Патенты с меткой «плазмидная»

Номер патента: 1586193

Опубликовано: 23.02.1992

Авторы: Попов, Шишкина

МПК: C12N 15/00

Метки: pfra, бактерий, днк, еsснеriснiа, зонд, зонда, идентификации, конструирования, микроба,несущих, плазмидная, плазмиду, продуцент, рекомбинантная, чумного, штамм, штаммов

...Т 1 ЦК Д и Цц ИТа 1 М 1 Ц с Ус 1"ного микроба, депонирован п музее жи 5вьх культур ВНИПГ 1 И "Микроб под номером КМ,Способы получения рекоибццацтцыхплазмидцых ЛНК серии рВБ иллюстри, -руется примером,П р и м е р . Конструировациерекомб 13 нднтнай плаэмиды рВБ 2 и получение штамма Е,со 1 Г К- пропуцецтдзонда для идентификации штаммав чумного микроба, садерждцих плаэмиду,Л, Выделение ДНК рРка из штамма1,ревс 1 з А 1122 (рЕка+) и Д(К векторных плаэмид рВК 327 и рВК 322 иэ 1 тама Е,со 11 С 600. 20Клетки бактерий выр 3 гигдют в бульоне 1.В (рН 7,2) с аэрацией в течениеночи при 28 С (клетки бактерий 1.резьс 1 в или 37 С Е,со 11). Для амплифцкации ДНК векторных плаэмид клетки . 25бактерий Е.са 13. обрабатывают хлорамфениколом 20 лкг/мл с...

Номер патента: 1724691

Опубликовано: 07.04.1992

Авторы: Болдырева, Бурдов, Добрынин, Дрягалин, Иванющенков, Коробко, Микульскис, Некрасова, Филиппов, Чепуркин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/42

Метки: 10fmd, 131-160, pi200-213-р, vpi200-213, бактерий, белка, белок, гибридного, гибридный, днк, еsснеriснiа, кодирующая, плазмидная, продуцент, р204-as, р204а, рекомбинантная, штамм

...Р 204, который представляет собой белок фактора1724691 некроза опухолей человека, слитый черездипептид АзрРго с последовательностьюантигенной детерминанты подтипа А 22 вируса ящура..Для получения бактериального штамма- продуцента иммуногенного полипептидаР 204 плазмидой р 10 РМО трансформируюткомпетентные клетки Е, соИ 3620050,Полученные таким образом штаммы Е.соИ 3620050/р 10 РМО (В КПМ В) характеризуются следующими признаками.Морфологические признаки.Клетки мелкие утолщенной палочковидной формы, грамьтрицательные, неспороносные.Культуральные признаки.Клетки хорошо растут.на простых питательных средах, При росте на агаре "Дифко"колонии круглые, гладкие, прижаты, мутные, блестящие, серые, край ровный, Приросте в жидких средах (на...

Номер патента: 1730150

Опубликовано: 30.04.1992

Авторы: Баев, Горбулев, Рубцов, Сагадиев, Садиев, Скрябин, Шульга

МПК: C12N 1/21, C12N 15/18

Метки: бактерий, гормон, гормона, днк, еsснеriснiа, кодирующая, кодирующий, овцы, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, роgнтrр11, роста, синтез, фрагмент, штамм

...работы отобрали плазмиду, содержащую Есой 1-Н 1 пб И 1-фрагмент с геном ГР КРС размером 601 п.ообозначенную рВОН Ва 112;П р и.м е р 2. Получение фрагмента ДНК,кодирующего ГР овцы.А) Клонирование фрагмента ДНК, коди рующего ГР КРС, в векторе М 13(фиг, 6).10 мкг плазмидной ДНК рВОНВа 12гидролизовали рестриктазами Есой 1 и НпбИ 1 в 50 мкл инкубационной смеси следующего состава: 50 вМ йаС 1, 10 вМ 5 трисНС 1. рН 7,5,10 вМ МяС 2, 1 еМ дитиот-рейтола(ДТТ), 10 ед; рестриктазы Есойи 10 ед. рестриктазы Н 1 пбИ, в течение 2 ч при 37 С.Проводили разделениефрагментов ДНКв 1агарозном геле и выделяли из геля фрагмент раз мером 601 п,оиспользуя стандартный метод.5.мкг ДНК репликативной формы бактериофага М 13 вр 8 гидролизовалирестриктазами...

Номер патента: 1730151

Опубликовано: 30.04.1992

Авторы: Болдырева, Бурдов, Добрынин, Дрягалин, Иванющенков, Коробко, Микульскис, Некрасова, Филиппов, Чепуркин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/42

Метки: бактерий, гибридного, гибридный, днк, еsснеriснiа, кодирующая, м.д, плазмидная, полипептид, полипептида, продуцент, р199, рекомбинантная, штамм

...кодирует иммуногенный пептид Р 199, который представляет собой белок фактора некроза опухолей человека, слитый через дипептид АзрРго с последовательностями антигенных детерминант подтипа Аг 2 вируса ящура,Для получения бактериального штамма - продуцентов иммуногенного полипептида5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Р 199 плазмидой р 9 ЕМО трансформируюткомпетентные клетки Е. соИ 3620050.Полученный таким образом штамм Е.соИ ВКПМ Вхарактеризуется следующими признаками,Морфологические признаки, Клеткимелкие утолщенной палочковидной формы,грамотрицательные, неспороносные,Культуравьные признаки. Клетки хорошо растут на простых питательных средах.При росте на агаре "Дифко" колонии круглые, гладкие, прижаты, мутные, блестящиесерые, край ровный. При...

