C12N 15/51 — вирусы гепатита

Номер патента: 1625332

Опубликовано: 30.01.1991

Авторы: "пьер, Ив, Мари-Луиз, Рольф, Элиан

МПК: C12N 15/51

Метки: иммуногенными, обладающего, полипептида, свойствами

...рБЧБ ЙЬгг в СНО. Трансформируют клетки СНО ЙЬКг плазмидой р 878 ЙИг, продукт. этих клеток испытывают методом радиоиммуноанализа (КТА) в поверхностном слое клеточных культур. 603 клоновйМг представляет собой НВБ Асф, Скорость синтеза НВЯ А 8 была относительно. низкой между 1 и 20 мг/10клеток в течение 24 ч.1625332 5 10 15 20 25 30 35 40 45 идентична иммунологической силе вак 50 55 Увеличение последовательностейНВБ.Культивирование клонов СНОНВБ Ая в присутствии метотриксате(МТХ), аналога фолиевой кислоты вингибиторе ЙЫт обуславливает увеличение числа воспроизведений генаЙМг, что приводит к увеличению количества Фермента ЙИг,Концентрации МТХ составляют 50,100 или 140 нМ на первом этапе и1,5, 10 или 25 мкмоль на втором этапе.Суммарно...

Номер патента: 1711676

Опубликовано: 07.02.1992

Авторы: Жан, Ренате, Ханс

МПК: C12N 15/10, C12N 15/51

Метки: гепатита, диагностики, днк

...с ДНК-вектором 2 мкг ДНК лямбда-фагов 1149 вместе с 2-мя единицами ЕсоР(4 ед./мкл) в общем реакционном объеме 6 мкл/инкубационный буфер по данным изготовителя) инкубируют 1 ч при 37 С. Затем фермент инактивируют путем 10-минутного нагревания при 68 С. Этот раствор лигируют с 3 мкл маркированной ДНК, которая выделена как описано в примере 3, 1 мкл 5 мМ АТР и 1 ед. Т 4-ДНК- лигазы при комнатной температуре, 4 мкл этой реакционной смеси упаковывают в оболочки лямбда-фагов. Этими упакованными фагами инфицируют штамм ЕзспегсЫа со 1 ММ 514, Для скрининга на наличие встроенной ДНК примерно 10 фагов наносят на пластины для скрининга размером 22 х 22 см и инкубируют в течение ночи при 37 С. ДН К-фаги переносят на фильтр из нитроцеллюлозы путем...

Номер патента: 1713930

Опубликовано: 23.02.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Лосева, Озолс, Осе, Петровский, Пумпен, Пушко, Цибиногин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: 1-55, аминокислот, бактерий, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, концевых, кор-антигенвируса, лишенный, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, штамм, экспонированным, эпитопом

...и инкубируют 30 мин при . 4 С, Лизат осветляют центрифугированием 30(10 000 д, 4 С, центрифуга). НВс Ад Ь - рге 52 (1-55) очищают следующим образом, Ли. зат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВс Ад Ь - рге 52 (1-55) собирают в осадке, полученном при 30% 35 насыщения. сульфатом аммония. Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0;0,15 М йаС, 0,1 тритоне Х 100 до конечйой концентрации белка 25-50 мг/мли 6-7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефа-. 40 розой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную .тем же буфером, но без тритона Х 100, Фрак- ции. проявляющие НВсАд-активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентриро вания переосаждением 50%-ным сульфатом аммония.Определение...

Номер патента: 1740418

Опубликовано: 15.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Лосева, Озолс, Осе, Пумпен, Пушко, Цибиногин

МПК: C12N 15/10, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: pgcs1-39, s1(20-68, аминокислот, бактерии, вируса, гепатита, днк, конструирования, кор-антиг, плазмидная, поверхности, продуцент, рекомбинантная, с-концевых, штамм, экспонированным, эпитопом

...30 мин при 4 С. Лизат осветляют центрифугированием (10 000 хд, 4 С), НВсАд Л-ргеЯ(20-68) очищают следующим образом. Лизат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВсАд Ь-ргеЯ(20-68) собирают в осадке, полученном при 300 насыщения сульфатом аммония, Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0, 0,15 йаС, 0,1 отритоне Х 100 до конечной концентрации белка 25 - 50 мкг/мл, и 6 - 7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефарозой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х 100. Фракции, проявляющие НВсАд-активность собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50% сульфатом аммония,3, Определение НВсАд-активности методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью...

