C12N 15/26 — интерлейкин-2

Номер патента: 1684339

Опубликовано: 15.10.1991

Авторы: Агапов, Войтенок, Грэн, Коричнева, Кушниров, Панютич, Скрябин, Смирнов, Тер-Аванесян, Тоневицкий, Ураков, Циманис

МПК: C12N 15/26

Метки: cerevisiae, sасснаrомyсеs, дрожжей, интерлейкина-2, продуцент, человека, штамм

...содержащий структурную область гена интерлейкиначеловека, и в результате получают плазмиду рА 19, Есой-Яа 1 1 - фрагмент (1,8 т.п,н) плазмиды рА 19 клонируют по тем же сайтам в плаэмиду рГТР 4, сОдержащую терминатор транскрипции гена кислой фосфата з ы Р Н 05.В полученной таким образом плаэмиде рУ 116 сайт Есой 1 затем заменяют при помощи линкеров на сайт Вагп М 1, в результате получают плазмиду рУ 116 В. Ващ М 1 - Нпд 111 - фрагмент плаэмиды рУ 116 В клонируют в плазмиду рЗОВ 207 и получают плазмиду рЯ 1711 размером 8,9 т,п,нсодержащую ген ИЛчеловека под контролем препрообласти гена альфа-фактора и способная к репликации в дрожжах.Штамм бВ-Н 28/рЯ,.11711 - продуцент интерлейкиначеловека получен трансформацией клеток Я,сегеч 1 з 1...

Номер патента: 1703693

Опубликовано: 07.01.1992

Авторы: Авот, Грен, Дебабов, Козлов, Косиков, Костров, Мазель, Машко, Мочульский, Носовская, Романчикова, Скворцова, Стеркин, Стронгин, Трухан, Циманис, Черновская, Юрин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: 2-19, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...ДНК длиной =750 п.нвырезает и проводят элюцию ДНК. Для достройки о,;ноцепочечных концов ДНК с помощью Кленовского фрагмента ДНК-полимеразы 1 Е со, выделенный из геля фрагмент обоа;э; .пгают в пробе объемом 20 мкл, содер,кэ.,ей 10 мМ трис-НС 1, рН 8,0, 10 мМ МдС 1:, по ЗО мкМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов Реакцию останавливают прогреванием, ДНК из смеси переосаждают этанолом и растворяют в 20 мкл,Полученный препарат фрагмента плазмиды рАА 1213-23 В используют на дальнейших этапах конструирования для интеграции кодирующей части интерлейкиначеловека в векторную плазмиду рВВ 124 В.3 мкг ДНК плазмиды рВВ 124 В расщепляют рестриктазой ВагпН в пробе обьемс . 12 мкл, содержащей буфер для рестрикци:- Реакцию останавливают фенольной...

Номер патента: 1731066

Опубликовано: 30.04.1992

Авторы: Гюнтер, Петер

МПК: C12N 15/26, C12N 9/78

Метки: креатинамидиногидролазы

...произошла аминокислотая замена в положении 109, а в случае рВТ 119 также в положении 355 заменена Ча 1 и Мет. Благодаря секвенсированию рВТ 19 установлено, что в положении 1063 последовательности в кодиоующей нити О заменен на А (6 - А). так что триплет ОТО превращен в АТ 6. В результате трансформации штаммов рецинентом полученными плаэмидами созданы штаммы Е, соИ, ОЯМ 4105. содержащие плаэмиду рВТ 109, и штамм Е. соИ, ОЯМ 4106, содержащий плазмиду рВТ 119, конститутивно экспрессирующие креатинамидиногидролазу,П р и м е р 1. Клетки Е. со 1 ММ 4105, Е. со 1 ОЗМ 4106 и для сравнения Е. со 1 ОЗМ 3143 выращивают в течение ночи в ферменторах на 1 л.Среда - полная (дрожжи, пентоновый экстракт); 0,40 глюкозы; 100 ммоль/л фосфатного буФера.После...

Номер патента: 1761805

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Данилюк, Кравченко, Кьамынина, Сандахчиев, Синяков

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: pil-221, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкин-2, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, человеческий, человеческого, штамм

...ДНК-полимеразы (фрагмент Кленова) и выдерживают еще 10 мин при 10 С. 10мкл смеси используют для трансформациикомпетентных клеток Е.со 3 М 10 . Из колоний, имеющих фенотип Ар, Тс, выделяютплазмидную ДНК, обозначенную рВ, ипроводят Маги (Есор -ЯаО )-рестрикционный анализ, Правильность структуры нуклеотидов в области сайтов Есори ЯаОподтверждают методом Максама-Гилберта.П р и м е р 2, Конструирование рекомбинантной плазмиды рВ 1:2,20 мкг репликативной формы ДНК фагаМ 1 з гра гидролизуют в 100 мкл буфера 2 50ед, рестриктазы Есор1 ч при 37 С. Есор-Есор-фрагмент (198 п,о,) выделяют в 6%ПААГ,1 мкг ДНК плазмиды рВ -2 гидролизуют в 20 мкл буфера 2 рестриктазой Есогвописанных выше условиях, Смесь 0,25пкмоль линейной формы рВ:2,пкмоль(Есор -Есор...

Номер патента: 1770359

Опубликовано: 23.10.1992

Авторы: Авот, Грен, Мясников, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 1/19, C12N 15/26

Метки: cereuisial, msil, sасснаrомuсеs, sасснаrомyсеs, днк, дрожжей, интерлейкина-2, клетках, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...фаза Т 4 и проводят инкубацию в течение ночи при 4 С, 20 25 30 ампициллина Из полученных описанным способом отдельных клонов трансформантов выделяют плазмидную ДНК методом, аналогичным методу выделения плазмиды рМЯ 46, с тем отличием, что выращивание клетокЕ,сове; дут в 10 мл питательной среды и все объемы растворов соответственно уменьшают в 50 раз по сравнению с указанными. Кроме того, вместо центрифугирования в растворе 35 40 50 55 51015 Полученной таким образом лигазной смесью трансформируют клетки Е.со НВ 101. Для этого клетки Е,со выращивают в 100 мл средыВ при 37 С и интенсивном перемешивании до достижения оптической плотности при 600 нм 0,4 - 0,5. Культуру охлаждают на льду, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10...

Номер патента: 1830945

Опубликовано: 10.08.1999

Авторы: Авот, Грен, Мясникова, Останин, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 15/26, C12N 15/81

Метки: alphoil, cerevisiae, saccharomyces, биосинтез, днк, дрожжах, дрожжей, интерлейкина-2, конструирования, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, секреторный, секрецию, человеческого, штамм

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК plDB(ALPHOIL), обеспечивающая биосинтез и секрецию человеческого интерлейкина-2 в дрожжах, мол.м. 5,3 мДа и размером -8,1 т.п.о., содержащая: - Hind III - Sal I - фрагмент плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора plDB 207 размером 6,3 т.п. о. , включающий бактериальный ген устойчивости к ампициллину, бактериальную область инициации репликации, дрожжевой ген LEU2, а также фрагмент дрожжевой двумикронной плазмиды, обеспечивающий репликацию плазмиды в клетках дрожжей; - Sal I - Bam H1 - фрагмент полилинкера плазмиды pUC 19 размером 20 п.о.; - Bam H1 - Sau 3A - фрагмент промотора гена PHO5 дрожжей плазмиды pVY 18 размером 0,35 т.п.о. с...