Патенты с меткой «конструирования»

Номер патента: 1640164

Опубликовано: 07.04.1991

Авторы: Микрюков, Приходько, Серпинский, Урманов, Чижиков

МПК: C12N 15/79

Метки: 1285, векторная, вируса, геном, днк, интеграции, конструирования, осповакцины, плазмидная, предназначенная, ртк, фрагмента, чужеродного

...1 х НВ 101 проводятотбор колоний фенотипа "Ар Тс и рестрикционный анализ плазмидных ДНК(рВКНК)П р и м е р 3. Рекомбинантныеплазмидные ДНК рТК 108, рТК 1567,рТК 1238 и РТК 1285Плазмидную ДНК рВКНК подвергаютгидролизу эндонуклеазой рестрикцииРчц 11 в стандартных Условиях и сшивают ДНК-лигазой фага Т 4 по примеруЛигаэной смесью трансформируют компетентные клетки штавща Е.со 1 НВ 101и отбирают колонии, содержащие рекомбинантные плазмиды с Нпй 111 - Рсщ 1150фрагментом ДНК длиной 1708 н.п,(рТК 1708).Плазмидную ДНК рТК 1708 расщепляют последовательно рестриктазамиНЫЙ 111 и ХЬа 1, выделяют большийфрагмент ДНК, который инкубируют снуклеаэой З 1 по примеру 1. Затем пре парат ДНК сшивают ДНК-лигазой фагаТ 4 и проводят трансформацию компе 64...

Номер патента: 1554382

Опубликовано: 07.05.1991

Авторы: Данилюк, Серпинский, Синяков, Урманова

МПК: C12N 15/00

Метки: гена, интерлейкина-2, конструирования, человека

...5-8 0 клеток;,тиосфере 5 Х СО 0,25 мкКи зН-тииидина вводят в реакционную смесь н тер.мостатируют еще 4 ч в тех ае услови"ях. Клетки собираются на фильтре"М 1111 роге" (0,45 икм), промывают0,01 М КБРО (рН 7,5) с О, М йаС 1Количество включенного ЗН-тимидинаизмеряют по Черенкову, используютсчетчик МагЫ 1 П.Лизаты клеток Е.со 11 ЮИ 83, содераащие рРХ 1 Ь, достоверно вызывают пролиферацию мышиных лимфоцнтов, т,е, обладают активностью 1 Ь, Полученныеданные свидетельствуют о биологической полноценности синтезированногогена человеческого 1 Ь,Предлоаеннцй способ получения гена1 Ьимеет существенные преимущества, Вследствие применения на.стадииполучения субфрагиектов длинных частичнб коиплеиентарнцх полинуклеотидови использования...

Номер патента: 1650698

Опубликовано: 23.05.1991

Авторы: Забаровский, Киселев, Турина

МПК: C12N 15/63

Метки: библиотек, вектор, геномных, конструирования, фаговый

...0,7 о -нойлегкоплавкой агарозе (препарат А), ДН К фага ЛдЕЯ 7 гидролизуют рестриктазой Вав и"плечи" очищают гель-электрофореэом влегкоплавкой агарозе (препарат Б). Препа 35 раты А и Б в эквимолярных соотношенияхсмешивают и лигируют. Лигированную ДН Купаковывают в белки фага А 1 п и 1 тго и полученные фаговые частицы рассевают на газон клеток Е.соП; штаммЕ 392. Из шести40 бляшек наращивают фаг, выделяют ДНК ианализируют с помощью рестриктаз ЕсоВ 1,Вав 1 и Яаб. Один из фагов, названный ЯЯК 9,имеет ожидаемую структуру и используетсядля конструирования репрезентативных ге 45 номных библиотек,Применение МЯК 9. Фаг ЯЯК 9 удобен дляполучения репрезентативных геномныхбиблиотек по "классической" методике.ДНК фага МЯК 9 гидролизуют 10-кратными...

Номер патента: 1650699

Опубликовано: 23.05.1991

Авторы: Забаровский, Загорская, Киселев

МПК: C12N 15/63

Метки: библиотек, вектор, генов, днк, замещения, конструирования, структурных, фаговый

...липких концов и конструирование библиотек без применения метилаз, К кДНК 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 пришиваются линкерь; за 1 (или Х 1 а 1) без предварительной обработки метилазай. Г 1 аскольку рестриктаза зз 1 щепит эукариатическую ДНК редко (один участок узнавания на 50 т.п,н.) и преимущественно в регуляторных областях, которые не представлены в кДНК, то последующий гидролиз кДНК рестриктазой за 1 не приведет к существенному изменению размеров кДНК. После инактивации фермента проводят в соответствующей инкубационной среде частичную достройку липких концов ДНК фрагментом Кленова (или ревертазой) в присутствии г СТР и 0 ТТР. ДНК 15 К 15 гидрализуют рестриктазами Есой 1 и Вап 1 1 и затем проводят частичную достройку липких концов...

