C12N 15/84 — Ti-плазмиды

Номер патента: 1751207

Опубликовано: 30.07.1992

Авторы: Крашенинникова, Пухальский, Смирнов, Теверовская

МПК: C12N 15/21, C12N 15/84

Метки: pst20, альфа, днк, интерферон, кодирующая, плазмидная, растениях, рекомбинантная, табака, человека

...трех штаммов и наносят на нитроцеллюлозный фильтр, который помещают на полноценную питательную среду на 18 ч при 300 С, Бактерии сйывают с фильтра и, высевают на селективную среду. содержащую ампициллин (100 мкг/мл), рифампицин (100 мкг/мл),.спектиномицин (100 мкг/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл), Выросшие через 3 сут колоний на селективной среде при 30 С очищают на той же среде до отдельных колоний й выделяют из клеточной биомассы тотальную ДНК, 10 мкг ДНК переваривают с 20 ед, рестриктазы ВавН 1 1 ч.при 37 С, фракциоййруют путем электрофореза в 0,7 агарозном геле и переносят на нитроцеллолознь 1 й.фйльтр по методу Саузерна. Проводят гйбридизацию иммобилизованной на фильтре ДНК с Р-меченной ДНК .32плазмиды рЯТ 20, отмывают фильтр от...

Номер патента: 1820914

Опубликовано: 07.06.1993

Авторы: Барбара, Джон, Нарендра, Рой, Саверио

МПК: C12N 15/84

Метки: двудольных, растений, сульфонилмочевине, устойчивых

...5 мин перед тем, как удалить раствор, Затем чашки закрепляют лентой Тее Таре (ЗЬалтгосМ Ясепбйс ЯресаИу) с двух сторон чашки и инкубируют в течение 2 суток при смешанном освещении для растений, а именно флуоресцентном и "бго аги ЯЬо" (Оепега Еес(гс) при температуре около 25 С.Чтобы освободить растительные культуры от АцгоЬастегогп и отобрать.для выращивания трансформированных клеток томата, зксплантаты семядолей переносят в(РЬагваса) промыванием 5 раз колоночным буферным раствором (100 мМ КН Р 04, р Н 7,5, 0,5 мМ МдС 2, 10% глицерина, 1 мМ пирувата).5, Для засева зкстракционного супернатанта прибавляют холодный насыщенный раствор (Н 4)2 Я 04 с получением 50% фракции. Инкубируют на льду в течение 30 мин,6, Центрифугируют экстракт в...

Номер патента: 1830081

Опубликовано: 23.07.1993

Авторы: Брайан, Нилс, Стэнли, Хармут

МПК: C12N 15/52, C12N 15/84

Метки: активированного, белка, рекомбинантного, человека

...10 Х, 1 мкл лигазы Т 4 ДНК ( 500 ед) и 82 мкл Н 2 О при 16"С втечение ночи, Сшитая ДНК представляет собой желаемую плаэмиду рзч 2- Н РС 8.Клетки Е,соИ К 12 ЙР ,Вйе В) превращают в компетентные клетки для трансформации в соответствии с процедурой, описанной для Е.соИ К 12 НВ 101, Сшитую ДНК, полученну;о как описано выше, используют для трансформации данньх клеток, а аликвоты трансформантов высеваот на чашки с 1-агаром, содержащим 100 мкг/мл ампициллина, Затем чашки инкубируют при 37"С, Трансформанты Е,соИ К 12 КВ 1/рзч 2-Н РС 8 исследуют путем анализа их ДНК, Получают ДНК плазмидь рзч 2- НРС 8 из трансформантов,50 мкг плаэмиды рзч 2-НРС 8 растворяют в 10 мкл реакционного буферного раствора 1 ОХ Н 1 пд И 1, 5 мкл (50 ед) фермента Ни( 1 И...

Номер патента: 1427833

Опубликовано: 15.03.1994

Авторы: Андрианов, Калиев, Пирузян

МПК: C12N 1/21, C12N 15/84

Метки: agrobacterium, tumefaciens, бактерий, векторная, генов, днк, переноса, плазмидная, рак, растения, рекомбинантная, штамм

1. Способ переноса генов в растения с помощью плазмид Agrobacterium, включающий инфицирование растений бактериями, несущими две плазмиды, одна из которых - мутантная неонкогенная Ti-плазмида A. tumefaciens, индуцирующая перенос в растительные клетки мутантной неонкогенной Ti - T - ДНК, не вызывающая опухолевой пролиферации клеток растений, а другая -Ri-плазмида дикого типа A. rhizogenes, вызывающая у чувствительных растений фотогормоннезависимую пролиферацию корней, состоящих только из генетически однородных трансформированных растительных клеток, включивших в геном Ri - T - ДНК, получение трансформированных генетически однородных клеток растений, включивших в геном одновременно Ri - T - ДНК и мутантную Ti - T - ДНК, регенерацию из...

Номер патента: 1547316

Опубликовано: 15.03.1994

Авторы: Андрианов, Метт, Пирузян, Юсибов

МПК: C12N 1/21, C12N 15/84

Метки: agrobacterium, ptivy4, tumefaciens, бактерий, днк, используемый, плазмидная, предназначенная, растений, рекомбинантная, трансгенных, трансформации, штамм

1. Способ получения трансгенных растений, заключающийся в том, что листовой материал растения инфицируют штаммом Agrobacterium tumefaciens, селекционируют по признаку устойчивости к канамицину, отбирают и укореняют трансгенные растения, отличающийся тем, что, с целью ускоренного укоренения трансгенных растений при черенковании, для инфицирования используют штамм Agrobacterium tumefacens ВКПМ В - 4428, несущий ген глюкозоизомеразы Escherichia coli, а отбор трансгенных растений проводят с помощью блоттинг-гибридизации геномной ДНК растений с радиоактивным зондом гена глюкозоизомеразы и определения ферментативной активности глюкозоизомеразы e. coli с помощью цистеин-карбозольного метода.2. Рекомбинантная плазмидная ДНК pTi VY 4,...