Номер патента: 1738856

Опубликовано: 07.06.1992

Авторы: Артюшин, Бортюк, Коромыслов, Косенко, Овдиенко, Фомин

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: видов, воvis, дифференциации, днк, других, зонд, мuсовастеriuм, микобактерий, плазмидная, рекомбинантная, рмб-01, тuвеrсulоsis

...как описано в примере 1,Результаты исследований приведенына фиг, 2. Кэк видно из представленных данных, положительные сигналы, свидетельствующие о гибридизации клонированкойпоследовательности с ДНК микобактерий,отмечены в местах нанесения М. Ьочз (точки А 1 и А 2), М, Ьоч 1 з ВСО (точки С 1-С 4). Приэтом не отмечалось положительных сигналов в точках нанесения ДНК микобактерийдругих видов.Полученные данные свидетельствуют, оспецифичности используемого зонда по отношению к ДНК М. Ьог 1 з.П р и м е р 3. Использование выделенного фрагмента ДНК М. Ьоч 1 з ВСО для дифференциации культур М. Ьоч 1 з, М. 1 цЬегсц 1 оз 1 з от культур микобактерий других видов,Для приготовления препаратов культурмикобактерий культуры микобактерий (39 .5...

Номер патента: 1740418

Опубликовано: 15.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Лосева, Озолс, Осе, Пумпен, Пушко, Цибиногин

МПК: C12N 15/10, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: pgcs1-39, s1(20-68, аминокислот, бактерии, вируса, гепатита, днк, конструирования, кор-антиг, плазмидная, поверхности, продуцент, рекомбинантная, с-концевых, штамм, экспонированным, эпитопом

...30 мин при 4 С. Лизат осветляют центрифугированием (10 000 хд, 4 С), НВсАд Л-ргеЯ(20-68) очищают следующим образом. Лизат подвергают фракционированию сульфатом аммония. НВсАд Ь-ргеЯ(20-68) собирают в осадке, полученном при 300 насыщения сульфатом аммония, Осадок растворяют в 0,04 М фосфате натрия, рН 8,0, 0,15 йаС, 0,1 отритоне Х 100 до конечной концентрации белка 25 - 50 мкг/мл, и 6 - 7 мл этого раствора наносят на колонку с Сефарозой С 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х 100. Фракции, проявляющие НВсАд-активность собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50% сульфатом аммония,3, Определение НВсАд-активности методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью...

Номер патента: 1742331

Опубликовано: 23.06.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Озолс, Осе, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48, C12N 15/51 ...

Метки: 51-3, 56-103, антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, кор, крупного, лейкоза, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, рогатого, скота, экспонированным, эпитопом

...разбавляют в 4 раза дистиллированной водой и подвергаютф ра кциони рован и ю сульфатом аммония. 20Н ВсАд Ь - ВО/др 51(56 - 103) собирают восадке, полученном при 30 насыщениясульфатом аммония. Осадок растворяют в0,05 М трис-НС 1, рН 8,0, 0.15 М йаО, 0,1тритоне Хдо конечной концентрации .25белка 25 - 50 мг/мл, и 2 - 4 мл этого раствора наносят на колонку с сефарозой (1,6 х 100см), уравновешенную тем же буфером, нобез тритона Х. Фракции, проявляющиеНВсАд-активность, собирают и используют 30либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-нымсульфатом аммония,П р и м е р 3. Определение НВсАд-активности методом РИД. 35Титр НВсАд определяют с помощью радиальной иммунодиффузии по Ухтерлони,Для этого готовят двухкратные...

Номер патента: 1744110

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 1/21, C12N 15/33, C12N 15/70 ...

Метки: frblv, бактерий, бактериофага, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, оболочки, плазмидная, прод, рекомбинантная, рогатого, скота, слитый, штамм

...50 мМ трис-НС, рН 7,5; 10 мММдС 2, 10 мМ дитиотрейтол, 50 Ы АТР и 10ед, Т 4 ДНК-лигазы, в течение 12 ч при 4 С,Фрагмент инактивируют нагреванием при650 С в течение 15 мин, К реакционной смесидобавляют 100 мкл клеток Е,соИ ВВ 1, обработанных 100 мМ СаС 2 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл), длятрансформации клеток,Отбор клонов осуществляют путем экспресс - выделения ДНК и ее рестрикционного анализа, а также секвенирования.Плазмида с ожидаемой последовательностью получает наименование рГРВ Ч-Р 6,Конструирование рекомбинантнойплазмидной ДНК рЕРВ ЧзР 6,2 мкг плазмиды рРРВ Ч-Г 6, выделенной стандартным методом, расщепляют 3.ед, растриктазы Есо 781 и 3 ед, рестриктазыЗзр 1 в 25 мкл раствора А, содержащего100 мМ трис-НС, рН 7,5; 50 мМ...