Номер патента: 1677059

Опубликовано: 15.09.1991

Авторы: Мишанкин, Подладчикова

МПК: C12N 15/31

Метки: бактерий, возбудителя, днк, еsснеriснiа, зонда, идентификации, источник, конструирования, плазмидная, плазмиды, продуцент, рекомбинантная, рекомбинантной, чумы, штамм

...геле,Лигазной смесью (1/10 ч) трансформируют штамм Е.со. После трансформации культуру высеивают на агаризованную средуВ, содержащую 50 мкг/мл ампицилли 1677059на, 40 мкг/мл индикатора Р -галактозидазной активности Хца 1 и 240 мкг/мл индуктора 3-галактозидазы ИПТГ (изопропил- /3-Д-тиогалактопиранозид). Через 14 - 20 ч на чашках вырастают колонии трансформантов. Рекомбинантные клоны отбирают по отсутствию Р -галактозицазной аос, поскольку у них нарушается способность синтезировать Р-галактозидазу из-за сдвига рамки считывания фермента при встраивании в векторную плазмиду фрагмента ДНК длиной 280 п.,о.Из клеток рекомбинантных клонов была выделена плазмидная ДНК, Анализ плаэмидных ДНК осуществляют с помощью рестриктаз Мзр 1 и Есой 1....

Номер патента: 1505022

Опубликовано: 15.10.1991

Авторы: Ильина, Ливанова, Смирнов, Смирнова

МПК: C12N 15/00

Метки: viвriо, бактерий, в-субъединицы, днк, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, р1емз, рекомбинантная, синтез, сноlеrае, субъединицы, токсина, холерного, штамм

...инкубируот 18 ч гГи 37 С, В каче-. зеконтроля используют исходный штамм /, 1505022С 1)01 егае С 197 сегрупп д )акже )/ эгилбензтидзолин-сульфанд. Через 30с 1)оегде 569 В н качестве этдл.,с ого штал 1- мин экспозиции при комнаной тепеГ)д)ума - продуцента холерного то:синд. ре при постоянном встряхивании измеряютКолонии штаммов С 197, КМ 93 и 569 В оптическу 0 плотность раствора при 405 нмпереносят методом реплик на чашки с 1%- 5 Чувствительность метода в данной серииным отмытым синкдзным дгаром, содержа- опытов составляет 1 нг, В соответствии сощим 1/ отмытых в синкдз Ом бульоне установленной чунс)вигР. ьностью и ГооФ%эритроциее бард д;"осРГ)ы инкубируст 13 с етом числя ныро ших о процессе культи 011) 39 С )дл, еают ггое 10,5;, СинказнО-...

Номер патента: 1703692

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Алексенко, Болотин, Борухов, Бумялис, Гервинскас, Дебабов, Евдонина, Изотова, Козлов, Костров, Лапидус, Лебедева, Лившиц, Машко, Мочульский, Носовская, Плотникова, Подковыров, Рыжавская, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Трухан, Юрин, Янулайтис

МПК: C12N 1/21, C12N 15/23, C12P 21/00 ...

Метки: 1-13, i-интерферона, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерферона, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, фибробластного, человека, штамм

...в 20 мкл -20, 4 мкг полученного таким образом препарата ДНК обрабатывают Кленовским фрагментом ДНК-полимеразы 1 Е.со в указанных условиях для достройки возможно имеющихся одноцепочечных концов молекул до двухцепочечных. Реакцию останавливают фенольной депротеинизацией, нуклеиновые кислоты осаждают этанолом и растворяют в 20 мкл Н 20,Лигирование линейных молекул ДНК с двуцепочечными концами проводят при 16 С в пробе объемом 50 мкл, содержащей 60 мМ трис-НС, рН 7,6, 10 мМ М 9 С 2, 10 мМ дитиотреитол, 4 мМ АТФ, 8 -ный полиэтиленгликоль - 6000, 4 мкг ДНК, 100 ед, ДНК- лигазы Т 4. После завершения реакции пробу разбавляют водой в четыре раза и проводят осаждение нуклеиновых кислот этанолом, 2 мкг растворенной в Н 20 ДНК обрабатывают...

Номер патента: 1703693

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Авот, Грен, Дебабов, Козлов, Косиков, Костров, Мазель, Машко, Мочульский, Носовская, Романчикова, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Трухан, Циманис, Черновская, Юрин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: 2-19, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...ДНК длиной =750 п.нвырезает и проводят элюцию ДНК. Для достройки о,;ноцепочечных концов ДНК с помощью Кленовского фрагмента ДНК-полимеразы 1 Е со, выделенный из геля фрагмент обоа;э; .пгают в пробе объемом 20 мкл, содер,кэ.,ей 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 10 мМ МдС 1:, по ЗО мкМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов Реакцию останавливают прогреванием, ДНК из смеси переосаждают этанолом и растворяют в 20 мкл,Полученный препарат фрагмента плазмиды рАА 1213-23 В используют на дальнейших этапах конструирования для интеграции кодирующей части интерлейкиначеловека в векторную плазмиду рВВ 124 В.3 мкг ДНК плазмиды рВВ 124 В расщепляют рестриктазой ВагпН в пробе обьемс . 12 мкл, содержащей буфер для рестрикци:- Реакцию останавливают фенольной...

