Бумялис

Номер патента: 1616143

Опубликовано: 10.12.1995

Авторы: Башкис, Бумялис, Вилутис, Григишкис, Римкявичене, Стиркин, Стронгин, Цыганков, Янулайтис, Яскялявичене

МПК: C12N 15/21

Метки: альфа-2, интерферона, лейкоцитарного, человеческого

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2, предусматривающий глубинное культивирование рекомбинантных бактерий Pseudomonas species V6-84, несущих плазмиду pV63 в питательной среде в условиях аэрации в присутствии стрептомицина и тетрациклина в количестве 50-150 и 30-50 мг на 1 л среды соответственно, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода интерферона, культивирование осуществляют на питательной среде следующего состава, г/л:Гидролизат пекарских дрожжей 5,0D-Глюкоза 10,0Сернокислый аммоний 3,0Фосфорнокислый двузамещенный трехводный калий 1,5Фосфорнокислый однозамещенный калий 0,6Хлористый натрий 0,5Сернокислый семиводный магний 0,25Хлористый кальций 0,011

Номер патента: 1640996

Опубликовано: 27.05.1995

Авторы: Бумялис, Дебабов, Козлов, Радзявичюс, Ражанас, Стеркин, Стронгин, Цыганков, Янулайтис

МПК: C07K 14/56

Метки: альфа-2, интерферона, человека

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬФА-2 ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА, включающий лизис клеток микроорганизмов Pseudomonas putida, обработку полиэтиленимином, фракционирование сернокислым аммонием, гидрофобную хроматографию на фенилсилохроме С-80, рН-фракционирование, концентрирование и диафильтрацию, ионообменную хроматографию на целлюлозе DE-52, ионообменную хроматографию полученного элюента на целлюлозе СМ-52, концентрирование, гель-фильтрацию на сефадексе G-100, отличающийся тем, что, с целью повышения степени очистки и удешевления продукта, рН-фракционирование проводят при рН 4,5 5, концентрирование и диафильтрацию проводят с помощью кассеты фильтров типа PTGC с пределом 10000 дальтон, после хроматографии на целлюлозе DE-52 элюцию проводят 0,04 0,06 М...

Номер патента: 1591484

Опубликовано: 20.05.1995

Авторы: Бумялис, Воробьев, Дебабов, Козлов, Коробицин, Маурицас, Парфенов, Песлякас, Петрова, Пивоваров, Радзявичюс, Ражанас, Стронгин, Янулайтис

МПК: C12N 15/21

Метки: альфа-2, интерферона, рекомбинантного, человека

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АЛЬФА-2 ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА путем лизирования клеток Pseudomonas putida несущих рекомбинантную плазмиду, обработки полученного лизата полиэтиленимином с последующим фракционированием сернокислым аммонием и очисткой гидрофобной и иммуноаффинной хроматографией, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения выхода целевого продукта, клетки микроорганизмов лизируют буфером, содержащим 15-20% сахарозы, 5,0-5,5 мМ ЭДТА, 0,15 0,25 М натрия хлористого, 10,0-10,5 мМ фенилметилсульфонилфторида и 0,0045-0,0055% тиодигликоля с рН 6,7-8,2 при температуре 3-5oС, обрабатывают лизат полиэтиленимином до конечной его концентрации 0,25-0,35% гидрофобную хроматографию проводят на фенилсилохроме С-80,...

Номер патента: 1709731

Опубликовано: 30.07.1993

Авторы: Бумялис, Давыдов, Добрынин, Коробко, Филиппов, Чумаков, Шингарова, Янулайтис

МПК: C12N 15/12, C12N 15/77

Метки: escherichiacol, plt21, бактерий, днк, кодирующая, лимфотоксина, плазмидная, полипептид, полипептида, продуцент, рекомбинантная, свойствами, человека, штамм

...лимфотоксинэ человека . промывку смолы смесью тетрагидрофуранвплазмидой р Т 21 трансформируют момпв-пиридий- вода(5;3:2). После окончания синтентные клетки Е.со Ы 20050, . теза защитные группы удаляют последоеаПолученный таким образом цтамм тельной обработкой тиофенолятомЕ,со 3620050/р Т 21 характеризуетсяеле+ 55 триэтиламмония и конц, аммиаком. Придующими признаками. зтом происходит Отделение алигонуклеаотиМорфологические признаки, Клетки да от носителя. 5-Диметоксвтритильнуюмелкие, утолщенной палочковиднай формы, группу удаляют кислотной обработкой играмотрицательные. неспоронасныволигануклеотид бчищают электрофорозом в20% ПААГ, содержащем 7 М мочевину. Вы- Аликвоту реакционной смеси используют ход 1-5 о.е, для трансформации...

Номер патента: 1712416

Опубликовано: 15.02.1992

Авторы: Башкис, Бумялис, Вилутис, Григишкис, Козлов, Пунтежис, Римкявичене, Стронгин, Цыганков, Янулайтис

МПК: C12N 15/00

Метки: species, альфа-2, бактериями, интерферона, лейкоцитарного, рsеudомоnаs, рекомбинатными, человеческого

...деградация продукта.Следовательно, температуру культивирования следует понижать от 30+0,5 до 20 ч 0,50 С до начала деградации продукта, т.е, через 15-30 мин после достижения максимальной скорости роста (табл 1).Процесс культивирования следует завершить через 2-3 ч после снижения температуры потому, что после 2,5 й 0,5 ч, но не раньше (табл.2), наступает деградация продукта, Завершение процесса определяется по времени, так как оптическая плотность повышается незначительно.П р.и м е р. Приготавливают 10 л питательной среды для ферментера "В 1 озта 1 Е" емкостью 13,7 л с рабочим объемам 10 л следующего состава, г/л: гидрализат казеина 120 мл/л; гидролизат пекарских дрожжей 5; О-глюкоза 10; сернокислый аммоний 3; фосфорнокислый...

