: 30.01.1993

Авторы: Ворсанова, Юров, Яковлев

МПК: C12Q 1/68

Метки: 1-ой, ri-7, альфа, днк, маркирования, плазмидная, предназначенная, рекомбинантная, хромосомы, человека

...инкубацию 5 минут. Клизатудобавляют 1,5 мл 3 М ацетата натрия,осторожно перемешивают раствор и оставляют на час при 0 С. Образующийся осадок 55удаляют центрифугирова нием(1200 об/мин,),нуклеиновые кислоты из супернатантаосаждают 2,5 объемами этилового спирта(.18 С, 30 мин.), Осадок растворяют а 1 мл50 мМ трис-НО (рН 8,0) + ),1 М ацетата натрия и переосаждают этанолом. Процедуру переосаждения повторяют дважды, конечный осадок после аысушивания растворяют в 100 мкл ТЕ,Эндонуклеазную обработку ДНК человека и бактериальных плазмид проводят в буфере ВЕВ, содержащем 10 мМ трис-НС рН,4), 10 мМ М 9 О, 10 мМ йаС и 1 мМ дитиотреитола (РТТ). Полный эндонуклеазный гидролиз ДНК получается при относительной концентрации рестриктаз 5 - 8 ед/мкг ДНК...

Номер патента: 1792972

Опубликовано: 07.02.1993

Авторы: Евграфов, Поляков

МПК: C12Q 1/68

Метки: амплификации, днк, известной, неизвестной, некотором, последовательности, расположенного, расстоянии, фрагмента

...полимеразнойреакции, является значительно более деше-вым, простым и не требует дорогостоящегсоборудования,П р и м е р. Для проверки заявленного30 способа мы применили его к 5 концевойобласти гена дистрофина человека, последовательность которой была известна (рис.3).Были синтезированы олигонуклеиодит 35 ные праймеры следующей последовательности ДНК;первый 5 АТАТААО ОТТО ТО СТТССАС САТААСААО,второй - 5- 40 ОТО СО САООТССТООААТТТОАААТАТССОПри этом первый праймер мог гибридизоваться с участком ДНК между сдйтом рестрикции В 2 рестриктазы Мсо(сайт 749) и сайтом рестрикции Я 1 рестриктазы ЕсоВ45 (сайт 701) в нативной ДНК до обработкирестриктазами, и мог обеспечивать синтез ДНК в йаправлении сайтов рестрикции В 1 рестриктазы ЕсоВ (сайты 701 и...

Номер патента: 1794088

Опубликовано: 07.02.1993

Авторы: Ершов, Иванов, Лысов, Мирзабеков, Флорентьев, Хорлин, Храпко

МПК: C12N 15/00, C12Q 1/68

Метки: днк, нуклеотидной, последовательности

...ССАОТ)5 -б(ОТААААСОАСО ОО ССАОТ)с иммобилизованными в геле олигонуклео 55 тидами (длиной 7, 8, 9, 12 и 15 мономерныхзвеньев), полностью или частично комплементарными различным участкам гептадекамеров,Меченный фрагмент ДНК (0,1 мкКи, 30фмоль).в 1 мкл буфера гибридизации (1 Мчисло 7-, 8-, 9-, 12- и 15-членников, полностью или частично комплементарных праймеру М 13. а также дуплексов, содержащих другие типы мисматчей. Даннце по отмывкедуплексов гептадекадезоксинуклеотидов с иммобилизовэнными октадезоксинуклеотидами приведены в таблице.Как видно из фиг.З и таблицы, почтивсегда существует такая температура, прикоторой отношение гибридизационных сигналов полностью комплементарного и соответствующего дефектного дуплексадостаточно...

