C12N 15/33 — вирусные белки

Номер патента: 1678835

Опубликовано: 23.09.1991

Авторы: Злобин, Плетнев, Шаманин

МПК: C12N 15/33

Метки: выявления, зонд, идентификации, кислоты, комарами, нуклеиновой, переносимых, флавивирусов, фрагмент

...суммарную РНК мозгаВыделение суммарной РНК мозга. Суммарную РНК выделяют экстракциейгорячим кислым Фенолом (60 С, рН 5,2) в присутствии додецилсульфата натрия(5,0-1,0 мас,/объем) с последующим спиртовым осаждением, Осадок РНК собирают центрифугированием 30 мин при 6000 об/мин, Осадок растворяют в 7,54-ном Формальдегиде - 10 мМ Фосфата натрия,рН 7,0, и определяют концентрацию РНК спектрофотометрически, принимая 1 о.е, Ао=10 мкг РНК:Иммобилизация РНК на нитроцеллюлоэных Фильтрах, РНК денатурируют прогревом в 7,54-ном растворе Фор" мальдегида 15 мин при 56 С, эате;.: добавляют раствор 20 цБЯС (3,0 М натрий хлорид - 03 М натрий цйтрат рН 7,0) до концентрации 10 г ЯБС и образцы РНК наносят на нитроцеллюлозные Фильтры. Фильтры сушат при...

Номер патента: 1744110

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 1/21, C12N 15/33, C12N 15/70 ...

Метки: frblv, бактерий, бактериофага, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, оболочки, плазмидная, прод, рекомбинантная, рогатого, скота, слитый, штамм

...50 мМ трис-НС, рН 7,5; 10 мММдС 2, 10 мМ дитиотрейтол, 50 Ы АТР и 10ед, Т 4 ДНК-лигазы, в течение 12 ч при 4 С,Фрагмент инактивируют нагреванием при650 С в течение 15 мин, К реакционной смесидобавляют 100 мкл клеток Е,соИ ВВ 1, обработанных 100 мМ СаС 2 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл), длятрансформации клеток,Отбор клонов осуществляют путем экспресс - выделения ДНК и ее рестрикционного анализа, а также секвенирования.Плазмида с ожидаемой последовательностью получает наименование рГРВ Ч-Р 6,Конструирование рекомбинантнойплазмидной ДНК рЕРВ ЧзР 6,2 мкг плазмиды рРРВ Ч-Г 6, выделенной стандартным методом, расщепляют 3.ед, растриктазы Есо 781 и 3 ед, рестриктазыЗзр 1 в 25 мкл раствора А, содержащего100 мМ трис-НС, рН 7,5; 50 мМ...

Номер патента: 1744111

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Епифанова, Ксензенко, Кулаков, Новикова, Носкова

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: rv7-ii, бактерий, выявления, днк, еsснеriснiа, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, ротавирусов, содержащая, фрагмент, фрагмента, человека, штамм

...мк КиН; АТФ и 1/10 объема поли-А-полимеразы (0,5 мкг,Степень аденилирования определяют по известной методике, Определяют время реакции, необходимое для присоединения 15 - 20 остатков АМФ. Полученный препарат экстрагируют фенолом и осаждают 2,5 объемами спирта.К препарату полиаденилированной РН К в буфере ТЕ добавляют 5 мкг олиго-ОТ 2-в денатурируют 3 мин при 100 С и охлаждают во льду. Синтез кДНК проводят в буфере, содержащем 50 мМ трис-НС 1, рН 8,3, 50 мМ КС 1, 10 мМ МдС 2, 10 мМ ДТТ, 4 мМ пирофосфата натрия, по 0,5 мМ б АТР, б СТР, б 6 ТР, б ТТР, 10 мк Ки Р АТР в объеме реакционной смеси 100 мкл. Добавляют 25 ед,обратной транскриптазы из вируса миелобластоза птиц и инкубируют 2 ч при 42 С,Цепи РНК удаляют щелочным гидролизом (0,25 М...