Номер патента: 1744111

Опубликовано: 30.06.1992

Авторы: Епифанова, Ксензенко, Кулаков, Новикова, Носкова

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: rv7-ii, бактерий, выявления, днк, еsснеriснiа, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, ротавирусов, содержащая, фрагмент, фрагмента, человека, штамм

...мк КиН; АТФ и 1/10 объема поли-А-полимеразы (0,5 мкг,Степень аденилирования определяют по известной методике, Определяют время реакции, необходимое для присоединения 15 - 20 остатков АМФ. Полученный препарат экстрагируют фенолом и осаждают 2,5 объемами спирта.К препарату полиаденилированной РН К в буфере ТЕ добавляют 5 мкг олиго-ОТ 2-в денатурируют 3 мин при 100 С и охлаждают во льду. Синтез кДНК проводят в буфере, содержащем 50 мМ трис-НС 1, рН 8,3, 50 мМ КС 1, 10 мМ МдС 2, 10 мМ ДТТ, 4 мМ пирофосфата натрия, по 0,5 мМ б АТР, б СТР, б 6 ТР, б ТТР, 10 мк Ки Р АТР в объеме реакционной смеси 100 мкл. Добавляют 25 ед,обратной транскриптазы из вируса миелобластоза птиц и инкубируют 2 ч при 42 С,Цепи РНК удаляют щелочным гидролизом (0,25 М...

Номер патента: 1751206

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Булгакова, Попов

МПК: C12N 15/12

Метки: yersinia, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, реsтis, рек, рекомбинантная, фибринолизин, фибринолизина, штамм

...и подсушивают, Осадок растворяют в буфере для лигировдния (0,066 М трис-НС 1, рН 7,5; 5 мМ МЫС 2, 5 мМ дитиотрейтола и 1 мМ АТФ) с добавлением ДНК лигэзы фага Т(5 ед). Лигировдние проводят 10-12 ч при 16 С.1751206В, Анализ рекомбиыантыых плазмид и форм (ЗДТА) лиэоцим, Обломки клетоквыделение клона, несущего рекомбинанг- осаждают. Супернэтант, содержащийагоную плаэмиду рЕК 4, вые частицы, используют для заражения.Полученную смесь ДНК испольэуютдля Культуру Е, соИ К 802 (110 кл/мл) сметрвнсформации клеток Е. соИ К 802. Транс шиваот с 0,1 мл фаголиэата и инкубируот 1формировайные клетки подраи 1 иваот 1 чэс ч при 28 С, полученную смесь разводятв бульоне СВ и высевают на агэризировэн-бульоном 1.В в 10 раз и 0,1 мл высевают наную среду 1,В с...

Номер патента: 1751207

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Крашенинникова, Пухальский, Смирнов, Теверовская

МПК: C12N 15/21, C12N 15/84

Метки: pst20, альфа, днк, интерферон, кодирующая, плазмидная, растениях, рекомбинантная, табака, человека

...трех штаммов и наносят на нитроцеллюлозный фильтр, который помещают на полноценную питательную среду на 18 ч при 300 С, Бактерии сйывают с фильтра и, высевают на селективную среду. содержащую ампициллин (100 мкг/мл), рифампицин (100 мкг/мл),.спектиномицин (100 мкг/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл), Выросшие через 3 сут колоний на селективной среде при 30 С очищают на той же среде до отдельных колоний й выделяют из клеточной биомассы тотальную ДНК, 10 мкг ДНК переваривают с 20 ед, рестриктазы ВавН 1 1 ч.при 37 С, фракциоййруют путем электрофореза в 0,7 агарозном геле и переносят на нитроцеллолознь 1 й.фйльтр по методу Саузерна. Проводят гйбридизацию иммобилизованной на фильтре ДНК с Р-меченной ДНК .32плазмиды рЯТ 20, отмывают фильтр от...

Номер патента: 1751208

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Бреде, Грен, Дрейлиня, Козловская, Озолс, Платцер, Пумпен, Пушко, Розенталь, Сиаккоу, Соминская, Ульрих

МПК: C12N 15/33, C12N 15/70

Метки: pfrblv, бактерий, бактериофага, белка, белок, вируса, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, крупного, лейкоза, обо, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рогатого, скота, штамм

...при фильтрыинкубируютсмоноклональны 65 С. После очистки ДНК В 9 И 1 - ВагпН фраг- ми анти- др 51 антителами глАК 14 в развемента на агарозном геле ДНК растворяют в дении 1:500 на буфере ТВЯ, содержащем20 мкл воды, Заполнейие концов проводят 55 50 мМ трис-НС 1, рН 7,5, 0,15 М МаС 1, 0,1%в 100 мкл раствора Б, содержащего 0,05 М тритон Х 100, 1% БСА, в течение 15 ч притрис-НС 1, рН 7,5, 0,01 М 9 С 12, 0,01 М дитиот С, После трехкратной отмывки буферомрейтол,0,025 М МаС 1, 100 мкМ сАТР, ОСТР, ТВЯ фильтры инкубируют 2 ч при 200 С снТТ 1- и ОСТР и 10 ед, ДНК-полимеразы Е. коньюгатом пероксидазы с антителами просоИ (фрагмент Кленова, в течение 1 ч при тив иммуноглобулинов мыши в разведении1:500. Фильтры отмывают буфером ТВЯ (3 - но. Иньекции...

