C12N 15/23 — гамма-интерферон

Номер патента: 1701114

Опубликовано: 23.12.1991

Авторы: Адольф, Петер, Рудольф

МПК: C12N 15/23

Метки: интерферона, лошади

...гена в плазмиду рйН,10 мкг плазмиды рВНрасщепляют рестриктазой Зас 1 в 100 мкл реакционного буфера и этим инактивируют путем 10-минутного нагрева до 70 С. ДНК обрабатывают фрагментом Кленова при 25 С в течение 30 мин в присутствии всех четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов, каждый из которых берут в количестве 10 мкМ, Реакцию прекращают зкстракцией смесью фенола с хлороформом, ДНК концентрируют осаждением этанолом, В результате этой обработки за триптофановым промотором образуется ту50 55 пой конец ДНК, который заканчивается трансляционным стартовым кодоном АТО, Линеаризированную плазмидную ДНК расщепляют рестриктазой ВащН 1 и векторную часть выделяют электрофорезом в агарозном геле.50 нг подготовленного таким образом плазмидного вектора...

Номер патента: 1703692

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Алексенко, Болотин, Борухов, Бумялис, Гервинскас, Дебабов, Евдонина, Изотова, Козлов, Костров, Лапидус, Лебедева, Лившиц, Машко, Мочульский, Носовская, Плотникова, Подковыров, Рыжавская, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Трухан, Юрин, Янулайтис

МПК: C12N 1/21, C12N 15/23, C12P 21/00 ...

Метки: 1-13, i-интерферона, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерферона, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, фибробластного, человека, штамм

...в 20 мкл -20, 4 мкг полученного таким образом препарата ДНК обрабатывают Кленовским фрагментом ДНК-полимеразы 1 Е.со в указанных условиях для достройки возможно имеющихся одноцепочечных концов молекул до двухцепочечных. Реакцию останавливают фенольной депротеинизацией, нуклеиновые кислоты осаждают этанолом и растворяют в 20 мкл Н 20,Лигирование линейных молекул ДНК с двуцепочечными концами проводят при 16 С в пробе объемом 50 мкл, содержащей 60 мМ трис-НС, рН 7,6, 10 мМ М 9 С 2, 10 мМ дитиотреитол, 4 мМ АТФ, 8 -ный полиэтиленгликоль - 6000, 4 мкг ДНК, 100 ед, ДНК- лигазы Т 4. После завершения реакции пробу разбавляют водой в четыре раза и проводят осаждение нуклеиновых кислот этанолом, 2 мкг растворенной в Н 20 ДНК обрабатывают...

Номер патента: 1660388

Опубликовано: 20.05.1995

Авторы: Ажикина, Мясников, Ростапшов, Свердлов, Смирнов, Чернов

МПК: C12N 1/19, C12N 15/23

Метки: cerevisiae, pvgib, saccharomyces, быка, гамма, гамма-интерферона, днк, дрожжей, интерферон, кодирующая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pYGIB, кодирующая гамма-интерферон быка, размером 8,0 т.п.о. и мол.м. 5,2 МД, содержащая Hind III-BamHI фрагмент плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора pjDB 207 размером 6,6 т.п.о. BamHI-EcoRI-фрагмент ДНК плазмиды pMS 46 размером 0,52 т. п. о. XbaI Hind III/BamHI фрагмент ДНК рекомбинантного фага mp 18-gamma IFN, нуклеотидная последовательность которого кодирует гамма-интерферон быка, размером 0,428 т.п.о. BamHI/Sau 3A-PstI/Hind III фрагмент ДНК плазмиды pMS 46 размером 0,39 т.п.о. гены и регуляторные участки; ген bla, обеспечивающий устойчивость к ампициллину; ген LEU 2, обеспечивающий возможностью роста на селективных средах без лейцина; бактериальный локус ori, обеспечивающий...