Номер патента: 1807081

Опубликовано: 07.04.1993

Авторы: Власов, Вуцан, Монахова, Седых

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: pes78vcs, pes78vcs-источник, бактерий, вибрионов, днк, еsснеriснiа, зонда, идентификации, плазмидная, плазмидной, продуцент, рекомбинантная, рекомбинантной, холерных, штамм

...отбирали по признакуАр Тес,Из 12 различных по размерам встроенных фрагментов ДНК вибриона рекомби 40 нантных плазмид (случайная выборка) спомощью эндонуклеазы Нпб В были получены соответствующие фрагменты и испытаны на видоспецифичность в качествемолекулярных зондов, Радиоактивную мет 45 ку (32 Р-АТР или 32 Р-СТРг. Ташкент, межреспубликанское объединение В/О"Изотоп") вводили с помощью ник-трансляции,Гибридизацию проводили на нитроцел 50 люлозных фильтрах после получения на нихотпечатков колоний Ч.стоегае 01 ине 01(150 штаммов), и 12 других видов рода Ч 1 Ьг 1 о(всего 37 штаммов), а также шигелл, сальмонелл, аэромонад, алломонад, псевдомонэд55 и Е,соИ (всего 25 штаммов) и их соответствующей обработки с использованием модифицированного...

Номер патента: 1809837

Опубликовано: 15.04.1993

Авторы: Дональд, Майкл, Тимоти

МПК: C12N 15/06

Метки: адгезии, гликопротеин, днк, кодирующей, межклеточной, плазмидной, рекомбинантной, рсдус

...СОМ 8, она демонстрируетналичие как зависимых от ЗСАМ, так инезависимых от 1 САМкомпонентов адгезии, зависящей от ЛФА. Трансфецированные клетки СОЯ инкубируют в покрытыхЛФАчашках Петри при наличии моноклональных антител 3 САМдля предотвращения выделения кодирующей ДНК ЗСАМ, 15Адгезированные клетки элюируют ЭДТА, аплазмиды выделяют и амплифицируют, После трех циклов трансфекции, адгезии, выделения плаэмиды и фракционирования поразмерам, 30 плазмид анализируют с использованием рестрикционной эндонуклеазы, Из трех плазмид со вставкой более 1,0тыс. пар оснований (т.п,о,) одна, введеннаяв клетки СОЯ посредством трансфекции,обуславливает адгезию по отношению к,25Л ФА.П р и м е р 2. Характеристика последовательности, кодирующей ДНК 3...

Номер патента: 1811538

Опубликовано: 23.04.1993

Авторы: Курепина, Метлицкая, Хмель

МПК: C12N 15/03, C12N 15/30, C12N 15/41 ...

Метки: днк, кодирующая, микроцина, плазмидная, рекомбинантная, синтез

...смеси 50 мкл (состав описан, выше) в 25течение 1 часа при 37 С. После обработкифенолом и переосаждения ДНК этаноломсмесь растворяют в БО мкл буФера, содержащего 6 аМ трис-НС рН 7,9,6 аМ МцСг, 150вМ 0;02 тритона Х 1 ОО, и инкубируют с 10 30ед, рестриктазы ВавН 1 час при 37 С.Фрагмент ДНК размером 5,3 т.п,н. элюируют после фракциоиирования злектрофорезом в.0,7% геле легкоплаакой агарозы, ДНКрастворяит в 10 мкл воды, , 353 мкл раствора ДНК линеаризомнойплазмиды рВВ 325 сливают с 10 мкл раствора фрагмента плазмиды р 1, содержащегогены синтеза микроцина, добавляют 1,5 мклбуфера (0,5 М трис-НС рН 7,9, 0,1 М МоСг, 400,1 М ОТТ, 1 гпМ АТР) и 1 мкл липазы иинкубируют 3 чзса при 16 С,,Плазмиду передают методом трансформации в клети штамма Е....