Номер патента: 1751209

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстман, Пумпен, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/33, C12N 15/51, C12N 15/70 ...

Метки: 24-5, бактерий, белка, белок, вируса, гепатита, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, кодирующая, кор-ант, кор-антигена, оболочки, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, слитого, слитый, человека, штамм

...клеток к реакци-онной смеси добавляют 100 мкл клеток Е.соП ЯВ 1, обработанных 0,1 М СаС 12 (конечная концентрация - 5 х 10 клеток/мл).9Отбор клоновосуществляют путем рестрикционного анализа плазмидной ДНК,выделенной экспресс-методом. Плаэмида сожидаембй рестрикционной картой получает наименование рНИ 24-5,2. Штамм-продуцент Е. соИ К 802 (рН24 - 5),Штамм-продуцейт получают трансформацией клеток Е. со 11 К 802 рекомбинантнойплазмидной рНИ 24-5, Клетки выращиваютдо оптической плотности ОП 65 о 4-5 в солевой среде М 9 с добавкой, г/л: каэаминовыекислоты 10; глюкоза 2; ампициллин. 0,02,Клетки собирают центрифугированием и лизируют в четырехкратном обьеме буфера,содержащего 0,05 М трис-НС 1, рН 8,0; 0,15М ИаС 1, 0,1% тритон Х 100,...

Номер патента: 1751210

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Берзин, Борисова, Грен, Дрейлиня, Лосева, Лэтч, Меринг, Озолс, Осе, Петцольд, Порстманн, Пумпен, Пушко, Розенталь, Ульрих, Цибиногин

МПК: C12N 15/48, C12N 15/51, C12N 5/10 ...

Метки: 41-22, антиген, бакт, белка, вируса, гепатита, днк, иммунодефицита, кодирующая, конструирования, кор, плазмидная, поверхности, рекомбинантная, фрагментом, человека, штамм, экспонированным

...С 1 4 В (2,1 х 75 см), уравновешенную тем же буфером, но без тритона Х. Фракции, проявляющие РВсАд - активность, собирают и используют либо непосредственно, либо после концентрирования переосаждением 50-ным сульфатом аммония.3. Определение НВсАд - активности Методом РИД,Титр НВсАд определяют с помощью рэдиал ьной иммунодиффузии (Р ИД), Дл я этого готовят двукратные серийные разведения клеточного лизата и титруют против анти-НВс антител человека, В качестве 510 стандарта используют очищенный НВсАд, полученный из рекомбинантных бактерий (1 мг/мл). Результаты титрования методом х 0,75 мм, Злектрофорез проводят в теЗО чение 15 ч при силе тока 7 мА. После злектрофореэа белки переносят нэ нитроцеллюлозные фильтры, инкубируют с моноклональными...

Номер патента: 1761805

Опубликовано: 15.09.1992

Авторы: Данилюк, Кравченко, Кьамынина, Сандахчиев, Синяков

МПК: C12N 1/21, C12N 15/26

Метки: pil-221, бактерий, днк, еsснеriснiа, интерлейкин-2, интерлейкина-2, кодирующая, конструирования, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, человеческий, человеческого, штамм

...ДНК-полимеразы (фрагмент Кленова) и выдерживают еще 10 мин при 10 С. 10мкл смеси используют для трансформациикомпетентных клеток Е.со 3 М 10 . Из колоний, имеющих фенотип Ар, Тс, выделяютплазмидную ДНК, обозначенную рВ, ипроводят Маги (Есор -ЯаО )-рестрикционный анализ, Правильность структуры нуклеотидов в области сайтов Есори ЯаОподтверждают методом Максама-Гилберта.П р и м е р 2, Конструирование рекомбинантной плазмиды рВ 1:2,20 мкг репликативной формы ДНК фагаМ 1 з гра гидролизуют в 100 мкл буфера 2 50ед, рестриктазы Есор1 ч при 37 С. Есор-Есор-фрагмент (198 п,о,) выделяют в 6%ПААГ,1 мкг ДНК плазмиды рВ -2 гидролизуют в 20 мкл буфера 2 рестриктазой Есогвописанных выше условиях, Смесь 0,25пкмоль линейной формы рВ:2,пкмоль(Есор -Есор...

