C12N 15/21 — альфа-интерферон

Номер патента: 1703690

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Долганов, Евдонина, Еремашвили, Козлов, Монастырская, Народицкая, Свердлов, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Царев, Цыганков, Чистосердов, Юрин

МПК: A61K 37/66, C12N 1/21, C12N 15/21 ...

Метки: бактерии, днк, интерферона, кодирующая, плазмидная, продуцентинтерферона, рsеudомоnаs, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...вводят плазмиду 8751, которая обеспечивает устойчивость к триметаприму,Высев конъюгатов производят на минимальную агаризованную солевую среду Адамса, содержащую следующие компоненты: глюкоза 4 мг/мл; тизмингидрохло 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 рид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; лейцин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл; стрептомицин 75 мкг/мл; триметаприм 75 мкг/мл, В этих условиях вырастают только коньюгаты Е.со 1 С 600 (К 751, рИЧ 22), Затем проводят коньюгацию между Е,со 1 С 600(В 751, рЧМ 22) и Рзеобоаопаз зр, 31 с дефектным геном йг А Коньюгаты вырастают на минимальной агариэованной солевой среде следующего состава: глюкоза 4 мг/мл; тиамингидрохлорид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл, стрептомицин 200 мкг/мл,...

Номер патента: 1703691

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Гилева, Добрынин, Коробко, Кравченко, Филиппов, Чувпило

МПК: C12N 1/21, C12N 15/21

Метки: бактерий, днк, еsснеriснiа, интерферона, кодирующая, лейкоцитарного, плазмидная, полипептид, полипептида, продуцент, рекомбинантная, свойствами, человека, штамм

...Из гибридизующихся с этой пробой клонов выделяют плазмидную ДНК, строение которой подтверждают рестриктным анализом с помощью рестриктаз Наб, Мзри Най+ЯаОК раствору 10 мкг ДНК плазмиды Р 6 А 23/Яа в 80 мкл буфера В без МаСГприбавляют 20 ед. каждой из рестрикционных нуклеаз Яаф и Крп и инкубируют 90 мин при 37 С, Анализ полноты гидролиза и выделение векторного Крп/ЯаГ-фрагмента (3,4 т,п о) проводят при помощи электрофореза в 1 -ном геле легкоплавкой агароэы, Одновременно 10 мкг ДНК плазмиды р ецГт 17 в 100 мкл буфера В обрабатывают 1,5 ч при 37 С 20 ед, каждой из рестриктаэ 89 г и ЯаГ, после чего фрагмент величиной около 500 п,о., содержащий синтетический ген а 2 интерферона, выделяют при помощи электрофореза в 5 ь-ном...

Номер патента: 1707078

Опубликовано: 23.01.1992

Авторы: Амосова, Болдырева, Добрынин, Коробко, Филиппов

МПК: C12N 15/12, C12N 15/21

Метки: бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, плазмидная, полипептид, продукт, промежуточный, рекомбинантная, ртну12, ртнуз14, свойствами, тимозина, человека, штамм

...ауо Гача т М; - .и. Э УГ эез :. 1 ан,леатдсд дып а якт . даг д- а знык ", ос 4 дамидитн ьнл методомпПОН. С 1 Чд 1 а УУИн; - , д эп;.;-ь 1 ечат 3- . - -,д 5 гч .".щью защ;щ чы,, , тПЬ, дхтр 1 та з пил 2 азси ул с: д, п 1:асед 1 ЗОПРОП,ГатУлича)-фаСФ 1 ТОВ Эт. В 1 Раданы тетрээплал С 1 уев предадет е масшта бе 0 5.0 7 мл 1 агь 1.п;,;ь уя в каче;тве час егя посистпа стеа (газмрр пар 500 А, размер частиц 40-8; лл) отаоол 1 у через13 .суцичатчу и связь гри-оед няют перваа нулеаз 1 д аа звечп 111 эгрузка 20 -.лсль, 11 с па "ьз уат "итрасотар м паг,е рад 1ач тенг э ииВедает ПраЫЬу .а ЛЬ СмрСЬ" ТЕТРИС ИД гафуран - пиридич - дода 5 3 2) После -о чания синтеза защитные гр)псы удаляют последовательной обработкой тиофено- ЛЯтаМ то 11 зт 1 Лаь...