Номер патента: 1742331

Опубликовано: 23.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Озолс, Осе, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: 51-3, 56-103, антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, кор, крупного, лейкоза, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, рогатого, скота, экспонированным, эпитопом

...разбавляют в 4 раза дистиллированной водой и подвергаютф ра кциони рован и ю сульфатом аммония. 20Н ВсАд Ь - ВО/др 51(56 - 103) собирают восадке, полученном при 30 насыщениясульфатом аммония. Осадок растворяют в0,05 М трис-НС 1, рН 8,0, 0.15 М йаО, 0,1тритоне Хдо конечной концентрации .25белка 25 - 50 мг/мл, и 2 - 4 мл этого раствора наносят на колонку с сефарозой (1,6 х 100см), уравновешенную тем же буфером, нобез тритона Х. Фракции, проявляющиеНВсАд-активность, собирают и используют 30либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-нымсульфатом аммония,П р и м е р 3. Определение НВсАд-активности методом РИД. 35Титр НВсАд определяют с помощью радиальной иммунодиффузии по Ухтерлони,Для этого готовят двухкратные...

Номер патента: 1746887

Опубликовано: 07.07.1992

Авторы: Мишель, Нигел, Тереза

МПК: C12N 15/30, C12N 15/51

Метки: гибридного, полипептида, содержащего

...синтетический рге 8 2 пептид: 0,08 мкгСинтетический рге 8 2 пептид:0,08 мкгрге 2-8 частица дрожжей, управляемая Я Составитель Н.КузенковаТехред М.Моргентал Корректор О.Кундрикзуется следующей аминокислотной последовательностью; хоМеР 61 п-Тгр-Азп-Бег-ТЬг-Аа-РЬе - Нз - 618-А 1 а.ецп-Азр-Рго-Аг 9-.а-А Г 9-61 у.ец-Туг-Р пе-Р го-А 1 ауу-Яего -Бег-Зегу-ТЬг-Ча 1-Азп-Рго-Аа-РгР Азп-Ие - А 1 а-Яег-Н 1 з-Ие-Яег-Зег-Зег-бег - Аа -Аг 9-ТЬгу-Аз р-Рго-Ча 1-ТЬг-Азп.Функциональным производным Рге 82-3 согласно предлагаемому способу является производное, у которого аминокислота аланин (6 СТ) в положении 45 модифицирована с помощью сайт-специфического мутагенеза на треонин (АСТ),Рекомбинантная плазмидная ДНК состоит из последовательности, кодирующей...

Номер патента: 1751209

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстман, Пумпен, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/33, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: 24-5, бактерий, белка, белок, вируса, гепатита, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, кор-ант, кор-антигена, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, слитого, слитый, человека, штамм

...клеток к реакци-онной смеси добавляют 100 мкл клеток Е.соП ЯВ 1, обработанных 0,1 М СаС 12 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл).9Отбор клоновосуществляют путем рестрикционного анализа плазмидной ДНК,выделенной экспресс-методом. Плаэмида сожидаембй рестрикционной картой получает наименование рНИ 24-5,2. Штамм-продуцент Е. соИ К 802 (рН24 - 5),Штамм-продуцейт получают трансформацией клеток Е. со 11 К 802 рекомбинантнойплазмидной рНИ 24-5, Клетки выращиваютдо оптической плотности ОП 65 о 4-5 в солевой среде М 9 с добавкой, г/л: каэаминовыекислоты 10; глюкоза 2; ампициллин. 0,02,Клетки собирают центрифугированием и лизируют в четырехкратном обьеме буфера,содержащего 0,05 М трис-НС 1, рН 8,0; 0,15М ИаС 1, 0,1% тритон Х 100,...

Номер патента: 1751210

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстманн, Пумпен, Пушко, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/48, C12N 15/51, C12N 5/10 ...

Метки: 41-22, антиген, бакт, белка, вируса, гепатита, днк, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, кор, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, фрагментом, человека, штамм, экспонированным

...С 1 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х. Фракции, проявляющие РВсАд - активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-ным сульфатом аммония.3. Определение НВсАд - активности Методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью рэдиал ьной иммунодиффузии (Р ИД), Дл я этого готовят двукратные серийные разведения клеточного лизата и титруют против анти-НВс антител человека, В качестве 510 стандарта используют очищенный НВсАд, полученный из рекомбинантных бактерий (1 мг/мл). Результаты титрования методом х 0,75 мм, Злектрофорез проводят в теЗО чение 15 ч при силе тока 7 мА. После злектрофореэа белки переносят нэ нитроцеллюлозные фильтры, инкубируют с моноклональными...

Номер патента: 1788012

Опубликовано: 15.01.1993

Авторы: Беляев, Дмитриев, Муратов

МПК: C07K 15/00, C12N 15/51, C12N 15/86 ...