Номер патента: 1768639

Опубликовано: 15.10.1992

Авторы: Каримова, Михайлова, Панферцев, Степаншина, Черепанов

МПК: C12N 15/31

Метки: g824, j-антиген, j-антигена, бактерий, днк, еsснеriснiа, кодирующая, конструирования, микроба, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, чумного, штамм

...100 мкг/мл,Из сконструированного таким образом банка генов У.ремз отбирают клон, дающий положительную реакцию диффузионной преципитации с моновалентной анти- сывороткой (4), Рекомбинантная плазмидная ДНК, выделенная из этого клона, получает наименование р 67 (фиг. 1),Рекомбинантную плазмидную ДНК р 07 используют в качестве донора при создании плазмиды р 682. В качестве вектора при этом используют предварительно созданную плазмиду рР - делеционнь 1 й вариант малой плазмиды рРа 1 У,резбв, в которой фрагмент ЕсоВ - Нпб заменен на фрагмент ДНК, кодирующий ген сас (устойчивости к хлорамфениколу) из плазмиды рВВ 325, 1 мкг ДНК плазмиды р 67 смешивают с 1 мкг ДНК плазмиды рР 1 и инкубируют с рестриктазой Крп (5 ед.) в буфере 1 (трис-НС....

Номер патента: 1770359

Опубликовано: 23.10.1992

Авторы: Авот, Грен, Мясников, Романчикова, Смирнов, Циманис

МПК: C12N 1/19, C12N 15/26

Метки: cereuisial, msil, sасснаrомuсеs, sасснаrомyсеs, днк, дрожжей, интерлейкина-2, клетках, обеспечивающая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, синтез, человека, штамм

...фаза Т 4 и проводят инкубацию в течение ночи при 4 С, 20 25 30 ампициллина Из полученных описанным способом отдельных клонов трансформантов выделяют плазмидную ДНК методом, аналогичным методу выделения плазмиды рМЯ 46, с тем отличием, что выращивание клетокЕ,сове; дут в 10 мл питательной среды и все объемы растворов соответственно уменьшают в 50 раз по сравнению с указанными. Кроме того, вместо центрифугирования в растворе 35 40 50 55 51015 Полученной таким образом лигазной смесью трансформируют клетки Е.со НВ 101. Для этого клетки Е,со выращивают в 100 мл средыВ при 37 С и интенсивном перемешивании до достижения оптической плотности при 600 нм 0,4 - 0,5. Культуру охлаждают на льду, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10...

Номер патента: 1789562

Опубликовано: 23.01.1993

Авторы: Белявская, Веревкина, Долгова, Закабунин, Ильичев, Красноборов, Петренко, Хрипин, Юдина

МПК: C12N 15/48

Метки: антигенными, белка, белок, вич, гибридный, днк, кодирующая, плазмидная, рекомбинатная, свойствами

...анализируют на наличие сайтов для эндонуклеэз рестрикции. Вд 11 иВаа Н 1, Структуру подтверждают секвенированием: полученную плазмидную ДНК, содержащую адапторный фрагмент, обозначают р 2 41. 1 мкг ДНКру 41 расщепляют эндонуклеазой рестрикции ЕсоЮ в течение часа в Я-буфере, После этого добавляют рестриктазу Вд( 1 и также инкубируют в течение часа при 37 С. Препарат депротеинизируют с помощью фенольной экстракции, ДНК осаждают этанолом и ресуспендируют в ТЕ- буфере,Фрагмент размером 98 н, и., содержащий промотор а -амилазы, ЯО-последовательность и расположенный от нее на расстоянии б нуклеотидных пар, инициирующий кодон, получают на смеси Есой - Яац ЗА фрагментов ДНК плаэмиды рЕМВ 303,Выделение индивидуального фрагмента проводят путем...

Номер патента: 1792429

Опубликовано: 30.01.1993

Авторы: Ворсанова, Юров, Яковлев

МПК: C12Q 1/68

Метки: 1-ой, ri-7, альфа, днк, маркирования, плазмидная, предназначенная, рекомбинантная, хромосомы, человека

...инкубацию 5 минут. Клизатудобавляют 1,5 мл 3 М ацетата натрия,осторожно перемешивают раствор и оставляют на час при 0 С. Образующийся осадок 55удаляют центрифугирова нием(1200 об/мин,),нуклеиновые кислоты из супернатантаосаждают 2,5 объемами этилового спирта(.18 С, 30 мин.), Осадок растворяют а 1 мл50 мМ трис-НО (рН 8,0) + ),1 М ацетата натрия и переосаждают этанолом. Процедуру переосаждения повторяют дважды, конечный осадок после аысушивания растворяют в 100 мкл ТЕ,Эндонуклеазную обработку ДНК человека и бактериальных плазмид проводят в буфере ВЕВ, содержащем 10 мМ трис-НС рН,4), 10 мМ М 9 О, 10 мМ йаС и 1 мМ дитиотреитола (РТТ). Полный эндонуклеазный гидролиз ДНК получается при относительной концентрации рестриктаз 5 - 8 ед/мкг ДНК...