Номер патента: 1707078

Опубликовано: 23.01.1992

Авторы: Амосова, Болдырева, Добрынин, Коробко, Филиппов

МПК: C12N 15/12, C12N 15/21

Метки: бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, плазмидная, полипептид, продукт, промежуточный, рекомбинантная, ртну12, ртнуз14, свойствами, тимозина, человека, штамм

...ауо Гача т М; - .и. Э УГ эез :. 1 ан,леатдсд дып а якт . даг д- а знык ", ос 4 дамидитн ьнл методомпПОН. С 1 Чд 1 а УУИн; - , д эп;.;-ь 1 ечат 3- . - -,д 5 гч .".щью защ;щ чы,, , тПЬ, дхтр 1 та з пил 2 азси ул с: д, п 1:асед 1 ЗОПРОП,ГатУлича)-фаСФ 1 ТОВ Эт. В 1 Раданы тетрээплал С 1 уев предадет е масшта бе 0 5.0 7 мл 1 агь 1.п;,;ь уя в каче;тве час егя посистпа стеа (газмрр пар 500 А, размер частиц 40-8; лл) отаоол 1 у через13 .суцичатчу и связь гри-оед няют перваа нулеаз 1 д аа звечп 111 эгрузка 20 -.лсль, 11 с па "ьз уат "итрасотар м паг,е рад 1ач тенг э ииВедает ПраЫЬу .а ЛЬ СмрСЬ" ТЕТРИС ИД гафуран - пиридич - дода 5 3 2) После -о чания синтеза защитные гр)псы удаляют последовательной обработкой тиофено- ЛЯтаМ то 11 зт 1 Лаь...

Номер патента: 1708848

Опубликовано: 30.01.1992

Авторы: Бобков, Бобкова, Гараев, Казеннова, Колот

МПК: C12N 15/48, C12N 15/70

Метки: pga9, антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, первого, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, свойствами, синтез, типа, человека, штамм

...ген устойчивости к канамицину, и раг-участок СоА выделяют из плазмиды рАК 25. Для этого рАК 25 подвергают гидролизу рестриктазой Е,сой 1, ин кубируя 20 мкг ДН К рАК 25 с 20 ед, 10 фермента в присутствии 50 мМ МаС 3, 10 мММцС 32 10 мМ трис-НС 3, рН 7,5, 1 мМ ДТТ в течение 2 ч г.ри 37 С с последующим прогреванием при 75 С в течение 15 мии. Далее гидрслизовзииую ДНК разделяют в 0,8% 15 дгзрозном геле и выделяют нужный фрагмент ДНК, используя бумагу ДЕ 81.В качестве вектора используют плазмиду р 630, полученную следующим образом.Клетки бактерий Е.со 3 НВ 101, содержа щие плазмидную ДНК рОВ 290 выращиваютв 200 мл бульона до титра 1 х 10 клеток/мл. Клетки осаждают центрифугирсванием(5000 ц,5 мии,4 С) и ресуспендируют в 35 мл раствора,...

Номер патента: 1713930

Опубликовано: 23.02.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Лосева, Озолс, Осе, Петровский, Пумпен, Пушко, Цибиногин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: 1-55, аминокислот, бактерий, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, концевых, кор-антигенвируса, лишенный, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, штамм, экспонированным, эпитопом

...и инкубируют 30 мин при . 4 С, Лизат осветляют центрифугированием 30(10 000 д, 4 С, центрифуга). НВс Ад Ь - рге 52 (1-55) очищают следующим образом, Ли. зат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВс Ад Ь - рге 52 (1-55) собирают в осадке, полученном при 30% 35 насыщения. сульфатом аммония. Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0;0,15 М йаС, 0,1 тритоне Х 100 до конечйой концентрации белка 25-50 мг/мли 6-7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефа-. 40 розой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную .тем же буфером, но без тритона Х 100, Фрак- ции. проявляющие НВсАд-активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентриро вания переосаждением 50%-ным сульфатом аммония.Определение...