Номер патента: 1813089

Опубликовано: 30.04.1993

Авторы: Бударин, Волченскова, Кейсевич, Майданевич, Трохименко, Шалимов

МПК: A61K 31/295, C07F 15/00

Метки: активностью, днк, комплексного, обладающего, платины, противоопухолевой, соединения

...растворе и выделенных в твердом виде индивидуально или как смесь с йэС+йазСус, после растворения в ваде характеризуются максимальным поглощением Ямаков. = 266,2 нм, тогда как для свободной н-ДНК смаке. = 258,0 нм. Молекулярный коэффициент поглощения полиплатилленэ в расчете на моль нуклеотида, Е гбь,г= 10000 л см моль, а у н-ДНК - Е 25 з,о" 7000 л,моль см . Смещение максимума поглощения в длинновалнавую область на8,2 нм у полиплатиллена по сравнению с н-ДНК говорит о связывании макромолекулы с плэтйносодержащими группировками в результате образования ковалентных связей между ионом металла и данорными атомами азота оснований ДНК. Более высокая величина длинноволнового смещения УФ- максимума поглощения у полиплатиллена, Ь= 8,2 нм, по...

Номер патента: 1815273

Опубликовано: 15.05.1993

Авторы: Бабенко, Голубков, Князев, Максимишина, Никифорова, Плужникова, Серова, Суворов, Тотолян

МПК: C12N 15/12

Метки: hras=1, hrast, днк, железы, карциномы, кодирующая, конструирования, онкоген, плазмидная, рекомбинантная, человека, щитовидной

...НВАЯ 1 размером 6,7 т.п.н, и ДНК вектора рЯР 64, линеаризованного эндонуклеазой Ваа Н 1, лигировали с помощью ДНК-лигазы Е, соИ, Полученной рекомбинантной ДНК трансформировали компетентные клетки Е. соИ НВ 101, Колонии, устойчивые к ампициллину, дающие положительную гибридизацию с рЕ 1 пробой, отбирали, выделяли ДНК и характеризовали ее рестрикционным анализом. На фото.1 представлены результаты электрофореза, с помощью которого определены размеры плазмиды рНВАЗТЬ-З, вставки ДНК онкогена НВАЯ 1 человека (дорожка 2) и вектора рЯР 64 (дорожка 4). На фото,2 изображена схема рекомбинантной плазмидной ДНК рНВАЯТЬ-З, иллюстрирующая расположение вставки ДНК онкогена НВАЯ 1 человека в векторе рЯР 64, промотора фага ЯР 6, полилинкера фага М 13 и...

Номер патента: 1816797

Опубликовано: 23.05.1993

Авторы: Бобков, Гараев, Шуленин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48

Метки: антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, гибридного, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, конструирования, определяющая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рр1, свойствами, синтез, человека, штамм

...ДНК проводят методом равновесного центрифугирования в градиенте плотности СзС 1 с бромистым этидием (1 мкг/мл),Для получения плазмиды рР 1 фрагмент Н 1 пб 111 - Е.сой 1 плазмиды рйТЗ переклонируют в вектор рцй 290 по сайту Нпб 111, С этой целью 10 мкг ДНК плазмиды инкубируют с 30 ед. эндонуклеазы Е.соЯ в буфере, содержащем 100 мМ йаС 1, 10 тМ МдМ 12, 10 аМ трис-НС 1 рН 7,5, 1 щМ ДТТ, в течение 1 ч при 37 С. Затем добавляют 1/10 объема ЗМ ацетата йэ и осаждают ДНК 2,5 объемами этилового спирта на ценрифуге (10000 д, 10 мин, 4 С). Осадок высушивают и растворяют в буфере 10 мМ трис-НС 1 рН 8,0 и 5 мМ ЭДТА. Полученный препарат лигируют с 50 мМ адаптора Е.сой-Нпд 11 с помощью ДНК-лигазы фага Т 4 (30000 единиц/мл),из расчета 1 мкл...

Номер патента: 1825376

Опубликовано: 30.06.1993

Авторы: Акико, Мориюки, Сейга, Сусуму, Тамио

МПК: C12N 15/18, C12N 15/70

Метки: гормон, днк, днк,кодирующей, днк-фрагмент, кодирующий, конст-ния, лосося, плазмид, плазмидной, промежуточной, рекомбинантной, роста, содержащей