Номер патента: 1703692

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Алексенко, Болотин, Борухов, Бумялис, Гервинскас, Дебабов, Евдонина, Изотова, Козлов, Костров, Лапидус, Лебедева, Лившиц, Машко, Мочульский, Носовская, Плотникова, Подковыров, Рыжавская, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Трухан, Юрин, Янулайтис

МПК: C12N 1/21, C12N 15/23, C12P 21/00 ...

Метки: 1-13, i-интерферона, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерферона, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, фибробластного, человека, штамм

...в 20 мкл -20, 4 мкг полученного таким образом препарата ДНК обрабатывают Кленовским фрагментом ДНК-полимеразы 1 Е.со в указанных условиях для достройки возможно имеющихся одноцепочечных концов молекул до двухцепочечных. Реакцию останавливают фенольной депротеинизацией, нуклеиновые кислоты осаждают этанолом и растворяют в 20 мкл Н 20,Лигирование линейных молекул ДНК с двуцепочечными концами проводят при 16 С в пробе объемом 50 мкл, содержащей 60 мМ трис-НС, рН 7,6, 10 мМ М 9 С 2, 10 мМ дитиотреитол, 4 мМ АТФ, 8 -ный полиэтиленгликоль - 6000, 4 мкг ДНК, 100 ед, ДНК- лигазы Т 4. После завершения реакции пробу разбавляют водой в четыре раза и проводят осаждение нуклеиновых кислот этанолом, 2 мкг растворенной в Н 20 ДНК обрабатывают...

Номер патента: 1698285

Опубликовано: 15.12.1991

Авторы: Башкис, Бумялис, Вилутис, Григишкис, Пунтежис, Римкявичене, Янулайтис

МПК: C12N 1/04

Метки: species, интерферона, консервирования, продуцента, рsеudомоnаs, рекомбинантного, штамма

...Ч(-1)О культуру готовят к консервированию,Для этого в стерильных условиях центрифугируют 400 мл культуральной среды.,осадок клеток ресуспендируют в 200 мл свежей среде указанного состава, добавляютантибиотики и 200 мл стерильного раствора 15;4-ного глицерина, Полученную суспензию клеток разливают по 1 мл вгластмассовые пробирки типа Эппендорфемкостью 1,5 мл. Емкость с пробиркамипомещают в холодильник глубокого ох.лаждения при -20 С на 22-24 ч, а потомперемещают в кельвинэтор и хранят притемпературе (-7075) - (-19 б)С в течение1,5 года.Динамику биосинтеза рекомбинэнтного аинтерферона определяют иммуннымметодом.Результаты экспериментальных исследований приведены в табл,1 и.отображенына чертеже, где нэ графике 5 исходного варианта отмечены...

Номер патента: 1634719

Опубликовано: 15.03.1991

Авторы: Башкис, Бумялис, Вилутис, Григишкис, Пунтежис, Римкявичене, Янулайтис, Яскелявичене

МПК: C12Q 3/00

Метки: бактерий, биосинтеза, периодическим, процессом

...1; и антибиотиков - стрептомицина 0,15 г/л, тетрациклина 0,05 г/л характерно совпадение максимальной скорости роста бактерий и максимального количества синтеэируемого продукта. П ри уменьшении скорости роста начинается спонтанный распад продукта. Тем самым продолжать процесс становится экономически неоправдано, так как теряется от 20 до 78 продукта, Поэтому, определяя скорость роста бактерий, возможно найти точку окончания процесса.П р и м е р, На ферментационной установке с рабочим объемом питательной среды 10 л выращивали бактерии Р.рцбба, Процесс биосинтеза проводили при соблюдении следующих параметров. которые поддерживали автоматически: температура среды 30 +0,5 С; рН среды 7 .0,15 с помощью подпитки раствором с массовой до1634719...

Номер патента: 1599436

Опубликовано: 15.10.1990

Авторы: Башкис, Бумялис, Вилутис, Григишкис

МПК: C12Q 3/00

Метки: аэробных, культивирования, микроорганизмов, полупериодическим, процессом

...то же самое, максимальной скорости роста биомассы. Величина оборотовмешалки на единицу биомассы определяется путем деления сигнала датчикаоборотов мешалки на общее количество биомассы, определяемое как произведение сигналов датчиков объемаФерментационной сРеды и концентрациимикроорганизмов,Система автоматического управления полупериодическим процессом работает следующим образом 364В Ьерментере 4 осуществляется процесс полупериодического культивирования аэробных микроорганизмов, Сигналс датчика 1 рН культуральной средыпоступает на регулятор 2 РН, где срав"нивается с заданным, В случае несовпадения сигналов регулятором 2 вырабатывается сигнал управления, поступающий на исполнительный механизм 3,установленный на линии подачи буферного...