Номер патента: 1586193

Опубликовано: 23.02.1992

Авторы: Попов, Шишкина

МПК: C12N 15/00

Метки: pfra, бактерий, днк, еsснеriснiа, зонд, зонда, идентификации, конструирования, микроба,несущих, плазмидная, плазмиду, продуцент, рекомбинантная, чумного, штамм, штаммов

...Т 1 ЦК Д и Цц ИТа 1 М 1 Ц с Ус 1"ного микроба, депонирован п музее жи 5вьх культур ВНИПГ 1 И "Микроб под номером КМ,Способы получения рекоибццацтцыхплазмидцых ЛНК серии рВБ иллюстри, -руется примером,П р и м е р . Конструировациерекомб 13 нднтнай плаэмиды рВБ 2 и получение штамма Е,со 1 Г К- пропуцецтдзонда для идентификации штаммав чумного микроба, садерждцих плаэмиду,Л, Выделение ДНК рРка из штамма1,ревс 1 з А 1122 (рЕка+) и Д(К векторных плаэмид рВК 327 и рВК 322 иэ 1 тама Е,со 11 С 600. 20Клетки бактерий выр 3 гигдют в бульоне 1.В (рН 7,2) с аэрацией в течениеночи при 28 С (клетки бактерий 1.резьс 1 в или 37 С Е,со 11). Для амплифцкации ДНК векторных плаэмид клетки . 25бактерий Е.са 13. обрабатывают хлорамфениколом 20 лкг/мл с...

Номер патента: 1717633

Опубликовано: 07.03.1992

Авторы: Баев, Болотин, Вольфович, Дебабов, Йомантас, Козлов, Народицкая, Орлова, Попов, Рябченко, Сорокин, Стеркин, Стронгин

МПК: C12N 15/18

Метки: bacillus, suвтilis, альфа-амилазы, бактерий, днк, кодирующий, конструирования, продуцент, синтез, фрагмент, штамм

...ТемпераДНК А Ч произведена оптимальная под- турный оптимум для а-амилазы, кодируе.стыковкапоследовательностиДНК,кодиру- мой фрагментом ДНК А 1.Ч, составляет5 10 15 20 30 40 45 50 55 75-85"С. Меньшая продуктивность штамма, синтезирующего термостабильную а -амилазу связана с меньшей удельной активностью термостабильного белка из В.ИсЬепИогглз. измеренной в неоптимальных условиях (37 С).Б р и м е р 1, Конструирование фрагмента ДНК АУ/7, кодирующего синтез термостабильной а -амилазы,Клетки бактерий В.мЬИз (рЧ 31), содержащие плазмидную ДНК рЧЯ 1, выращивают в 10 мл 1-бульона (триптон 10 г/л; дрожжевой экстракт 5 г/л; ЙаС 10 г/л; рН 7,5) с добавлением эзоитромицина (0,02 мг/мл) до титра 1 х 10 кл/мл, Клетки осаждают центрифугированием...

Номер патента: 1739854

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Брайан, Нилс, Сау-Чи, Хармут

МПК: C12N 15/12

Метки: днк, зимоген, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, человека

...хранятся под Р АТСС. СКЬ 9595. Клетки 293 выращивают в минимальной среде Игла с 103-.ной термоинактивированной лощадиной сывороткой прио37 С Гсреду меняют дважды в неделю).Среда состоит из Э МЕМ с 107 теля-.чьей сыворотки, 50 мкг/мл ентамицина 10 и 10 мкг/мл Агнца МЕРНУТОИ фитандиона витамина К 1, Клетки субкультивируют удалением среды, промывают раствором Хенка, прибавляют 0,257.-ныйтрипсин Гсодержащий 0,2 г/л ЭДТА) 15 на 1-2 мин, промывают свежей средой,отсасывают и распределяют в новыесосуды с отношением субкультивирования 1:5 или 1:10.За 1 день перед трансформированиемклетки высевают в количестве 0,х 10 бклеток на 100 мм чашку Петри, Стерильную, осажденную этанолом плазмиду ,ДНК растворяют в ТЕ-буфере и используютдля получения...

Номер патента: 1739856

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52

Метки: деацетоксицефалоспорин, днк, кодирующей, конструирования, плазмидной, рекомбинантной, синтетазу, синтетазудеацетилцефалоспорин, фермент

...связуйщей 5 молекулы обрабатывают Т 4 ДНК"кинаэойи затем аннелируют с.образованиемнеповрежденной связуюцей молекулы.1 мкл гидролизованной Ваш Н 1 ДНКплазмиды рМЬС 12 лигируют с 4 мкл 1 О Бсо 1 - Нсо 1 фрагмента плазмидырЬС 1 и 10 мкл аннелированной связующей молекулы.Лигазной смесью трансформируютЕ.со 1 Аликвоты трансформированной 15 клеточной смеси вжевают на чашкахс Ь-агаром, содержащим 25 мкг/млхлорамфеникола, 40 мкг/мл Х-да 1.и40 хмкг/мл 1 РТС. Чашки инкубируютнри 37 С в течение ночи. Колонии,окоторые содержат плазмиду беэ вставки, такие как Е.со 1 К 12 М 109//рМЬС 12, проявляют синий цвет наэтих чашках. Колонии, которые содержат плазмиду с вставкой, такие какЕ.со 11 К 12 1 М 109/рРБ 53, проявляютбелый цвет на этих чашках,...