Номер патента: 1751208

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Бреде, Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: pfrblv, бактерий, бактериофага, белка, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, обо, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рогатого, скота, штамм

...при фильтрыинкубируютсмоноклональны 65 С. После очистки ДНК В 9 И 1 - ВагпН фраг- ми анти- др 51 антителами глАК 14 в развемента на агарозном геле ДНК растворяют в дении 1:500 на буфере ТВЯ, содержащем20 мкл воды, Заполнейие концов проводят 55 50 мМ трис-НС 1, рН 7,5, 0,15 М МаС 1, 0,1%в 100 мкл раствора Б, содержащего 0,05 М тритон Х 100, 1% БСА, в течение 15 ч притрис-НС 1, рН 7,5, 0,01 М 9 С 12, 0,01 М дитиот С, После трехкратной отмывки буферомрейтол,0,025 М МаС 1, 100 мкМ сАТР, ОСТР, ТВЯ фильтры инкубируют 2 ч при 200 С снТТ 1- и ОСТР и 10 ед, ДНК-полимеразы Е. коньюгатом пероксидазы с антителами просоИ (фрагмент Кленова, в течение 1 ч при тив иммуноглобулинов мыши в разведении1:500. Фильтры отмывают буфером ТВЯ (3 - но. Иньекции...

Номер патента: 1751209

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстман, Пумпен, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/33, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: 24-5, бактерий, белка, белок, вируса, гепатита, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, кор-ант, кор-антигена, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, слитого, слитый, человека, штамм

...клеток к реакци-онной смеси добавляют 100 мкл клеток Е.соП ЯВ 1, обработанных 0,1 М СаС 12 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл).9Отбор клоновосуществляют путем рестрикционного анализа плазмидной ДНК,выделенной экспресс-методом. Плаэмида сожидаембй рестрикционной картой получает наименование рНИ 24-5,2. Штамм-продуцент Е. соИ К 802 (рН24 - 5),Штамм-продуцейт получают трансформацией клеток Е. со 11 К 802 рекомбинантнойплазмидной рНИ 24-5, Клетки выращиваютдо оптической плотности ОП 65 о 4-5 в солевой среде М 9 с добавкой, г/л: каэаминовыекислоты 10; глюкоза 2; ампициллин. 0,02,Клетки собирают центрифугированием и лизируют в четырехкратном обьеме буфера,содержащего 0,05 М трис-НС 1, рН 8,0; 0,15М ИаС 1, 0,1% тритон Х 100,...

Номер патента: 1679798

Опубликовано: 27.08.1995

Авторы: Горн, Плетнев, Пугачев, Ямщиков

МПК: C12N 1/21, C12N 15/33, C12N 15/52 ...

Метки: 1-белок, вируса, галактозидаза-ns, гибридный, днк, клещевого, кодирующая, конструирования, плазмидная, полипептид, рекомбинантная, энцефалита

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pUR 290 S E, кодирующая гибридный полипептид галактозидаза NSI-белок вируса клещевого энцефалита, размером 6447 п.о. и мол.м. 4,25 МД, содержащая: Hin d III Sal I-фрагмент ДНК плазмиды pUR 290 размером 5200 п.о. Hind III-конец которого достроен фрагментом Кленова ДНК-полимеразы 1 E.coli; Alu I Msp I-фрагмент ДНК-плазмиды pTBE 2 размером 109 п.о. Alu I-конец которого заменен на Sal I-конец; Msp I Cfr 10 I-фрагмент ДНК-вируса клещевого энцефалита размером 572 п.о. Cfr 10 I Hind III фрагмент ДНК-плазмиды p621-11 размером 540 п.о. Hind III EcoRI синтетический фрагмент ДНК,...

Номер патента: 1822202

Опубликовано: 27.06.1996

Авторы: Горн, Плетнев, Пугачев, Ямщиков

МПК: C12N 15/33

Метки: pur2n, белка, вируса, днк, клещевого, кодирующая, конструирования, короткую, плазмидная, рекомбинантная, форму, энцефалита

...рцС 188 Е длиной 1250 п.н Са 1-Ря 1- и Рз(1-ЕсоК 1-фрагментов плазмиды рВК 327 и синтетического С 1 а 1-БаП-фрагмента ДНК, лигируют ДНК-лигазой фага Т 4, Лига зной смесью трансформируют клетки Е.со 11.Трансформанты выращивают на чашках Петри, содержащих 50 мг/л ампициллина, в течение ночи при 37 С. Клоны, содержащие искомый фрагмент, отыскивают методом ДНК-ДНК-гибридизации, анализируют при помощи рестриктного анализа, отбирают плазмиду рВК 327 ХБ 1, которая содержит ген полноразмерной формы белка Х 51 ВКЭ, пригодный для экспрессии в бактериальных клетках и фланкированный сайтами расщепления рестриктаз Есо 1 с 1 и С 1 а 1.1 мкг ДНК, состоящей из эквимолярного количества Ба 11-Есор-фрагмента плазмиды рТ 185 В длиной 1104 п.н., С 1 а...