C12N 15/18 — гормоны роста

Рекомбинатная плазмидная днк рвgнтrр 3, кодирующая гормон роста крупного рогатого скота, и штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент гормона роста крупного рогатого скота

Загрузка...

Номер патента: 1708847

Опубликовано: 30.01.1992

Авторы: Голова, Рубцов, Баев, Чернов, Чупеева, Позмогова, Скрябин, Садиев, Горбулев, Свердлова, Шульга

МПК: C12N 15/18, C12N 1/21

Метки: бактерий, плазмидная, гормон, гормона, штамм, кодирующая, скота, крупного, рекомбинатная, днк, продуцент, роста, рвgнтrр, рогатого, еsснеriснiа

...20 вМ, Реакционную смесь экстрагируют равным объемом смеси фенол:хлороформ. ДНК из водной фазы осаждают спиртом, высушивают, растворяют в водефракционируют в 1 Д агарозном геле, Нужный фрагмент ДНК (Рчц И - Есой - фрагмент размером 680 п,о.) элюируют из легкоплавкой агарозы с помощью стандартной процедуры осаждают спиртом, высушивают и растворяют в воде,0,5 мкг Рчц 1 - Есой - фрагмента инкубируют в 10 мкл срднесолевого буфера с 5 ед. рестриктазы Н 1 пб И 1 в течение 1 ч при 37 С, ДНК из реакционной смеси осаждают спиртом, высушивают и растворяют в воде.Для получения вектора из плазмиды зуп/рВй 327 4 мкг ДНК гидролизуют в 20 мкл инкубационной смеси на основе среднесолевого буфера, содеожащей 15 ед. Рчц И и 20 ед, Н 1 пб 1 И, в...

Фрагмент днк alv 7, кодирующий синтез альфа-амилазы, способ его конструирования и штамм бактерий bacillus suвтilis продуцент альфа-амилазы

Загрузка...

Номер патента: 1717633

Опубликовано: 07.03.1992

Авторы: Орлова, Рябченко, Попов, Народицкая, Стеркин, Вольфович, Козлов, Болотин, Сорокин, Йомантас, Дебабов, Стронгин, Баев

МПК: C12N 15/18

Метки: синтез, штамм, кодирующий, бактерий, продуцент, конструирования, фрагмент, suвтilis, bacillus, днк, альфа-амилазы

...ТемпераДНК А Ч произведена оптимальная под- турный оптимум для а-амилазы, кодируе.стыковкапоследовательностиДНК,кодиру- мой фрагментом ДНК А 1.Ч, составляет5 10 15 20 30 40 45 50 55 75-85"С. Меньшая продуктивность штамма, синтезирующего термостабильную а -амилазу связана с меньшей удельной активностью термостабильного белка из В.ИсЬепИогглз. измеренной в неоптимальных условиях (37 С).Б р и м е р 1, Конструирование фрагмента ДНК АУ/7, кодирующего синтез термостабильной а -амилазы,Клетки бактерий В.мЬИз (рЧ 31), содержащие плазмидную ДНК рЧЯ 1, выращивают в 10 мл 1-бульона (триптон 10 г/л; дрожжевой экстракт 5 г/л; ЙаС 10 г/л; рН 7,5) с добавлением эзоитромицина (0,02 мг/мл) до титра 1 х 10 кл/мл, Клетки осаждают центрифугированием...

Фрагмент днк, кодирующий гормон роста овцы, рекомбинантная плазмидная днк роgнтrр11, кодирующая синтез гормона роста овцы, штамм бактерий еsснеriснiа coli продуцент гормона роста овцы

Загрузка...

Номер патента: 1730150

Опубликовано: 30.04.1992

Авторы: Горбулев, Садиев, Рубцов, Скрябин, Баев, Сагадиев, Шульга

МПК: C12N 1/21, C12N 15/18

Метки: продуцент, плазмидная, синтез, бактерий, гормона, еsснеriснiа, овцы, фрагмент, роста, штамм, кодирующий, гормон, роgнтrр11, кодирующая, рекомбинантная, днк

...работы отобрали плазмиду, содержащую Есой 1-Н 1 пб И 1-фрагмент с геном ГР КРС размером 601 п.ообозначенную рВОН Ва 112;П р и.м е р 2. Получение фрагмента ДНК,кодирующего ГР овцы.А) Клонирование фрагмента ДНК, коди рующего ГР КРС, в векторе М 13(фиг, 6).10 мкг плазмидной ДНК рВОНВа 12гидролизовали рестриктазами Есой 1 и НпбИ 1 в 50 мкл инкубационной смеси следующего состава: 50 вМ йаС 1, 10 вМ 5 трисНС 1. рН 7,5,10 вМ МяС 2, 1 еМ дитиот-рейтола(ДТТ), 10 ед; рестриктазы Есойи 10 ед. рестриктазы Н 1 пбИ, в течение 2 ч при 37 С.Проводили разделениефрагментов ДНКв 1агарозном геле и выделяли из геля фрагмент раз мером 601 п,оиспользуя стандартный метод.5.мкг ДНК репликативной формы бактериофага М 13 вр 8 гидролизовалирестриктазами...

