Дрейлиня

Номер патента: 1751210

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстманн, Пумпен, Пушко, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/48, C12N 15/51, C12N 5/10 ...

Метки: 41-22, антиген, бакт, белка, вируса, гепатита, днк, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, кор, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, фрагментом, человека, штамм, экспонированным

...С 1 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х. Фракции, проявляющие РВсАд - активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-ным сульфатом аммония.3. Определение НВсАд - активности Методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью рэдиал ьной иммунодиффузии (Р ИД), Дл я этого готовят двукратные серийные разведения клеточного лизата и титруют против анти-НВс антител человека, В качестве 510 стандарта используют очищенный НВсАд, полученный из рекомбинантных бактерий (1 мг/мл). Результаты титрования методом х 0,75 мм, Злектрофорез проводят в теЗО чение 15 ч при силе тока 7 мА. После злектрофореэа белки переносят нэ нитроцеллюлозные фильтры, инкубируют с моноклональными...

Номер патента: 1751209

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстман, Пумпен, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/33, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: 24-5, бактерий, белка, белок, вируса, гепатита, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, кор-ант, кор-антигена, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, слитого, слитый, человека, штамм

...клеток к реакци-онной смеси добавляют 100 мкл клеток Е.соП ЯВ 1, обработанных 0,1 М СаС 12 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл).9Отбор клоновосуществляют путем рестрикционного анализа плазмидной ДНК,выделенной экспресс-методом. Плаэмида сожидаембй рестрикционной картой получает наименование рНИ 24-5,2. Штамм-продуцент Е. соИ К 802 (рН24 - 5),Штамм-продуцейт получают трансформацией клеток Е. со 11 К 802 рекомбинантнойплазмидной рНИ 24-5, Клетки выращиваютдо оптической плотности ОП 65 о 4-5 в солевой среде М 9 с добавкой, г/л: каэаминовыекислоты 10; глюкоза 2; ампициллин. 0,02,Клетки собирают центрифугированием и лизируют в четырехкратном обьеме буфера,содержащего 0,05 М трис-НС 1, рН 8,0; 0,15М ИаС 1, 0,1% тритон Х 100,...

Номер патента: 1751208

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Бреде, Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: pfrblv, бактерий, бактериофага, белка, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, обо, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рогатого, скота, штамм

...при фильтрыинкубируютсмоноклональны 65 С. После очистки ДНК В 9 И 1 - ВагпН фраг- ми анти- др 51 антителами глАК 14 в развемента на агарозном геле ДНК растворяют в дении 1:500 на буфере ТВЯ, содержащем20 мкл воды, Заполнейие концов проводят 55 50 мМ трис-НС 1, рН 7,5, 0,15 М МаС 1, 0,1%в 100 мкл раствора Б, содержащего 0,05 М тритон Х 100, 1% БСА, в течение 15 ч притрис-НС 1, рН 7,5, 0,01 М 9 С 12, 0,01 М дитиот С, После трехкратной отмывки буферомрейтол,0,025 М МаС 1, 100 мкМ сАТР, ОСТР, ТВЯ фильтры инкубируют 2 ч при 200 С снТТ 1- и ОСТР и 10 ед, ДНК-полимеразы Е. коньюгатом пероксидазы с антителами просоИ (фрагмент Кленова, в течение 1 ч при тив иммуноглобулинов мыши в разведении1:500. Фильтры отмывают буфером ТВЯ (3 - но. Иньекции...

Номер патента: 1744110

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 1/21, C12N 15/33, C12N 15/70 ...

Метки: frblv, бактерий, бактериофага, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, оболочки, плазмидная, прод, рекомбинантная, рогатого, скота, слитый, штамм

...50 мМ трис-НС, рН 7,5; 10 мММдС 2, 10 мМ дитиотрейтол, 50 Ы АТР и 10ед, Т 4 ДНК-лигазы, в течение 12 ч при 4 С,Фрагмент инактивируют нагреванием при650 С в течение 15 мин, К реакционной смесидобавляют 100 мкл клеток Е,соИ ВВ 1, обработанных 100 мМ СаС 2 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл), длятрансформации клеток,Отбор клонов осуществляют путем экспресс - выделения ДНК и ее рестрикционного анализа, а также секвенирования.Плазмида с ожидаемой последовательностью получает наименование рГРВ Ч-Р 6,Конструирование рекомбинантнойплазмидной ДНК рЕРВ ЧзР 6,2 мкг плазмиды рРРВ Ч-Г 6, выделенной стандартным методом, расщепляют 3.ед, растриктазы Есо 781 и 3 ед, рестриктазыЗзр 1 в 25 мкл раствора А, содержащего100 мМ трис-НС, рН 7,5; 50 мМ...

Номер патента: 1742331

Опубликовано: 23.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Озолс, Осе, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: 51-3, 56-103, антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, кор, крупного, лейкоза, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, рогатого, скота, экспонированным, эпитопом

...разбавляют в 4 раза дистиллированной водой и подвергаютф ра кциони рован и ю сульфатом аммония. 20Н ВсАд Ь - ВО/др 51(56 - 103) собирают восадке, полученном при 30 насыщениясульфатом аммония. Осадок растворяют в0,05 М трис-НС 1, рН 8,0, 0.15 М йаО, 0,1тритоне Хдо конечной концентрации .25белка 25 - 50 мг/мл, и 2 - 4 мл этого раствора наносят на колонку с сефарозой (1,6 х 100см), уравновешенную тем же буфером, нобез тритона Х. Фракции, проявляющиеНВсАд-активность, собирают и используют 30либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-нымсульфатом аммония,П р и м е р 3. Определение НВсАд-активности методом РИД. 35Титр НВсАд определяют с помощью радиальной иммунодиффузии по Ухтерлони,Для этого готовят двухкратные...