C12N 15/10 — способы выделения, получения или очистки ДНК или РНК

Номер патента: 1711676

Опубликовано: 07.02.1992

Авторы: Жан, Ренате, Ханс

МПК: C12N 15/10, C12N 15/51

Метки: гепатита, диагностики, днк

...с ДНК-вектором 2 мкг ДНК лямбда-фагов 1149 вместе с 2-мя единицами ЕсоР(4 ед./мкл) в общем реакционном объеме 6 мкл/инкубационный буфер по данным изготовителя) инкубируют 1 ч при 37 С. Затем фермент инактивируют путем 10-минутного нагревания при 68 С. Этот раствор лигируют с 3 мкл маркированной ДНК, которая выделена как описано в примере 3, 1 мкл 5 мМ АТР и 1 ед. Т 4-ДНК- лигазы при комнатной температуре, 4 мкл этой реакционной смеси упаковывают в оболочки лямбда-фагов. Этими упакованными фагами инфицируют штамм ЕзспегсЫа со 1 ММ 514, Для скрининга на наличие встроенной ДНК примерно 10 фагов наносят на пластины для скрининга размером 22 х 22 см и инкубируют в течение ночи при 37 С. ДН К-фаги переносят на фильтр из нитроцеллюлозы путем...

Номер патента: 1740418

Опубликовано: 15.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Лосева, Озолс, Осе, Пумпен, Пушко, Цибиногин

МПК: C12N 15/10, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: pgcs1-39, s1(20-68, аминокислот, бактерии, вируса, гепатита, днк, конструирования, кор-антиг, плазмидная, поверхности, продуцент, рекомбинантная, с-концевых, штамм, экспонированным, эпитопом

...30 мин при 4 С. Лизат осветляют центрифугированием (10 000 хд, 4 С), НВсАд Л-ргеЯ(20-68) очищают следующим образом. Лизат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВсАд Ь-ргеЯ(20-68) собирают в осадке, полученном при 300 насыщения сульфатом аммония, Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0, 0,15 йаС, 0,1 отритоне Х 100 до конечной концентрации белка 25 - 50 мкг/мл, и 6 - 7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефарозой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х 100. Фракции, проявляющие НВсАд-активность собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50% сульфатом аммония,3, Определение НВсАд-активности методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью...

Номер патента: 1679796

Опубликовано: 27.09.1999

Авторы: Гараев, Казаков, Маджар, Нигматуллин

МПК: C12N 15/10

Метки: бактериофага, векторов, днк, лямбда, основе

Способ получения ДНК векторов на основе бактериофага лямбда, предусматривающий освобождение фаголизата от бактериальных клеток и их обломков, концентрирование, осаждение фагов полиэтиленгликолем, центрифугирование в градиенте плотности хлористого цезия и очистку ДНК фенол-детергентным методом, отличающийся тем, что, с целью повышения производительности способа, освобождение фаголизата от бактериальных клеток и их обломков проводят сепарированием, а концентрирование фага осуществляют с помощью ионообменной хроматографии на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенной 0,05 - 0,1 М калий-натрий фосфатным буфером раствором, при этом элюцию ведут 0,4 - 1,0 М хлористым натрием.