Номер патента: 1740418

Опубликовано: 15.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Лосева, Озолс, Осе, Пумпен, Пушко, Цибиногин

МПК: C12N 15/10, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: pgcs1-39, s1(20-68, аминокислот, бактерии, вируса, гепатита, днк, конструирования, кор-антиг, плазмидная, поверхности, продуцент, рекомбинантная, с-концевых, штамм, экспонированным, эпитопом

...30 мин при 4 С. Лизат осветляют центрифугированием (10 000 хд, 4 С), НВсАд Л-ргеЯ(20-68) очищают следующим образом. Лизат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВсАд Ь-ргеЯ(20-68) собирают в осадке, полученном при 300 насыщения сульфатом аммония, Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0, 0,15 йаС, 0,1 отритоне Х 100 до конечной концентрации белка 25 - 50 мкг/мл, и 6 - 7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефарозой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х 100. Фракции, проявляющие НВсАд-активность собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50% сульфатом аммония,3, Определение НВсАд-активности методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью...

Номер патента: 1742331

Опубликовано: 23.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Озолс, Осе, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: 51-3, 56-103, антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, кор, крупного, лейкоза, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, рогатого, скота, экспонированным, эпитопом

...разбавляют в 4 раза дистиллированной водой и подвергаютф ра кциони рован и ю сульфатом аммония. 20Н ВсАд Ь - ВО/др 51(56 - 103) собирают восадке, полученном при 30 насыщениясульфатом аммония. Осадок растворяют в0,05 М трис-НС 1, рН 8,0, 0.15 М йаО, 0,1тритоне Хдо конечной концентрации .25белка 25 - 50 мг/мл, и 2 - 4 мл этого раствора наносят на колонку с сефарозой (1,6 х 100см), уравновешенную тем же буфером, нобез тритона Х. Фракции, проявляющиеНВсАд-активность, собирают и используют 30либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-нымсульфатом аммония,П р и м е р 3. Определение НВсАд-активности методом РИД. 35Титр НВсАд определяют с помощью радиальной иммунодиффузии по Ухтерлони,Для этого готовят двухкратные...

Номер патента: 1744110

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 1/21, C12N 15/33, C12N 15/70 ...

Метки: frblv, бактерий, бактериофага, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, оболочки, плазмидная, прод, рекомбинантная, рогатого, скота, слитый, штамм

...50 мМ трис-НС, рН 7,5; 10 мММдС 2, 10 мМ дитиотрейтол, 50 Ы АТР и 10ед, Т 4 ДНК-лигазы, в течение 12 ч при 4 С,Фрагмент инактивируют нагреванием при650 С в течение 15 мин, К реакционной смесидобавляют 100 мкл клеток Е,соИ ВВ 1, обработанных 100 мМ СаС 2 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл), длятрансформации клеток,Отбор клонов осуществляют путем экспресс - выделения ДНК и ее рестрикционного анализа, а также секвенирования.Плазмида с ожидаемой последовательностью получает наименование рГРВ Ч-Р 6,Конструирование рекомбинантнойплазмидной ДНК рЕРВ ЧзР 6,2 мкг плазмиды рРРВ Ч-Г 6, выделенной стандартным методом, расщепляют 3.ед, растриктазы Есо 781 и 3 ед, рестриктазыЗзр 1 в 25 мкл раствора А, содержащего100 мМ трис-НС, рН 7,5; 50 мМ...

Номер патента: 1751206

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Булгакова, Попов

МПК: C12N 15/12

Метки: yersinia, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, реsтis, рек, рекомбинантная, фибринолизин, фибринолизина, штамм

...и подсушивают, Осадок растворяют в буфере для лигировдния (0,066 М трис-НС 1, рН 7,5; 5 мМ МЫС 2, 5 мМ дитиотрейтола и 1 мМ АТФ) с добавлением ДНК лигэзы фага Т(5 ед). Лигировдние проводят 10-12 ч при 16 С.1751206В, Анализ рекомбиыантыых плазмид и форм (ЗДТА) лиэоцим, Обломки клетоквыделение клона, несущего рекомбинанг- осаждают. Супернэтант, содержащийагоную плаэмиду рЕК 4, вые частицы, используют для заражения.Полученную смесь ДНК испольэуютдля Культуру Е, соИ К 802 (110 кл/мл) сметрвнсформации клеток Е. соИ К 802. Транс шиваот с 0,1 мл фаголиэата и инкубируот 1формировайные клетки подраи 1 иваот 1 чэс ч при 28 С, полученную смесь разводятв бульоне СВ и высевают на агэризировэн-бульоном 1.В в 10 раз и 0,1 мл высевают наную среду 1,В с...

