C12N 15/48 — Retroviridae, например вирусы бычьей лейкемии, кошачьей лейкемии

Номер патента: 1644720

Опубликовано: 23.04.1991

Авторы: Дэру, Роберт

МПК: C12N 15/48

Метки: антигенной, вируса, детерминанты, спид

...НТ 1 Лпозволяет легко сконструировать ДНК-индикатор,для вьгцеления генома из Нили любых другихлиний, способных к распространениювируса.0,03 пмоль Фрагмента 8 а 8/С 1 а 1 Нг.пс 11 смешивают с 0,03 пмоль Фрагмента рЕЧ-чгИ 2/С 1 а 1- Рпч 11 и связывают с помощью Т 4 ДНК-лигазы(200 единиц) в течение 18 ч при 15 Сов конечном объеме 10 мкл. Продуктсвязывания затем трансформируют вштамм Е,со 1 г. МС 106 1 (рВК 248 с 1 Сз)и трансйорманты отбирают путем выращивания на агаровьтх пластинках БЛ сампицилином после инкубирования 18 чпри 30 С, ДНК рекомбинантных плазмиданализируют для выявления нужногоразмера отщепленного Фрагмента после 45расщепления рестриктазами Вя 1 11,РнС 1 или Ньпй 111. Продукты выделения, прошедшие анализ по размеру, за"тем...

Номер патента: 1708848

Опубликовано: 30.01.1992

Авторы: Бобков, Бобкова, Гараев, Казеннова, Колот

МПК: C12N 15/48, C12N 15/70

Метки: pga9, антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, первого, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, свойствами, синтез, типа, человека, штамм

...ген устойчивости к канамицину, и раг-участок СоА выделяют из плазмиды рАК 25. Для этого рАК 25 подвергают гидролизу рестриктазой Е,сой 1, ин кубируя 20 мкг ДН К рАК 25 с 20 ед, 10 фермента в присутствии 50 мМ МаС 3, 10 мММцС 32 10 мМ трис-НС 3, рН 7,5, 1 мМ ДТТ в течение 2 ч г.ри 37 С с последующим прогреванием при 75 С в течение 15 мии. Далее гидрслизовзииую ДНК разделяют в 0,8% 15 дгзрозном геле и выделяют нужный фрагмент ДНК, используя бумагу ДЕ 81.В качестве вектора используют плазмиду р 630, полученную следующим образом.Клетки бактерий Е.со 3 НВ 101, содержа щие плазмидную ДНК рОВ 290 выращиваютв 200 мл бульона до титра 1 х 10 клеток/мл. Клетки осаждают центрифугирсванием(5000 ц,5 мии,4 С) и ресуспендируют в 35 мл раствора,...

Номер патента: 1740418

Опубликовано: 15.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Лосева, Озолс, Осе, Пумпен, Пушко, Цибиногин

МПК: C12N 15/10, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: pgcs1-39, s1(20-68, аминокислот, бактерии, вируса, гепатита, днк, конструирования, кор-антиг, плазмидная, поверхности, продуцент, рекомбинантная, с-концевых, штамм, экспонированным, эпитопом

...30 мин при 4 С. Лизат осветляют центрифугированием (10 000 хд, 4 С), НВсАд Л-ргеЯ(20-68) очищают следующим образом. Лизат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВсАд Ь-ргеЯ(20-68) собирают в осадке, полученном при 300 насыщения сульфатом аммония, Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0, 0,15 йаС, 0,1 отритоне Х 100 до конечной концентрации белка 25 - 50 мкг/мл, и 6 - 7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефарозой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х 100. Фракции, проявляющие НВсАд-активность собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50% сульфатом аммония,3, Определение НВсАд-активности методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью...

Номер патента: 1742331

Опубликовано: 23.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Озолс, Осе, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: 51-3, 56-103, антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, кор, крупного, лейкоза, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, рогатого, скота, экспонированным, эпитопом

...разбавляют в 4 раза дистиллированной водой и подвергаютф ра кциони рован и ю сульфатом аммония. 20Н ВсАд Ь - ВО/др 51(56 - 103) собирают восадке, полученном при 30 насыщениясульфатом аммония. Осадок растворяют в0,05 М трис-НС 1, рН 8,0, 0.15 М йаО, 0,1тритоне Хдо конечной концентрации .25белка 25 - 50 мг/мл, и 2 - 4 мл этого раствора наносят на колонку с сефарозой (1,6 х 100см), уравновешенную тем же буфером, нобез тритона Х. Фракции, проявляющиеНВсАд-активность, собирают и используют 30либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-нымсульфатом аммония,П р и м е р 3. Определение НВсАд-активности методом РИД. 35Титр НВсАд определяют с помощью радиальной иммунодиффузии по Ухтерлони,Для этого готовят двухкратные...

Номер патента: 1751210

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстманн, Пумпен, Пушко, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/48, C12N 15/51, C12N 5/10 ...

Метки: 41-22, антиген, бакт, белка, вируса, гепатита, днк, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, кор, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, фрагментом, человека, штамм, экспонированным

...С 1 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х. Фракции, проявляющие РВсАд - активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-ным сульфатом аммония.3. Определение НВсАд - активности Методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью рэдиал ьной иммунодиффузии (Р ИД), Дл я этого готовят двукратные серийные разведения клеточного лизата и титруют против анти-НВс антител человека, В качестве 510 стандарта используют очищенный НВсАд, полученный из рекомбинантных бактерий (1 мг/мл). Результаты титрования методом х 0,75 мм, Злектрофорез проводят в теЗО чение 15 ч при силе тока 7 мА. После злектрофореэа белки переносят нэ нитроцеллюлозные фильтры, инкубируют с моноклональными...

