Романчикова

Номер патента: 1830945

Опубликовано: 10.08.1999

Авторы: Авот, Грен, Мясникова, Останин, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 15/26, C12N 15/81

Метки: alphoil, cerevisiae, saccharomyces, биосинтез, днк, дрожжах, дрожжей, интерлейкина-2, конструирования, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, секреторный, секрецию, человеческого, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК plDB(ALPHOIL), обеспечивающая биосинтез и секрецию человеческого интерлейкина-2 в дрожжах, мол.м. 5,3 мДа и размером -8,1 т.п.о., содержащая: - Hind III - Sal I - фрагмент плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора plDB 207 размером 6,3 т.п. о. , включающий бактериальный ген устойчивости к ампициллину, бактериальную область инициации репликации, дрожжевой ген LEU2, а также фрагмент дрожжевой двумикронной плазмиды, обеспечивающий репликацию плазмиды в клетках дрожжей; - Sal I - Bam H1 - фрагмент полилинкера плазмиды pUC 19 размером 20 п.о.; - Bam H1 - Sau 3A - фрагмент промотора гена PHO5 дрожжей плазмиды pVY 18 размером 0,35 т.п.о. с...

Номер патента: 1770359

Опубликовано: 23.10.1992

Авторы: Авот, Грен, Мясников, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 1/19, C12N 15/26

Метки: cereuisial, msil, sасснаrомuсеs, sасснаrомyсеs, днк, дрожжей, интерлейкина-2, клетках, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...фаза Т 4 и проводят инкубацию в течение ночи при 4 С, 20 25 30 ампициллина Из полученных описанным способом отдельных клонов трансформантов выделяют плазмидную ДНК методом, аналогичным методу выделения плазмиды рМЯ 46, с тем отличием, что выращивание клетокЕ,сове; дут в 10 мл питательной среды и все объемы растворов соответственно уменьшают в 50 раз по сравнению с указанными. Кроме того, вместо центрифугирования в растворе 35 40 50 55 51015 Полученной таким образом лигазной смесью трансформируют клетки Е.со НВ 101. Для этого клетки Е,со выращивают в 100 мл средыВ при 37 С и интенсивном перемешивании до достижения оптической плотности при 600 нм 0,4 - 0,5. Культуру охлаждают на льду, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10...

Номер патента: 1703693

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Авот, Грен, Дебабов, Козлов, Косиков, Костров, Мазель, Машко, Мочульский, Носовская, Романчикова, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Трухан, Циманис, Черновская, Юрин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: 2-19, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...ДНК длиной =750 п.нвырезает и проводят элюцию ДНК. Для достройки о,;ноцепочечных концов ДНК с помощью Кленовского фрагмента ДНК-полимеразы 1 Е со, выделенный из геля фрагмент обоа;э; .пгают в пробе объемом 20 мкл, содер,кэ.,ей 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 10 мМ МдС 1:, по ЗО мкМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов Реакцию останавливают прогреванием, ДНК из смеси переосаждают этанолом и растворяют в 20 мкл,Полученный препарат фрагмента плазмиды рАА 1213-23 В используют на дальнейших этапах конструирования для интеграции кодирующей части интерлейкиначеловека в векторную плазмиду рВВ 124 В.3 мкг ДНК плазмиды рВВ 124 В расщепляют рестриктазой ВагпН в пробе обьемс . 12 мкл, содержащей буфер для рестрикци:- Реакцию останавливают фенольной...