Номер патента: 1751207

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Крашенинникова, Пухальский, Смирнов, Теверовская

МПК: C12N 15/21, C12N 15/84

Метки: pst20, альфа, днк, интерферон, кодирующая, плазмидная, растениях, рекомбинантная, табака, человека

...трех штаммов и наносят на нитроцеллюлозный фильтр, который помещают на полноценную питательную среду на 18 ч при 300 С, Бактерии сйывают с фильтра и, высевают на селективную среду. содержащую ампициллин (100 мкг/мл), рифампицин (100 мкг/мл),.спектиномицин (100 мкг/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл), Выросшие через 3 сут колоний на селективной среде при 30 С очищают на той же среде до отдельных колоний й выделяют из клеточной биомассы тотальную ДНК, 10 мкг ДНК переваривают с 20 ед, рестриктазы ВавН 1 1 ч.при 37 С, фракциоййруют путем электрофореза в 0,7 агарозном геле и переносят на нитроцеллолознь 1 й.фйльтр по методу Саузерна. Проводят гйбридизацию иммобилизованной на фильтре ДНК с Р-меченной ДНК .32плазмиды рЯТ 20, отмывают фильтр от...

Номер патента: 1764515

Опубликовано: 23.09.1992

Автор: Чарльз

МПК: C12N 15/21

Метки: интерферона, лейкоцитарного

...гибридизующие (к НИ) Нпб-Нпс 3 или ЕсоВ- ЕсоВ фрагменты субклонируют в Рзт сайт рВВ 322 и экспрессируют активности ИФН- а в Е.со,Формула изобретения Способ получения лейкоцитарного интерферона, предусматривающий культивирование биологических культур, выделение и очистку целевого продукта, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта, в качестве биологических культур используют штамм мик роорганизма ЕзсйегсЫа со АТСС 31633или 31634, трансформированный рекомбинантными плазмидными ДНК со вставкой 2-рВВ 322(Рзт) Нс Р-206. или Е- рВВ 322(Рзт)/НсИ ЗК 35-АН 1 6 с нуклеотид ной последовательностью55 ных в 1 л воды ("РВЯ"), и добавляют при интенсивном перемешивании к 17 л 20 мМ Трис-НС (рН 7,5), 1 мМ...

Номер патента: 1591484

Опубликовано: 20.05.1995

Авторы: Бумялис, Воробьев, Дебабов, Козлов, Коробицин, Маурицас, Парфенов, Песлякас, Петрова, Пивоваров, Радзявичюс, Ражанас, Стронгин, Янулайтис

МПК: C12N 15/21

Метки: альфа-2, интерферона, рекомбинантного, человека

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АЛЬФА-2 ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА путем лизирования клеток Pseudomonas putida несущих рекомбинантную плазмиду, обработки полученного лизата полиэтиленимином с последующим фракционированием сернокислым аммонием и очисткой гидрофобной и иммуноаффинной хроматографией, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения выхода целевого продукта, клетки микроорганизмов лизируют буфером, содержащим 15-20% сахарозы, 5,0-5,5 мМ ЭДТА, 0,15 0,25 М натрия хлористого, 10,0-10,5 мМ фенилметилсульфонилфторида и 0,0045-0,0055% тиодигликоля с рН 6,7-8,2 при температуре 3-5oС, обрабатывают лизат полиэтиленимином до конечной его концентрации 0,25-0,35% гидрофобную хроматографию проводят на фенилсилохроме С-80,...

Номер патента: 1616143

Опубликовано: 10.12.1995

Авторы: Башкис, Бумялис, Вилутис, Григишкис, Римкявичене, Стиркин, Стронгин, Цыганков, Янулайтис, Яскялявичене

МПК: C12N 15/21

Метки: альфа-2, интерферона, лейкоцитарного, человеческого

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2, предусматривающий глубинное культивирование рекомбинантных бактерий Pseudomonas species V6-84, несущих плазмиду pV63 в питательной среде в условиях аэрации в присутствии стрептомицина и тетрациклина в количестве 50-150 и 30-50 мг на 1 л среды соответственно, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода интерферона, культивирование осуществляют на питательной среде следующего состава, г/л:Гидролизат пекарских дрожжей 5,0D-Глюкоза 10,0Сернокислый аммоний 3,0Фосфорнокислый двузамещенный трехводный калий 1,5Фосфорнокислый однозамещенный калий 0,6Хлористый натрий 0,5Сернокислый семиводный магний 0,25Хлористый кальций 0,011

Номер патента: 1586191

Опубликовано: 20.10.1999

Авторы: Алексенко, Дебабов, Изотова, Ионов, Козлов, Лапидус, Лебедева, Машко, Монастырская, Свердлов, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Царев, Юрин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/21, C12P 21/00 ...

Метки: escherichia, ppr-ifn-f-2, днк, интерферона-f, лейкоцитарного, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pPR-IFN- F-2, обеспечивающая синтез лейкоцитарного интерферона- F2 размером 5689 п.н, содержащая:EcoRI-BamHI - фрагмент векторной плазмиды pPR 322, размером 5169 п.н.;BamHI-EcoRI - фрагмент размером 520 п.н. плазмиды pLM-IFN- F-27, модифицированной удалением короткого HindIII-BamHI фрагмента;ori ColEI-ColEI - репликон;cIts 857 - ген термочувствительного репрессора - фага лямбда;гены rex(A,B) фага лямбда;Ap'...