Способ получения днк,кодирующей гормон роста лосося, способ конст-ния промежуточной рекомбинантной плазмидной днк, содержащей днк-фрагмент, кодирующий гормон роста лосося, для получения плазмид ps gh1, ps gh3,

Загрузка...

Номер патента: 1825376

Опубликовано: 30.06.1993

Авторы: Сусуму, Тамио, Сейга, Акико, Мориюки

МПК: C12N 15/70, C12N 15/18

Метки: днк, рекомбинантной, днк,кодирующей, содержащей, плазмид, роста, днк-фрагмент, промежуточной, плазмидной, гормон, конст-ния, кодирующий, лосося

...экстрагируют смесью фенола с хлороформом и осаждают этанолом с получением 0,5 пмоля кДНК-вектора-затравки ДНК, связанной с (дЦ) цепями. Затем 0,08 пмоля ДНК и 0,16 пмоля упомянутой связующей ДНК добавляют к 40 мл раствора, содержащего 10 мМ трис-НС (рН 7,5), 0,1 М йаС и 1 мМ ЭДТА, и инкубируют при 65 С, 42 С и 0 С в течение соответственно 10, 25 и 30 мин. Реакционный раствор доводят до 400 мл (полный объем) раствора. содержащего 20 мМ трис-НС 1 (рН 7,5) 4 мМ МцС 12, 10 мМ (НН 4)2504, 0,1 М КС 1 и 0,1 мМ Р.НАД, К реакционному раствору добавляют 10 единиц ДНК-лигазы Езсег 1 сЬ 1 а со 11 и инкубируют в течение 1 сут при 11 С. Реакционный раствор доводят до раствора, содержащего 40 мкМ дНТФ и 0,15 мкМ /3-НАД. Затем добавляют пять единиц...

Способ получения рекомбинантной плазмидной днк, кодирующей бычий гормон роста, способ биосинтеза производного бычьего гормона роста

Загрузка...

Номер патента: 1838412

Опубликовано: 30.08.1993

Авторы: Рональд, Хансен, Бригитте

МПК: C12N 15/70, C12N 15/18

Метки: бычьего, плазмидной, гормона, рекомбинантной, кодирующей, производного, биосинтеза, роста, днк, бычий, гормон

...трансформантыэкспрессируют вышеупомянутое производное МЕТ бГР с высокими уровнями, Поскольку плазмида рАТ содержит15 термоиндуцируемый репликон неконтролируемого роста, максимальная экспрессияжелаемого продукта производного бГР происходит при культивировании при температурах около 37 С,20 П р и м е р 9. Конструирование плазми 25 ДНК; ССС ЛАС ССТ СТССТ 3ССС ТТС ССЛ С 515 30 35 40 ки, и затем культивируют для последующего продуцирования и выделения плазмиды45 рАЯР 1. Как показано ЯОЯ-гель-электрофо 50 55 В, Лигирование и трансформация,Примерно 20 пикомолей линкернойДНК примера 7,Б, 1 мкг перевара рММ 608примера 7,А, 0,5 мкг ВаоН 1-ЕсоВ 1 фрагмента примерно 10,2 3 сЬ плазмиды рСЕ 101(полученного в соответствии с методикойпримера 2;Б, с...

Рекомбинантная плазмидная днк psth 2191, кодирующая синтез соматотропина человека, и штамм escherichia coli продуцент соматотропина человека

Номер патента: 1387414

Опубликовано: 30.12.1994

Авторы: Шляпников, Рубцов, Баев, Чернов, Скрябин, Свердлова, Чупеева

МПК: C12N 15/18, A61K 35/55

Метки: 2191, продуцент, днк, плазмидная, соматотропина, синтез, штамм, escherichia, кодирующая, рекомбинантная, человека