Номер патента: 1761808

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Абрамов, Галев, Гузаев, Завьялов, Смирнов, Чернов

МПК: C12N 15/48, C12P 19/34, C12Q 1/68 ...

Метки: белка, вируса, днк, др120, иммунодефицита, кодирующий, лимфоцитов, ответственную, поверхностного, протеином, связывание, сд4т, фрагмент, часть, человека

...65 с. В качестве мономеров используют ч-ацил-О-диметокситритип-О-цианоэтил)- й,ч-диизопропиламидофосфит)-2 -дезокси 1761808рибонуклеозиды. причем если рибонуклеозид = аденозин или цитидин, то ацил = бензоил, если рибонуклеозид = гуанозин, то ацил = изобутирил, если рибонуклеозид = тимидин, то ацил отсутствует, В качестве активатора межнуклеотидной концентрации используют тетразол, детритилирующего агента 20 -ный раствор трихлоруксусной кислоты в дихлорметане, окислителя 0,1 М раствор иода в смеси пиридин-вода-тетрагидрофуран 2:20:75, кэпирующих реагентов: равные обьемы реагента И (уксусный ангидрид,6-лутидин-тет рагидрофуран 10:10;80) и реагента В (1-метилимидазол-тетрагидрофуран 16:84), растворителя для промывки и конденсации -...

Номер патента: 1789562

Опубликовано: 23.01.1993

Авторы: Белявская, Веревкина, Долгова, Закабунин, Ильичев, Красноборов, Петренко, Хрипин, Юдина

МПК: C12N 15/48

Метки: антигенными, белка, белок, вич, гибридный, днк, кодирующая, плазмидная, рекомбинатная, свойствами

...анализируют на наличие сайтов для эндонуклеэз рестрикции. Вд 11 иВаа Н 1, Структуру подтверждают секвенированием: полученную плазмидную ДНК, содержащую адапторный фрагмент, обозначают р 2 41. 1 мкг ДНКру 41 расщепляют эндонуклеазой рестрикции ЕсоЮ в течение часа в Я-буфере, После этого добавляют рестриктазу Вд( 1 и также инкубируют в течение часа при 37 С. Препарат депротеинизируют с помощью фенольной экстракции, ДНК осаждают этанолом и ресуспендируют в ТЕ- буфере,Фрагмент размером 98 н, и., содержащий промотор а -амилазы, ЯО-последовательность и расположенный от нее на расстоянии б нуклеотидных пар, инициирующий кодон, получают на смеси Есой - Яац ЗА фрагментов ДНК плаэмиды рЕМВ 303,Выделение индивидуального фрагмента проводят путем...

Номер патента: 1816797

Опубликовано: 23.05.1993

Авторы: Бобков, Гараев, Шуленин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48

Метки: антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, гибридного, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, конструирования, определяющая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рр1, свойствами, синтез, человека, штамм

...ДНК проводят методом равновесного центрифугирования в градиенте плотности СзС 1 с бромистым этидием (1 мкг/мл),Для получения плазмиды рР 1 фрагмент Н 1 пб 111 - Е.сой 1 плазмиды рйТЗ переклонируют в вектор рцй 290 по сайту Нпб 111, С этой целью 10 мкг ДНК плазмиды инкубируют с 30 ед. эндонуклеазы Е.соЯ в буфере, содержащем 100 мМ йаС 1, 10 тМ МдМ 12, 10 аМ трис-НС 1 рН 7,5, 1 щМ ДТТ, в течение 1 ч при 37 С. Затем добавляют 1/10 объема ЗМ ацетата йэ и осаждают ДНК 2,5 объемами этилового спирта на ценрифуге (10000 д, 10 мин, 4 С). Осадок высушивают и растворяют в буфере 10 мМ трис-НС 1 рН 8,0 и 5 мМ ЭДТА. Полученный препарат лигируют с 50 мМ адаптора Е.сой-Нпд 11 с помощью ДНК-лигазы фага Т 4 (30000 единиц/мл),из расчета 1 мкл...

Номер патента: 1766070

Опубликовано: 30.01.1994

Авторы: Дедкова, Киприянов, Офицеров, Серпинский

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48

Метки: escherichia, бактерий, белков, вируса, днк, иммунодефицита, кодирующая, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, типа, фрагментов, фрагменты, человека, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pUE 41, кодирующая фрагменты белков оболочки gp120 и gp41 вируса иммунодефицита человека типа 1 размером 5700 н. п. и мол. м. 3,7, содержащая- Bam HI - Hind III - фрагмент плазмидной ДНК pUR292 размером 5180 н. п. ;- Bgl II - Hind III - фрагмент плазмидной ДНК pBH 10 размером 520 н. п. ;- уникальный сайт рестрикции Hind III;- гены и генетические маркеры;- ген bla - обеспечивающий синтез -лактамазы;- ген lacz - обеспечивающий синтез -галактозидазы;- фрагмент гена env ВИЧ - 1, обеспечивающий синтез полипептида, обладающего антигенным...