Номер патента: 1751208

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Бреде, Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: pfrblv, бактерий, бактериофага, белка, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, обо, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рогатого, скота, штамм

...при фильтрыинкубируютсмоноклональны 65 С. После очистки ДНК В 9 И 1 - ВагпН фраг- ми анти- др 51 антителами глАК 14 в развемента на агарозном геле ДНК растворяют в дении 1:500 на буфере ТВЯ, содержащем20 мкл воды, Заполнейие концов проводят 55 50 мМ трис-НС 1, рН 7,5, 0,15 М МаС 1, 0,1%в 100 мкл раствора Б, содержащего 0,05 М тритон Х 100, 1% БСА, в течение 15 ч притрис-НС 1, рН 7,5, 0,01 М 9 С 12, 0,01 М дитиот С, После трехкратной отмывки буферомрейтол,0,025 М МаС 1, 100 мкМ сАТР, ОСТР, ТВЯ фильтры инкубируют 2 ч при 200 С снТТ 1- и ОСТР и 10 ед, ДНК-полимеразы Е. коньюгатом пероксидазы с антителами просоИ (фрагмент Кленова, в течение 1 ч при тив иммуноглобулинов мыши в разведении1:500. Фильтры отмывают буфером ТВЯ (3 - но. Иньекции...

Номер патента: 1751210

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстманн, Пумпен, Пушко, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/48, C12N 15/51, C12N 5/10 ...

Метки: 41-22, антиген, бакт, белка, вируса, гепатита, днк, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, кор, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, фрагментом, человека, штамм, экспонированным

...С 1 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х. Фракции, проявляющие РВсАд - активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-ным сульфатом аммония.3. Определение НВсАд - активности Методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью рэдиал ьной иммунодиффузии (Р ИД), Дл я этого готовят двукратные серийные разведения клеточного лизата и титруют против анти-НВс антител человека, В качестве 510 стандарта используют очищенный НВсАд, полученный из рекомбинантных бактерий (1 мг/мл). Результаты титрования методом х 0,75 мм, Злектрофорез проводят в теЗО чение 15 ч при силе тока 7 мА. После злектрофореэа белки переносят нэ нитроцеллюлозные фильтры, инкубируют с моноклональными...

Номер патента: 1761805

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Данилюк, Кравченко, Кьамынина, Сандахчиев, Синяков

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: pil-221, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкин-2, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, человеческий, человеческого, штамм

...ДНК-полимеразы (фрагмент Кленова) и выдерживают еще 10 мин при 10 С. 10мкл смеси используют для трансформациикомпетентных клеток Е.со 3 М 10 . Из колоний, имеющих фенотип Ар, Тс, выделяютплазмидную ДНК, обозначенную рВ, ипроводят Маги (Есор -ЯаО )-рестрикционный анализ, Правильность структуры нуклеотидов в области сайтов Есори ЯаОподтверждают методом Максама-Гилберта.П р и м е р 2, Конструирование рекомбинантной плазмиды рВ 1:2,20 мкг репликативной формы ДНК фагаМ 1 з гра гидролизуют в 100 мкл буфера 2 50ед, рестриктазы Есор1 ч при 37 С. Есор-Есор-фрагмент (198 п,о,) выделяют в 6%ПААГ,1 мкг ДНК плазмиды рВ -2 гидролизуют в 20 мкл буфера 2 рестриктазой Есогвописанных выше условиях, Смесь 0,25пкмоль линейной формы рВ:2,пкмоль(Есор -Есор...

Номер патента: 1768639

Опубликовано: 15.10.1992

Авторы: Каримова, Михайлова, Панферцев, Степаншина, Черепанов

МПК: C12N 15/31

Метки: g824, j-антиген, j-антигена, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, микроба, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, чумного, штамм

...100 мкг/мл,Из сконструированного таким образом банка генов У.ремз отбирают клон, дающий положительную реакцию диффузионной преципитации с моновалентной анти- сывороткой (4), Рекомбинантная плазмидная ДНК, выделенная из этого клона, получает наименование р 67 (фиг. 1),Рекомбинантную плазмидную ДНК р 07 используют в качестве донора при создании плазмиды р 682. В качестве вектора при этом используют предварительно созданную плазмиду рР - делеционнь 1 й вариант малой плазмиды рРа 1 У,резбв, в которой фрагмент ЕсоВ - Нпб заменен на фрагмент ДНК, кодирующий ген сас (устойчивости к хлорамфениколу) из плазмиды рВВ 325, 1 мкг ДНК плазмиды р 67 смешивают с 1 мкг ДНК плазмиды рР 1 и инкубируют с рестриктазой Крп (5 ед.) в буфере 1 (трис-НС....