Номер патента: 1807081

Опубликовано: 07.04.1993

Авторы: Власов, Вуцан, Монахова, Седых

МПК: C12N 15/31, C12Q 1/68

Метки: pes78vcs, pes78vcs-источник, бактерий, вибрионов, днк, еsснеriснiа, зонда, идентификации, плазмидная, плазмидной, продуцент, рекомбинантная, рекомбинантной, холерных, штамм

...отбирали по признакуАр Тес,Из 12 различных по размерам встроенных фрагментов ДНК вибриона рекомби 40 нантных плазмид (случайная выборка) спомощью эндонуклеазы Нпб В были получены соответствующие фрагменты и испытаны на видоспецифичность в качествемолекулярных зондов, Радиоактивную мет 45 ку (32 Р-АТР или 32 Р-СТРг. Ташкент, межреспубликанское объединение В/О"Изотоп") вводили с помощью ник-трансляции,Гибридизацию проводили на нитроцел 50 люлозных фильтрах после получения на нихотпечатков колоний Ч.стоегае 01 ине 01(150 штаммов), и 12 других видов рода Ч 1 Ьг 1 о(всего 37 штаммов), а также шигелл, сальмонелл, аэромонад, алломонад, псевдомонэд55 и Е,соИ (всего 25 штаммов) и их соответствующей обработки с использованием модифицированного...

Номер патента: 1811538

Опубликовано: 23.04.1993

Авторы: Курепина, Метлицкая, Хмель

МПК: C12N 15/03, C12N 15/30, C12N 15/41 ...

Метки: днк, кодирующая, микроцина, плазмидная, рекомбинантная, синтез

...смеси 50 мкл (состав описан, выше) в 25течение 1 часа при 37 С. После обработкифенолом и переосаждения ДНК этаноломсмесь растворяют в БО мкл буФера, содержащего 6 аМ трис-НС рН 7,9,6 аМ МцСг, 150вМ 0;02 тритона Х 1 ОО, и инкубируют с 10 30ед, рестриктазы ВавН 1 час при 37 С.Фрагмент ДНК размером 5,3 т.п,н. элюируют после фракциоиирования злектрофорезом в.0,7% геле легкоплаакой агарозы, ДНКрастворяит в 10 мкл воды, , 353 мкл раствора ДНК линеаризомнойплазмиды рВВ 325 сливают с 10 мкл раствора фрагмента плазмиды р 1, содержащегогены синтеза микроцина, добавляют 1,5 мклбуфера (0,5 М трис-НС рН 7,9, 0,1 М МоСг, 400,1 М ОТТ, 1 гпМ АТР) и 1 мкл липазы иинкубируют 3 чзса при 16 С,,Плазмиду передают методом трансформации в клети штамма Е....

Номер патента: 1815273

Опубликовано: 15.05.1993

Авторы: Бабенко, Голубков, Князев, Максимишина, Никифорова, Плужникова, Серова, Суворов, Тотолян

МПК: C12N 15/12

Метки: hras=1, hrast, днк, железы, карциномы, кодирующая, конструирования, онкоген, плазмидная, рекомбинантная, человека, щитовидной

...НВАЯ 1 размером 6,7 т.п.н, и ДНК вектора рЯР 64, линеаризованного эндонуклеазой Ваа Н 1, лигировали с помощью ДНК-лигазы Е, соИ, Полученной рекомбинантной ДНК трансформировали компетентные клетки Е. соИ НВ 101, Колонии, устойчивые к ампициллину, дающие положительную гибридизацию с рЕ 1 пробой, отбирали, выделяли ДНК и характеризовали ее рестрикционным анализом. На фото.1 представлены результаты электрофореза, с помощью которого определены размеры плазмиды рНВАЗТЬ-З, вставки ДНК онкогена НВАЯ 1 человека (дорожка 2) и вектора рЯР 64 (дорожка 4). На фото,2 изображена схема рекомбинантной плазмидной ДНК рНВАЯТЬ-З, иллюстрирующая расположение вставки ДНК онкогена НВАЯ 1 человека в векторе рЯР 64, промотора фага ЯР 6, полилинкера фага М 13 и...

Номер патента: 1816797

Опубликовано: 23.05.1993

Авторы: Бобков, Гараев, Шуленин

МПК: C12N 1/21, C12N 15/48

Метки: антигенными, бактерий, белка,обладающего, вируса, гибридного, днк, еsснеriснiа, иммунодефицита, конструирования, определяющая, плазмидная, продуцент, рекомбинантная, рр1, свойствами, синтез, человека, штамм

...ДНК проводят методом равновесного центрифугирования в градиенте плотности СзС 1 с бромистым этидием (1 мкг/мл),Для получения плазмиды рР 1 фрагмент Н 1 пб 111 - Е.сой 1 плазмиды рйТЗ переклонируют в вектор рцй 290 по сайту Нпб 111, С этой целью 10 мкг ДНК плазмиды инкубируют с 30 ед. эндонуклеазы Е.соЯ в буфере, содержащем 100 мМ йаС 1, 10 тМ МдМ 12, 10 аМ трис-НС 1 рН 7,5, 1 щМ ДТТ, в течение 1 ч при 37 С. Затем добавляют 1/10 объема ЗМ ацетата йэ и осаждают ДНК 2,5 объемами этилового спирта на ценрифуге (10000 д, 10 мин, 4 С). Осадок высушивают и растворяют в буфере 10 мМ трис-НС 1 рН 8,0 и 5 мМ ЭДТА. Полученный препарат лигируют с 50 мМ адаптора Е.сой-Нпд 11 с помощью ДНК-лигазы фага Т 4 (30000 единиц/мл),из расчета 1 мкл...