Метки: антигено, вируса, гепатита, корового, осповакцины, продуцент, рекомбинатного, штамм

...штамма ч 7,5 С, 17880125 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Индукцию специфического антителообразования (анти-Н В-антител) изучают,сравнивая иммунизацию кроликов вирусным рекомбинантом ч 7,5 С в сравнении симмунизацией ВОВ штамма ЛИВП вирусным методом накожной скарификации в дозе 2 х 10 БОЕ/животное, Взятие кровипроводят до иммунизации и через 2, 3, 4, 6и 11 недель после нее,Анализ полученных сывороток на наличие антител против НВАд проводят прямым и конкурентным иммуноферментнымметодами, Для этого НВ,Ад сорбируют влунках 96-луночного планшета, затем добавляют разведения сывороток и инкубируют в течение 18 часов при 20 С, Послеинкубации лунки промывают и проявляютсвязавшиеся антитела коньюгатом белка А спероксидазой хрена с...

Номер патента: 1651555

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Беляев, Дмитриев, Рукавишников, Синяков

МПК: C12N 15/51, C12N 15/85

Метки: антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, плазмидная, рекомбинантная

...наличие антигена вируса гепатита В иммунофер.ментным методом с пероксидазой хрена,при этом в качестве контроля сраонения ис 15,пользуют рекомбинантный НВсА 9, полученный в Е.со 1. Во всех пробах обнаруженантиген, причем уровень экспоессии последнего составляет 2000 нг на 10 инфици.рованных клеток СЧ- за 48 ч при полном20 цитопатическом действии, что позволяетрассматривать полученную плазмиднуюДНК как субстанцию, потенциально пригодную для изготовления вакцины гротив гепатита В,25 П р и м е р 3. Клеточный иммунный ответопределяют с помощью общепринятой реакции бласттрансформации лимфоцитов(РБТЛ), Для этого иммуниэируют подкожнов корень хвоста линейных мышей ВА 1. В/ с30 массой 8-10 г дозой 2-4 х 10 о,о. е/мышь,Спленоциты выделяют на...

Номер патента: 1623207

Опубликовано: 15.03.1994

Авторы: Арман, Грановский, Чеперегин

МПК: C12N 1/19, C12N 15/51

Метки: accharomy, cerevisiae, hbsag, pcca7, антиген, антигена, вируса, гепатита, днк, дрожжей, кодирующая, плазмидная, поверхностного, поверхностный, продуцент, рекомбинантная, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pCGA7, кодирующая поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg), мол. м. 5,3 МДа и размером 8,05 т. п. о. , содержащая Pst I - Bam HI - фрагмент вектора pUC19 размером 2,67 т. п. о. , Bam HI-Sal GI - фрагмент с промотором дрожжевого гена PH05 размером 0,53 т. п. о. , Xho I - Bam HI - фрагмент ДНК вируса гепатита B геном HBsAg размером 1,28 т. п. о. , -Bam HI - Pst I - фрагмент с терминаторной областью дрожжевого гена PH05 размером 0,37 т. п. о. ; -Hind III - Hind III - фрагмент дрожжевой ДНК с геном LEV2 и ori - репликации 2 мкм плазмиды (3,2 т. п. о. ); гены и регуляторные участки:- LEU -2-ген, обеспечивающий синтез лейцина;- HBsAg -ген поверхностного антигена вируса гепатита B;-...

Номер патента: 1524484

Опубликовано: 15.03.1994

Авторы: Арман, Грановский, Легчилина

МПК: C12N 1/21, C12N 15/51

Метки: cerevisial, hbsag, saccharomyces, антигена, белка, вируса, гена, гепатита, дрожжей, поверхностного, продуцент, штамм

1. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ У-754 - продуцент белка гена поверхностного антигена (HBsAg) вируса гепатита B.2. Способ получения штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae - продуцента белка гена поверхностного антигена (HBsAg) вируса гепатита B путем скрещивания, отбора по признаку гетерозиса, трансформации и селекции гибридов по продуктивности белка HBsAg, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода белка HBsAg за счет стабилизации системы клетка - плазмида, плазмидой pNMVG 39 - 54 трансформируют линии клеток, полученные скрещиванием штаммов S cerevisiae ДВУ 746 и 1R 22В, селекцию проводят по признакам гетерозиса, митотической "сверхстабильности" плазмиды и повышенной продуктивности белка HBsAg и отбирают...