Номер патента: 1780542

Опубликовано: 07.12.1992

Авторы: Поль, Стефен, Сьюллен, Томас

МПК: C12N 15/52, C12N 15/80

Метки: активностью, асrемоniuм, днк, изопенициллин-n-синтетазу, изопенициллин-n-синтетазы, кодирующей, конструирования, обладающего, плазмидной, рекомбинантной, сернаlоsроriuм, штамма

...3,7 ХааРестрикцибуфера и 85 мкл Н 20. Около 5 мкл (50 еди онного фрагмента получают и суспендир ютниц) рестрикционного фермента Н 1 пб - И 1 в 10 мкл Н 20.добавляют к раствору ДНК и полученный В, Окончательное конструированиераствор инкубируют при 37 С в течение 2 ч. плэзмид РРЯ 30 и РРЯ 30,1.Н 1 пб- расщепленную плазмиднуюРРЯ 21 А ДНК помещают на 1 агарозный 40 . Около 1 мкг плэз ДНКг плэзмиднои Д растворягель и проводят электрофорез до тех пор, ют в 2 мкл 10 Х Хмкл аа рестрикционного буфеН 1 пб - И 1пока. 3,45 кв, 3,16 кв, 1,2 кви 69 кв ра и 6 мкл Н О. 0 2и - рестрикционные фрагменты не ста- рестрикционного фермента Хаа 1 добавляновятся четко выделенными на геле. Выде- ют к раствор " ДЙКляют Н 1 пб - И 1ляют и - рестрикционный...

Номер патента: 1815273

Опубликовано: 15.05.1993

Авторы: Бабенко, Голубков, Князев, Максимишина, Никифорова, Плужникова, Серова, Суворов, Тотолян

МПК: C12N 15/12

Метки: hras=1, hrast, днк, железы, карциномы, кодирующая, конструирования, онкоген, плазмидная, рекомбинантная, человека, щитовидной

...НВАЯ 1 размером 6,7 т.п.н, и ДНК вектора рЯР 64, линеаризованного эндонуклеазой Ваа Н 1, лигировали с помощью ДНК-лигазы Е, соИ, Полученной рекомбинантной ДНК трансформировали компетентные клетки Е. соИ НВ 101, Колонии, устойчивые к ампициллину, дающие положительную гибридизацию с рЕ 1 пробой, отбирали, выделяли ДНК и характеризовали ее рестрикционным анализом. На фото.1 представлены результаты электрофореза, с помощью которого определены размеры плазмиды рНВАЗТЬ-З, вставки ДНК онкогена НВАЯ 1 человека (дорожка 2) и вектора рЯР 64 (дорожка 4). На фото,2 изображена схема рекомбинантной плазмидной ДНК рНВАЯТЬ-З, иллюстрирующая расположение вставки ДНК онкогена НВАЯ 1 человека в векторе рЯР 64, промотора фага ЯР 6, полилинкера фага М 13 и...

Номер патента: 1816797

Опубликовано: 23.05.1993

Авторы: Бобков, Гараев, Шуленин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48

Метки: антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, гибридного, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, конструирования, определяющая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рр1, свойствами, синтез, человека, штамм

...ДНК проводят методом равновесного центрифугирования в градиенте плотности СзС 1 с бромистым этидием (1 мкг/мл),Для получения плазмиды рР 1 фрагмент Н 1 пб 111 - Е.сой 1 плазмиды рйТЗ переклонируют в вектор рцй 290 по сайту Нпб 111, С этой целью 10 мкг ДНК плазмиды инкубируют с 30 ед. эндонуклеазы Е.соЯ в буфере, содержащем 100 мМ йаС 1, 10 тМ МдМ 12, 10 аМ трис-НС 1 рН 7,5, 1 щМ ДТТ, в течение 1 ч при 37 С. Затем добавляют 1/10 объема ЗМ ацетата йэ и осаждают ДНК 2,5 объемами этилового спирта на ценрифуге (10000 д, 10 мин, 4 С). Осадок высушивают и растворяют в буфере 10 мМ трис-НС 1 рН 8,0 и 5 мМ ЭДТА. Полученный препарат лигируют с 50 мМ адаптора Е.сой-Нпд 11 с помощью ДНК-лигазы фага Т 4 (30000 единиц/мл),из расчета 1 мкл...