Номер патента: 1490963

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Беляев, Вторушина, Данилюк, Добрикова, Куличков, Малыгин, Мамаев, Матвеев, Плетнев, Прессман, Приходько, Путинцева, Синяков, Хромых, Шевлягина, Ямщиков

МПК: C12N 15/00

Метки: вакцины, днк, живой, клещевого, кодирующая, конструирования, плазмидная, полипептидов, против, р28сме, рекомбинантная, рекомбинантной, синтез, энцефалита

...Ввш Н 1 зндонуклеаз рестрикции, Из полученной таким образомплазмиды р 2823, содержащей правильно состыкованные 28 к промотор иструктурные гены ВКЭ, выделяют ВвпН 1 ЕсоК 1 фрагмент ДНК длиной 2304 п.о,Фрагмент состоит из ВапН 1-НдпйШфрагмента ДНК плвзмиды рВК 322 длиной 346 п.о., НпйП 1-ЕсоК 1 синтетического Фрагмента ДНК длиной74 п.о, и ЕсоК 1-ЕсоК 1 фрагментаДНК длиной 1784 и.о содержащегогены ВКЭ, Для окружения промотораи генов ВКЭ участками ТК-геня ВОВвыделенный ВвшН 1-ЕсоКЕ Фрвгмент лигируют с большии ВвпН 1-ЕсоК 1 фрагментом ДНК вектора р ЧАК 15 и лигазной смесью трансФормируют компвтентные клетки Е. со 11. НВ 101. Искомые клоны идентифицирует методомДНК - ДНК гибридизации на Р-мечез 2ный Рьс 1-РвС 1 фрагмент к ДНК ВКЭ,Наличие в...

Номер патента: 1515696

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Аммосов, Бакланов, Беляев, Дмитриев, Матвеев, Миронова, Плетнев, Прессман, Путинцева, Шевлягина

МПК: C12N 15/00

Метки: 11сме, антигенов, вирусов, гепатита, днк, клещевого, конструирования, обеспечивающая, одновременную, плазмидная, рекомбинантная, экспрессию, энцефалита

...при 37 С в течение 1 ч, после чего выделяют ВащН 1-ЕсоК 1 - Фрагмент ДНК длиной 5723 п,о., соответствующий по электрофоретической подвижности в 073 агароэном геле линейной Форме плаэмиды р 7,58.Из плаэмиды р 311 выделяют ВалН 1 - ЕсоК 1 - фрагмент ДНК длиной 2682 п,о содержащий С, М, Е гены вируса клеще" вого энцефалита, состыкованные с 11 к промотором и клонируют его в Вап Н 1 - ЕсоК 1 линеаризованной плазмиде р 758Клон, содержащий в составе вектора рЧАК 15 как ген НВаАВ (Ваи 111 фрагмент 1279 п.о.), так и состыкованные с 11 к промотором С, М, Е гены (ВаН 1 - ЕсоКТ Фрагмент 262 п.о,) обозначили р 7,55 11 СИЕ.ДНК ппазмиды р 758 11 СИЕ используют для трансформации клеток почек зеленой мартышки СУ, зараненных вирусом осповакцины штамма...

Номер патента: 1575576

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Аммосов, Беляев, Дмитриев, Зарвина, Мезенко, Микрюков, Миронова, Путинцева, Рукавишников, Рябинин, Сабиров, Самуков, Семенова, Синяков, Черный

МПК: A61K 39/29, C12N 15/00

Метки: вируса, ген, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, осповакцины, плазмидная, рекомбинантная, рекомбинантного, штамм, экспрессирующий

...включает 3 стадии: во-первых, сорбцию антител к НВЯАЕ 50 на носителе; во-вторых, связывание антигена с закрепленными антителами при иякубации пробы с носителем и, в третьях, проявление связавшегося а антигена инкубацией с меченными 55 йодомиммуяоглобулинами против НВБАЕ, Для анализа используют полистирольные планшеты для имунологи" ческих реакций.Ленинградский завод медпрепаратов), Таким образом твердофазным носителем служат стенкилунок планшета.Для сорбции антител в каждую лунку планщеты наносят по 30 мкл раствора иммуноглобулинов против НВЯАя сконцентрацией 0,02 мг/мп в 0,02 Мнатрийфосфатном буфере рН 1,8 и иякубируют при комнатной температурев течение 2-3 ч, Лунки промывают3 раза забуференным Физиологическимраствором ,ЗФР) -...

