Патенты с меткой «белка,обладающего»
Рекомбинантная плазмидная днк pga9, кодирующая синтез белка,обладающего антигенными свойствами вируса иммунодефицита человека первого типа, способ ее конструирования, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент
Номер патента: 1708848
Опубликовано: 30.01.1992
Авторы: Бобков, Бобкова, Гараев, Казеннова, Колот
МПК: C12N 15/48, C12N 15/70
Метки: pga9, антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, первого, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, свойствами, синтез, типа, человека, штамм
...ген устойчивости к канамицину, и раг-участок СоА выделяют из плазмиды рАК 25. Для этого рАК 25 подвергают гидролизу рестриктазой Е,сой 1, ин кубируя 20 мкг ДН К рАК 25 с 20 ед, 10 фермента в присутствии 50 мМ МаС 3, 10 мММцС 32 10 мМ трис-НС 3, рН 7,5, 1 мМ ДТТ в течение 2 ч г.ри 37 С с последующим прогреванием при 75 С в течение 15 мии. Далее гидрслизовзииую ДНК разделяют в 0,8% 15 дгзрозном геле и выделяют нужный фрагмент ДНК, используя бумагу ДЕ 81.В качестве вектора используют плазмиду р 630, полученную следующим образом.Клетки бактерий Е.со 3 НВ 101, содержа щие плазмидную ДНК рОВ 290 выращиваютв 200 мл бульона до титра 1 х 10 клеток/мл. Клетки осаждают центрифугирсванием(5000 ц,5 мии,4 С) и ресуспендируют в 35 мл раствора,...
Рекомбинантная плазмидная днк рр1, определяющая синтез гибридного белка,обладающего антигенными свойствами вируса иммунодефицита человека 1, способ ее конструирования и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент
Номер патента: 1816797
Опубликовано: 23.05.1993
Авторы: Бобков, Гараев, Шуленин
МПК: C12N 1/21, C12N 15/48
Метки: антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, гибридного, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, конструирования, определяющая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рр1, свойствами, синтез, человека, штамм
...ДНК проводят методом равновесного центрифугирования в градиенте плотности СзС 1 с бромистым этидием (1 мкг/мл),Для получения плазмиды рР 1 фрагмент Н 1 пб 111 - Е.сой 1 плазмиды рйТЗ переклонируют в вектор рцй 290 по сайту Нпб 111, С этой целью 10 мкг ДНК плазмиды инкубируют с 30 ед. эндонуклеазы Е.соЯ в буфере, содержащем 100 мМ йаС 1, 10 тМ МдМ 12, 10 аМ трис-НС 1 рН 7,5, 1 щМ ДТТ, в течение 1 ч при 37 С. Затем добавляют 1/10 объема ЗМ ацетата йэ и осаждают ДНК 2,5 объемами этилового спирта на ценрифуге (10000 д, 10 мин, 4 С). Осадок высушивают и растворяют в буфере 10 мМ трис-НС 1 рН 8,0 и 5 мМ ЭДТА. Полученный препарат лигируют с 50 мМ адаптора Е.сой-Нпд 11 с помощью ДНК-лигазы фага Т 4 (30000 единиц/мл),из расчета 1 мкл...