Номер патента: 1490963

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Беляев, Вторушина, Данилюк, Добрикова, Куличков, Малыгин, Мамаев, Матвеев, Плетнев, Прессман, Приходько, Путинцева, Синяков, Хромых, Шевлягина, Ямщиков

МПК: C12N 15/00

Метки: вакцины, днк, живой, клещевого, кодирующая, конструирования, плазмидная, полипептидов, против, р28сме, рекомбинантная, рекомбинантной, синтез, энцефалита

...Ввш Н 1 зндонуклеаз рестрикции, Из полученной таким образомплазмиды р 2823, содержащей правильно состыкованные 28 к промотор иструктурные гены ВКЭ, выделяют ВвпН 1 ЕсоК 1 фрагмент ДНК длиной 2304 п.о,Фрагмент состоит из ВапН 1-НдпйШфрагмента ДНК плвзмиды рВК 322 длиной 346 п.о., НпйП 1-ЕсоК 1 синтетического Фрагмента ДНК длиной74 п.о, и ЕсоК 1-ЕсоК 1 фрагментаДНК длиной 1784 и.о содержащегогены ВКЭ, Для окружения промотораи генов ВКЭ участками ТК-геня ВОВвыделенный ВвшН 1-ЕсоКЕ Фрвгмент лигируют с большии ВвпН 1-ЕсоК 1 фрагментом ДНК вектора р ЧАК 15 и лигазной смесью трансФормируют компвтентные клетки Е. со 11. НВ 101. Искомые клоны идентифицирует методомДНК - ДНК гибридизации на Р-мечез 2ный Рьс 1-РвС 1 фрагмент к ДНК ВКЭ,Наличие в...

Номер патента: 1515696

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Аммосов, Бакланов, Беляев, Дмитриев, Матвеев, Миронова, Плетнев, Прессман, Путинцева, Шевлягина

МПК: C12N 15/00

Метки: 11сме, антигенов, вирусов, гепатита, днк, клещевого, конструирования, обеспечивающая, одновременную, плазмидная, рекомбинантная, экспрессию, энцефалита

...при 37 С в течение 1 ч, после чего выделяют ВащН 1-ЕсоК 1 - Фрагмент ДНК длиной 5723 п,о., соответствующий по электрофоретической подвижности в 073 агароэном геле линейной Форме плаэмиды р 7,58.Из плаэмиды р 311 выделяют ВалН 1 - ЕсоК 1 - фрагмент ДНК длиной 2682 п,о содержащий С, М, Е гены вируса клеще" вого энцефалита, состыкованные с 11 к промотором и клонируют его в Вап Н 1 - ЕсоК 1 линеаризованной плазмиде р 758Клон, содержащий в составе вектора рЧАК 15 как ген НВаАВ (Ваи 111 фрагмент 1279 п.о.), так и состыкованные с 11 к промотором С, М, Е гены (ВаН 1 - ЕсоКТ Фрагмент 262 п.о,) обозначили р 7,55 11 СИЕ.ДНК ппазмиды р 758 11 СИЕ используют для трансформации клеток почек зеленой мартышки СУ, зараненных вирусом осповакцины штамма...

Номер патента: 1575576

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Аммосов, Беляев, Дмитриев, Зарвина, Мезенко, Микрюков, Миронова, Путинцева, Рукавишников, Рябинин, Сабиров, Самуков, Семенова, Синяков, Черный

МПК: A61K 39/29, C12N 15/00

Метки: вируса, ген, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, осповакцины, плазмидная, рекомбинантная, рекомбинантного, штамм, экспрессирующий

...включает 3 стадии: во-первых, сорбцию антител к НВЯАЕ 50 на носителе; во-вторых, связывание антигена с закрепленными антителами при иякубации пробы с носителем и, в третьях, проявление связавшегося а антигена инкубацией с меченными 55 йодомиммуяоглобулинами против НВБАЕ, Для анализа используют полистирольные планшеты для имунологи" ческих реакций.Ленинградский завод медпрепаратов), Таким образом твердофазным носителем служат стенкилунок планшета.Для сорбции антител в каждую лунку планщеты наносят по 30 мкл раствора иммуноглобулинов против НВЯАя сконцентрацией 0,02 мг/мп в 0,02 Мнатрийфосфатном буфере рН 1,8 и иякубируют при комнатной температурев течение 2-3 ч, Лунки промывают3 раза забуференным Физиологическимраствором ,ЗФР) -...

Номер патента: 1651555

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Беляев, Дмитриев, Рукавишников, Синяков

МПК: C12N 15/51, C12N 15/85

Метки: антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, плазмидная, рекомбинантная

...наличие антигена вируса гепатита В иммунофер.ментным методом с пероксидазой хрена,при этом в качестве контроля сраонения ис 15,пользуют рекомбинантный НВсА 9, полученный в Е.со 1. Во всех пробах обнаруженантиген, причем уровень экспоессии последнего составляет 2000 нг на 10 инфици.рованных клеток СЧ- за 48 ч при полном20 цитопатическом действии, что позволяетрассматривать полученную плазмиднуюДНК как субстанцию, потенциально пригодную для изготовления вакцины гротив гепатита В,25 П р и м е р 3. Клеточный иммунный ответопределяют с помощью общепринятой реакции бласттрансформации лимфоцитов(РБТЛ), Для этого иммуниэируют подкожнов корень хвоста линейных мышей ВА 1. В/ с30 массой 8-10 г дозой 2-4 х 10 о,о. е/мышь,Спленоциты выделяют на...