Номер патента: 1651555

Опубликовано: 07.07.1993

Авторы: Беляев, Дмитриев, Рукавишников, Синяков

МПК: C12N 15/51, C12N 15/85

Метки: антиген, вируса, гепатита, днк, кодирующая, конструирования, плазмидная, рекомбинантная

...наличие антигена вируса гепатита В иммунофер.ментным методом с пероксидазой хрена,при этом в качестве контроля сраонения ис 15,пользуют рекомбинантный НВсА 9, полученный в Е.со 1. Во всех пробах обнаруженантиген, причем уровень экспоессии последнего составляет 2000 нг на 10 инфици.рованных клеток СЧ- за 48 ч при полном20 цитопатическом действии, что позволяетрассматривать полученную плазмиднуюДНК как субстанцию, потенциально пригодную для изготовления вакцины гротив гепатита В,25 П р и м е р 3. Клеточный иммунный ответопределяют с помощью общепринятой реакции бласттрансформации лимфоцитов(РБТЛ), Для этого иммуниэируют подкожнов корень хвоста линейных мышей ВА 1. В/ с30 массой 8-10 г дозой 2-4 х 10 о,о. е/мышь,Спленоциты выделяют на...

Номер патента: 1709731

Опубликовано: 30.07.1993

Авторы: Бумялис, Давыдов, Добрынин, Коробко, Филиппов, Чумаков, Шингарова, Янулайтис

МПК: C12N 15/12, C12N 15/77

Метки: escherichiacol, plt21, бактерий, днк, кодирующая, лимфотоксина, плазмидная, полипептид, полипептида, продуцент, рекомбинантная, свойствами, человека, штамм

...лимфотоксинэ человека . промывку смолы смесью тетрагидрофуранвплазмидой р Т 21 трансформируют момпв-пиридий- вода(5;3:2). После окончания синтентные клетки Е.со Ы 20050, . теза защитные группы удаляют последоеаПолученный таким образом цтамм тельной обработкой тиофенолятомЕ,со 3620050/р Т 21 характеризуетсяеле+ 55 триэтиламмония и конц, аммиаком. Придующими признаками. зтом происходит Отделение алигонуклеаотиМорфологические признаки, Клетки да от носителя. 5-Диметоксвтритильнуюмелкие, утолщенной палочковиднай формы, группу удаляют кислотной обработкой играмотрицательные. неспоронасныволигануклеотид бчищают электрофорозом в20% ПААГ, содержащем 7 М мочевину. Вы- Аликвоту реакционной смеси используют ход 1-5 о.е, для трансформации...

Номер патента: 1628527

Опубликовано: 30.10.1993

Авторы: Азизбекян, Баранов, Загнитко, Залунин, Карасин, Остерман, Степанов, Стеркин, Тюрин, Фрунджян, Хачатурян, Цыганков, Честухина, Чистосердов

МПК: A01N 63/00, C12N 15/32

Метки: 35а, flagellatum, methylobacillus, бактерий, днк, кодирующая, плазмидная, продуцент, раусi, рекомбинантная, токсин, токсина, штамм, энтомоцидного, энтомоцидный

...проводят следующим образом: выращивают Е,со 11 С 600 на средеВ до плотности ОДуо=1,0 едпри 1=37"С, 1,5мкл клеточной суспензии. охлаждают иосаждают центрифугированием, супернатант выбрасывают. Все дальнейшие процедуры проводят при 1=0 - 2 С. Клеткисуспендируют в 1 мл охлажденного 50 мМСаС 1 и инкубируют 20 мин, Затем клеткиосаждают центрифугираванием, супернатант отбрасывают. Осадок клеток суспендируют в 100 м кл 50 м М Са С 12, доба вля ют 5 м кл лигазнай смсси и выдерживают 40 мин, Затем клетки переносят на 42 С на 2 мин и добавляют 1 млВ среды, Клетки в среде инкубируют 1 ч без аэрации при 370 С, а затем высеваются на чашки, содержащие 0,4,/О глюкозы, 80 мкг/мл треонина и лейцина, 1 мкг/мл тиамина, 100 мкг/мл Ар и Яп. Из...

Номер патента: 2003689

Опубликовано: 30.11.1993

Авторы: Азизбекян, Дебабов, Йомантас, Козлов, Попов, Стеркин

МПК: C12N 15/32, C12N 15/56, C12N 15/75 ...

Метки: amyloliquefaciens, bacillus, альфа, альфа-амилазы, амилазу, днк, кодирующая, плазмидная, продуцент, рва1418, рекомбинантная, штамм-бактерий

...содержит 10 мл 1%- ного растворимого. крахмала, растворенного в 15 мМ йа-К-фосфатном буфере, рН 6,0, и 5 мл исследуемого образца (разведенного в 2 мМ ацетатном буфере, рН 6,0, 03, мМ СаС 2, 100 мМ МаС), Контроль вместо исследуемого образца содержит 5 мл буфера для разведения фермента, Пробы инкубируют при 30 С 10 мин. Реакцию останавливают добавлением к 1 мл реакционной смеси 10 мл 0,1 М раствора НС. Из полученной смеси отбирают 1 мл и переносят в 10 мл раствора йода, содержащего 0,0025% Л и 0,025% КЛ, Реакционную смесь выдерживают при 20 С.20 мин и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 656 нм, Контрольный раствор имеет синюю окраску, а опытные образцы приобретают фиолетовый цвет, Контрольный раствором при...