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pSTH 2191, кодирующая синтез соматотропина человека, размером 6,0 т.п.о., состоящая из: плазмидной ДНК вектора pBR 322 размером 4,14 т.п.о.; фрагмента ДНК, содержащего trp-промотор E.coli, размером 1,17 т.п.о., EcoRI-Hind III-фрагмента реконструированной к ДНК соматотропина человека размером 713 п.о., 1 участка расщепления рестриктазы EcoRI; 1 участка расщепления рестриктазы Hind III, расположенного на расстоянии 713 п.о. по часовой стрелке от EcoRI-сайта, 1 участка расщепления рестриктазы BamHI, расположенного на расстоянии 1059 п.о. по часовой стрелке от EcoRI-сайта, 1 участка расщепления рестриктазы SalGl, расположенного на расстоянии 1334 п.о. по часовой стрелке от EcoRI-сайта, 2 участков расщепления...

Рекомбинантные плазмидные днк, кодирующие синтез производных соматотропного гормона человека, способ их конструирования, штаммы escherichia coli, содержащие эти плазмиды продуценты производных соматотропного го

Номер патента: 1248280

Опубликовано: 09.02.1995

Авторы: Парсаданян, Рубцов, Чернов, Чупеева, Федорова, Скрябин, Баев, Свердлова, Звонок

МПК: C12N 15/18

Метки: кодирующие, синтез, днк, человека, продуценты, соматотропного, escherichia, конструирования, плазмиды, содержащие, рекомбинантные, coli, гормона, эти, плазмидные, штаммы, производных

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pSTH 38 + 4/P - lac размером 5,3 тыс. пар оснований, обеспечивающая синтез Мет-Глу-Сер-Ала-соматотропина человека, которая состоит из:большого Hind III - EcoRI-фрагмента векторной плазмиды pBR 322 размером 4331 пар оснований,EcoRI-фрагмента, содержащего двойной lac UV - 5 - промотор, размером 285 пар оснований,EcoRI - Hind III-фрагмента реконструированной кДНК соматотропина человека размером 726 пар оснований; содержит:2 участка расщепления рестриктазы EcoRI, расположенных на расстоянии 285 пар оснований друг от друга,1 участок расщепления рестриктазы Hind III, расположенный на расстоянии 726 пар оснований по часовой стрелке от правого EcoRI-сайта,1 участок расщепления...

Способ получения биомассы бактерий, содержащих гормон роста человека

Номер патента: 1269511

Опубликовано: 27.06.1999

Авторы: Санцевич, Лузина, Скрябин, Козловский, Янулайтис, Рубцов, Баев, Кадомцева, Ежов, Башкис, Парсаданян

МПК: C12N 15/18, C12N 1/20

Метки: бактерий, биомассы, роста, человека, содержащих, гормон

Способ получения биомассы бактерий, содержащих гормон роста человека, включающий выращивание бактерий Escherichia coli, несущих плазмиды, в аэробных условиях на питательной среде с источниками углерода, азота и фосфора, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода биомассы, выращивание культуры осуществляют на среде, содержащей следующие компоненты, г/л: глюкоза 5 - 20, бакто-пептон 10 - 20, MgCl2 6H2O 1 - 2, сульфат аммония 5 - 10, KH2PO4 4 - 9, Na2HPO4 12H2O 20 - 50, дрожжевой...

Рекомбинантная плазмидная днк pbatam2, кодирующая альфа амилазу bacillus licheniformis, штамм бактерий bacillus amyloliquefaciens продуцент альфа-амилазы

Номер патента: 1782029

Опубликовано: 10.07.1999

Авторы: Орлова, Рябченко, Болотин, Стеркин, Народицкая, Сорокин, Козлов, Баев, Вольфович, Иомантас, Дебабов, Стронгин, Попов

МПК: C12N 1/21, C12N 15/18

Метки: амилазу, рекомбинантная, pbatam2, кодирующая, штамм, плазмидная, бактерий, bacillus, продуцент, альфа, amyloliquefaciens, альфа-амилазы, licheniformis, днк

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК рВАТАМ2, кодирующая альфа-амилазу Bacillus licheniformis, размером 9 т.п.н., содержащая:- HindIII-HindIII - ДНК плазмиды рВА91, размером 4,7 т.п.н.;- HindIII-HindIII - фрагмент ДНК плазмиды pLV7, размером 4,3 т.п.н.;- два участка расщепления рестриктазой HindIII;- один участок расщепления рестриктазой BamH1;- amy-ген, кодирующий синтез термостабильной амилазы B.Licheni-formis;- ermC - ген, детерминирующий устойчивость клеток к эритромицину;- par - область, обеспечивающая стабильное наследование плазмиды.2. Штамм бактерий Bacillus...