...экстрагируют смесью фенола с хлороформом и осаждают этанолом с получением 0,5 пмоля кДНК-вектора-затравки ДНК, связанной с (дЦ) цепями. Затем 0,08 пмоля ДНК и 0,16 пмоля упомянутой связующей ДНК добавляют к 40 мл раствора, содержащего 10 мМ трис-НС (рН 7,5), 0,1 М йаС и 1 мМ ЭДТА, и инкубируют при 65 С, 42 С и 0 С в течение соответственно 10, 25 и 30 мин. Реакционный раствор доводят до 400 мл (полный объем) раствора. содержащего 20 мМ трис-НС 1 (рН 7,5) 4 мМ МцС 12, 10 мМ (НН 4)2504, 0,1 М КС 1 и 0,1 мМ Р.НАД, К реакционному раствору добавляют 10 единиц ДНК-лигазы Езсег 1 сЬ 1 а со 11 и инкубируют в течение 1 сут при 11 С. Реакционный раствор доводят до раствора, содержащего 40 мкМ дНТФ и 0,15 мкМ /3-НАД. Затем добавляют пять единиц...

Номер патента: 1490963

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Беляев, Вторушина, Данилюк, Добрикова, Куличков, Малыгин, Мамаев, Матвеев, Плетнев, Прессман, Приходько, Путинцева, Синяков, Хромых, Шевлягина, Ямщиков

МПК: C12N 15/00

Метки: вакцины, днк, живой, клещевого, кодирующая, конструирования, плазмидная, полипептидов, против, р28сме, рекомбинантная, рекомбинантной, синтез, энцефалита

...Ввш Н 1 зндонуклеаз рестрикции, Из полученной таким образомплазмиды р 2823, содержащей правильно состыкованные 28 к промотор иструктурные гены ВКЭ, выделяют ВвпН 1 ЕсоК 1 фрагмент ДНК длиной 2304 п.о,Фрагмент состоит из ВапН 1-НдпйШфрагмента ДНК плвзмиды рВК 322 длиной 346 п.о., НпйП 1-ЕсоК 1 синтетического Фрагмента ДНК длиной74 п.о, и ЕсоК 1-ЕсоК 1 фрагментаДНК длиной 1784 и.о содержащегогены ВКЭ, Для окружения промотораи генов ВКЭ участками ТК-геня ВОВвыделенный ВвшН 1-ЕсоКЕ Фрвгмент лигируют с большии ВвпН 1-ЕсоК 1 фрагментом ДНК вектора р ЧАК 15 и лигазной смесью трансФормируют компвтентные клетки Е. со 11. НВ 101. Искомые клоны идентифицирует методомДНК - ДНК гибридизации на Р-мечез 2ный Рьс 1-РвС 1 фрагмент к ДНК ВКЭ,Наличие в...

Номер патента: 1515696

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Аммосов, Бакланов, Беляев, Дмитриев, Матвеев, Миронова, Плетнев, Прессман, Путинцева, Шевлягина

МПК: C12N 15/00

Метки: 11сме, антигенов, вирусов, гепатита, днк, клещевого, конструирования, обеспечивающая, одновременную, плазмидная, рекомбинантная, экспрессию, энцефалита

...при 37 С в течение 1 ч, после чего выделяют ВащН 1-ЕсоК 1 - Фрагмент ДНК длиной 5723 п,о., соответствующий по электрофоретической подвижности в 073 агароэном геле линейной Форме плаэмиды р 7,58.Из плаэмиды р 311 выделяют ВалН 1 - ЕсоК 1 - фрагмент ДНК длиной 2682 п,о содержащий С, М, Е гены вируса клеще" вого энцефалита, состыкованные с 11 к промотором и клонируют его в Вап Н 1 - ЕсоК 1 линеаризованной плазмиде р 758Клон, содержащий в составе вектора рЧАК 15 как ген НВаАВ (Ваи 111 фрагмент 1279 п.о.), так и состыкованные с 11 к промотором С, М, Е гены (ВаН 1 - ЕсоКТ Фрагмент 262 п.о,) обозначили р 7,55 11 СИЕ.ДНК ппазмиды р 758 11 СИЕ используют для трансформации клеток почек зеленой мартышки СУ, зараненных вирусом осповакцины штамма...