Номер патента: 1380209

Опубликовано: 30.12.1994

Авторы: Ажикина, Арсенян, Балаян, Василенко, Грабко, Дроздов, Кусов, Насташенко, Овчинников, Петров, Приходько, Рохлина, Свердлов, Царев, Чижиков

МПК: C12N 15/51

Метки: 291-hav, антигенных, вируса, галактозидазой, гепатита, гибридного, детерминант, днк, кодирующая, плазмидная, полипептида, рекомбинантная, синтез

РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PUR 291-HAV 22, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА АНТИГЕННЫХ ДЕТЕРМИНАНТ ВИРУСА ГЕПАТИТА А С -ГАЛАКТОЗИДАЗОЙ, имеющая длину 5589 п.о. и содержащая: Pst - линеаризованную плазмиду pUR 291 с промотором, оператором и структурным геном полной -галактозидазы; последовательность генома вируса гепатита А длиной 389 п.о., кодирующую белок VPI с 4 по 133 аминокислоту и локализованную с 5167 по 5556 п.о. влево от EcoRI-сайта, ген устойчивости к ампицилину в качестве генетического маркера, участки узнавания уникальными эндонуклеазами рестрикции, расположенные на следующих расстояниях...

Номер патента: 1380211

Опубликовано: 30.12.1994

Авторы: Ажикина, Арсенян, Балаян, Василенко, Грабко, Дроздов, Кусов, Насташенко, Овчинников, Петров, Приходько, Рохлина, Свердлов, Царев, Чижиков

МПК: C12N 15/51

Метки: антигенных, вируса, галактозидазой, гепатита, гибридного, детерминант, днк, кодирующая, плазмидная, полипептида, рекомбинантная, синтез

РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PUR 292 - HAV 23, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА АНТИГЕННЫХ ДЕТЕРМИНАНТ ВИРУСА ГЕПАТИТА А С -ГАЛАКТОЗИДАЗОЙ, имеющая длину 8572 п.о. и содержащая Pst-линеаризованную плазмиду pUR 292, с промотором, оператором и структурным геном полной -галактозидазы; последовательность генома вируса гепатита А длиной 3372 п. о. , кодирующую синтез непрерывного полипептида с частью белка VP4 (с 38 аминокислоты), белков VP2, VP3, VP1 и некоторых неструктурных белков (по 11-67 аминокислоту), ген устойчивости к ампицилину в качестве генетического маркера, участок узнавания уникальной...

Номер патента: 1354709

Опубликовано: 27.02.1995

Авторы: Альтштейн, Анджапаридзе, Антонова, Баев, Бендукидзе, Городецкий, Захарова, Кряжевская, Пашвыкина, Фодор, Чернос

МПК: C12N 15/51

Метки: pvax2, антиген, антигена, вируса, гена, геноме, гепатита, днк, осповакцины, переноса, плазмидная, поверхностного, поверхностный, рекомбинантная, штамм, экспрессии, экспрессирующий

РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PVAX2 ДЛЯ ПЕРЕНОСА И ЭКСПРЕССИИ В ГЕНОМЕ ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ ГЕНА ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА ГЕПАТИТА В И ШТАММ ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИЙ ПОВЕРХНОСТНЫЙ АНТИГЕН ВИРУСА ГЕПАТИТА В.1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pV2x2 для переноса и экспрессии в геноме вируса осповакцины гена поверхностного антигена вируса гепатита В имеет размеры 5,8 т.п.о. и состоит из следующих элементов: Xho I - BamHI - фрагмента плазмиды pHBV320, содержащего ген поверхностного антигена вируса гепатита В (1,2 т.п.о.); вектора pVAR15 (4,5 т.п.о.), содержащего Hind III - Hind II фрагмент плазмиды pBR322 RI несущий ген устойчивости к ампициллину и репликон...

Номер патента: 1515698

Опубликовано: 10.09.1995

Авторы: Гибадулин, Гродницкая, Денисова, Дзюбенко, Долгушина, Лидеман

МПК: C12N 1/21, C12N 15/51

Метки: вируса, гепатита, днк, кодирующая, осповакцины, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК rLD 206, кодирующая синтез HBs Ag вируса гепатита В, мол.м. 7,3 МД, размером 11,1 т.п.о. содержащая плазмидную ДНК вектора RUI размером 7,7 т.п.о. две копии EcoRI-фрагмента плазмиды pLD 1 с фрагментом генома вируса гепатитов B подтипаAdW размером 1,35 т.п.о. под контролем промотора белка 7,5 кД ВОВ размером 350 п.о. и общим размером 3,4 т. п. о. уникальные сайты для эндонуклеаз рестрикции: 4BamHI, 3 EcoRI, xba1 и hind 111; генетические маркеры: ampr устойчивость к ампициллину.2. Штамм вируса осповакцины ГКВ N 2126 продуцент HBs Ag вируса гепатита B.